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异种化人肾细胞癌特异性抗原G250真核表达载体的构建及表达 被引量:2
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作者 田仁礼 高江平 +8 位作者 阎谨琦 贾锐 张亮 刘宁 王浩 韩刚 董金凯 李韧 于继云 《生物技术通讯》 CAS 2009年第2期151-154,共4页
目的:构建含有人肾细胞癌特异性抗原G250(CAⅨ)主要T细胞表位区域、猴和鼠CAⅨ部分片段区域融合基因tG250的真核表达质粒,并在猴肾COS7细胞中表达。方法:通过基因合成和PCR技术构建人、猴和鼠G250区域融合基因tG250,将其插入含有人Igκ... 目的:构建含有人肾细胞癌特异性抗原G250(CAⅨ)主要T细胞表位区域、猴和鼠CAⅨ部分片段区域融合基因tG250的真核表达质粒,并在猴肾COS7细胞中表达。方法:通过基因合成和PCR技术构建人、猴和鼠G250区域融合基因tG250,将其插入含有人Igκ链前导信号肽(sig)、人IgG-Fc和糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定信号肽融合基因序列的细胞膜锚定修饰真核表达载体pCI-Fc-GPI中,继而又将酶切后的sig-tG250-Fc-GPI融合基因导入含有细小病毒内部核糖体结合位点(IRES)基因且可以共表达人GM-CSF和B7.1融合基因的真核表达载体pVAX1-IRES-GM/B7中;将构建的重组质粒pVAX1-sig-tG250-Fc-GPI-GM/B7转染COS7细胞,利用流式细胞仪和免疫荧光检测其表达。结果:测序结果表明tG250融合基因序列正确,PCR和酶切鉴定证明已将其连入真核表达载体pVAX1-IRES-GM/B7中;流式细胞仪和免疫荧光的检测结果显示,重组质粒pVAX1-sig-tG250-Fc-GPI-GM/B7在COS7细胞中得到很好的表达。结论:构建了重组质粒pVAX1-sig-t G250-Fc-GPI-GM/B7,且在COS7细胞中有效表达,为以G250为靶点的抗肾细胞癌基因疫苗的构建与功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 肾细胞癌 基因疫苗 真核表达 G250
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抗肾细胞癌异种化G250抗原基因疫苗的构建及真核表达
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作者 田仁礼 高江平 +6 位作者 阎谨琦 贾锐 张亮 李韧 韩刚 董金凯 于继云 《军医进修学院学报》 CAS 2009年第2期191-193,共3页
目的:构建含有人肾细胞癌特异性抗原G250主要T细胞表位区域、猴和鼠G250部分片段区域融合基因tG250的真核表达质粒,并在猴肾COS7细胞中表达。方法:通过基因合成和PCR技术构建人、猴和鼠G250区域融合基因tG250,将其插入含有人Igκ链前导... 目的:构建含有人肾细胞癌特异性抗原G250主要T细胞表位区域、猴和鼠G250部分片段区域融合基因tG250的真核表达质粒,并在猴肾COS7细胞中表达。方法:通过基因合成和PCR技术构建人、猴和鼠G250区域融合基因tG250,将其插入含有人Igκ链前导信号肽(sig)、人IgG-Fc和糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定信号肽融合基因序列的细胞膜锚定修饰真核表达载体pCI-Fc-GPI中;将重组质粒pCI-Fc-tG250-GPI转染COS7细胞,流式细胞仪和免疫荧光检测其表达情况。结果:tG250融合基因经测序正确,PCR和酶切鉴定证明已成功连入真核表达载体pCI-Fc-tG250-GPI中;流式细胞仪和免疫荧光检测显示,重组质粒pCI-Fc-tG250-GPI在COS7细胞中得到很好的表达。结论:成功构建了重组质粒pCI-Fc-tG250-GPI,且在COS7细胞中可以有效表达,为以G250抗原为靶点基因疫苗的后续功能研究打下良好基础。 展开更多
关键词 肾肿瘤 疫苗 DNA 基因表达 G250/MN/CA
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