白细胞介素10与沙门菌接合性质粒介导细菌生物膜的形成

背景:既往研究发现接合性质粒pRST98可促进其宿主菌生物膜的形成,携带pRST98的菌株感染细胞和实验动物后,可促进白细胞介素10的分泌和表达。目的:体外研究不同质量浓度白细胞介素10与接合性质粒pRST98对鼠伤寒沙门菌生物膜形成的相互影响。方法:体外建立鼠伤寒沙门菌标准株χ3306、突变株χ3337及接合株χ3337/pRST98 3组生物膜模型,3组分别加入0(空白对照),1,10,100μg/L白细胞介素10,通过结晶紫染色半定量法、共聚焦激光扫描显微镜分析和扫描电镜观察,比较不同质量浓度白细胞介素10对携带和不携带接合性质粒pRST98的鼠伤寒沙门菌生物膜形成的影响。结果与结论:13组组内比较:与空白对照组比较,1,10μg/L白细胞介素10均能促进鼠伤寒沙门菌的聚集,提高生物膜形成能力,且10μg/L质量浓度效果更明显;100μg/L白细胞介素10抑制鼠伤寒沙门菌生物膜的形成。23组组间比较:在同一白细胞介素10质量浓度下,接合株χ3337/pRST98组A570高于标准株χ3306组、突变株χ3337组。结果说明1,10μg/L白细胞介素10可促进生物膜的形成,且在携带接合性质粒pRST98的情况下促进作用更明显。

伤寒沙门菌质粒pR_(ST98)对细菌生物膜形成能力及毒力的影响

目的探讨伤寒沙门菌质粒pRST98对鼠伤寒沙门菌和大肠埃希菌生物膜形成能力及毒力的影响。方法将伤寒沙门菌质粒pRST98接合转移导入鼠伤寒沙门菌和大肠埃希菌,制备单个游离悬浮状态下的细菌菌液;将接合导入质粒pRST98前、后的受试菌分别在相同条件下形成生物膜,制备生物膜状态下的菌液。浮游细菌与生物膜形成细菌调节至同一浓度后分别与CT26细胞进行黏附侵袭、血清杀菌以及抗巨噬细胞吞噬实验,比较不同状态下受试菌毒力的差异。结果伤寒沙门菌质粒pRST98能够促进鼠伤寒沙门菌和大肠埃希菌形成生物膜;黏附实验显示除大肠埃希菌外,鼠伤寒沙门菌在生物膜状态下对CT26细胞的黏附力明显增强,形成生物膜的细菌对CT26细胞的侵袭力明显下降;生物膜状态的鼠伤寒沙门菌和大肠埃希菌在兔血清和豚鼠血清中的存活率均高于浮游状态;生物膜状态下的鼠伤寒沙门菌在巨噬细胞内的存活率明显高于浮游状态下的细菌。结论质粒pRST98能够促进鼠伤寒沙门菌和大肠埃希菌形成生物膜;生物膜的形成能促进细菌对细胞的黏附,同时抑制细菌对细胞的侵袭力;增强细菌抵抗血清杀菌及巨噬细胞吞噬的能力。

伤寒沙门菌质粒对巨噬细胞自噬过程的影响

为研究伤寒沙门菌质粒pRST98对人巨噬细胞THP-1自噬过程的影响,以携带伤寒沙门菌质粒pRST98的野生株ST6、消除pRST98的突变株ST6-ΔpRST98和将pRST98经接合转移的回补株ST6-c-pRST98为受试菌,与THP-1共培养建立感染模型,并加入自噬作用阻断剂氯喹(CQ)进行干预。首先测定CQ单独作用对细胞及细菌的影响,确定CQ最适浓度;在细菌和细胞共作用后的不同时间点收集细胞,通过蛋白免疫印迹法(WB)和mRFP-GFP-LC3质粒转染法检测细胞LC3Ⅱ蛋白、p62蛋白、自噬体及自噬溶酶体的变化。结果显示,30μmol/LCQ对细胞自噬的阻断效果明显,且细胞存活率超过50%,对细菌也无明显影响。WB结果显示,用该浓度CQ干预后,ST6-ΔpRST98感染组细胞的LC3Ⅱ及p62表达量上升程度显著高于野生株ST6组及回补株ST6-c-pRST98组;CQ干预组3株受试菌感染细胞LC3点状结构数量均高于未加CQ组,且ST6-ΔpRST98感染组细胞的点状结构数量明显增加。以上结果提示,伤寒沙门菌质粒pRST98在自噬前期发挥作用,早于溶酶体降解的过程。

某地不同来源肺炎克雷伯菌的耐药性和分子特征分析

【目的】了解肉类食品和腹泻样本中分离的肺炎克雷伯菌的药物敏感性和分子分型特征。【方法】对上海市金山区2020—2021年市场随机抽样采集的118份肉类(鸡肉和猪肉)和该区医院门诊1499份腹泻样本分离的71株肺炎克雷伯菌,经鉴定后通过微量肉汤稀释法进行药敏试验,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析其同源性。【结果】肉类食品的肺炎克雷伯菌总体检出率为11.86%(14/118),其中鸡肉检出率20.93%(9/43),高于猪肉检出率6.67%(5/75),不同肉类检出差异有统计学意义(χ^(2)=5.317,P<0.05)。腹泻样本的肺炎克雷伯菌检出率为3.80%(57/1499)。菌株对氨苄西林的耐药率最高,达76.06%。人源肺炎克雷伯菌多重耐药株有5株,占8.77%。食源肺炎克雷伯菌多重耐药株有2株,占14.28%;食源性耐亚胺培南1株。71株肺炎克雷伯菌聚类分析得到70种带型,相似度为39.4%~100.0%,总体呈基因多样性。【结论】金山区食源和腹泻样本中分离的肺炎克雷伯菌多重耐药程度较严重,PFGE带型较分散。建议加强对人群和动物性食品中该病原菌的监测,警惕多重耐药株的出现和食物链传播风险。

2021—2022年上海市金山区人源与禽源空肠弯曲菌的耐药性及多位点序列分型

【目的】了解上海市金山区人源与禽源空肠弯曲菌的耐药性现状及多位点序列分型(MLST)情况。【方法】收集2021—2022年金山区腹泻患者的粪便样品,采集金山区2家禽类养殖场禽类及相关样品进行空肠弯曲菌检测,对检出空肠弯曲菌进行微量肉汤稀释法药敏试验测定最小抑菌浓度(MIC),并选取部分菌株进行全基因组测序和MLST分析。【结果】共收集腹泻病样品823件,检出空肠弯曲菌32株,检出率3.89%。禽类相关样品600件,检出空肠弯曲菌62株,检出率10.33%。人源多重耐药达93.75%(30/32),禽源多重耐药达100.00%(62/62)。人源与禽源空肠弯曲菌耐药率排名前4位分别为阿奇霉素(人源100.00%、禽源100.00%),萘啶酸(人源93.75%、禽源87.10%),环丙沙星(人源90.63%、禽源98.39%),四环素(人源84.38%、禽源98.39%)。人源空肠弯曲菌中耐药性相对较低者为红霉素、氯霉素、泰利霉素。禽源空肠弯曲菌中耐药性相对较低者为红霉素、克林霉素、氟苯尼考。MLST分析显示选取的16株菌分为9种ST型,其中禽源空肠弯曲菌进化关系比较集中,人源空肠弯曲菌比较分散。且发现1株禽源空肠弯曲菌与2株人源空肠弯曲菌有较近的亲缘关系。【结论】该地区腹泻病患者中空肠弯曲菌感染严重,检出率仅次于沙门氏菌及副溶血性弧菌。禽源空肠弯曲菌感染比较普遍,两者耐药均较严重,应该加强监测与控制。MLST分析显示禽源与人源空肠弯曲菌均出现新序列型别,说明出现新的变异,须持续监测,避免新菌株的出现而引起流行。禽源与人源出现亲缘关系较近的分离株,揭示空肠弯曲菌从禽向人传播的证据,应该加强养殖场相关样品的空肠弯曲菌监测。

某医院综合性重症监护病房环境物体表面金黄色葡萄球菌和鲍曼不动杆菌分布特征及耐药性分析

目的 了解某医院综合性重症监护病房(GICU)环境物体表面和医护人员手表面金黄色葡萄球菌(SA)和鲍曼不动杆菌(AB)的分布特征及耐药性。方法 以2018—2020年该院GICU 6类环境物体表面和医护人员手样本进行目标病原菌分离,并参照美国临床和实验室标准协会(CLSI)2019年标准判定药敏结果,使用SPSS 22.0软件进行数据统计分析。结果 共检测1 040件样本,SA和AB检出率分别为6.92%和7.69%。7类调查对象中患者直接接触物品SA和AB检出率均居首位,分别为12.50%和28.75%。SA对大环内酯类、β-内酰胺类和喹诺酮类抗菌药物普遍耐药,但对利奈唑胺、呋喃妥因、利福平等药物敏感;AB对各类抗菌药物普遍耐药,但对复方新诺明敏感。结论 该院应加强对GICU内患者直接接触物品表面消毒,应根据药敏结果及时调整临床用药策略。

2014—2020年金山区食源性疾病监测结果

目的分析2014—2020年上海市金山区食源性疾病的流行特征,为制定食源性疾病公共卫生策略提供依据。方法通过金山区16家监测点医院收集2014—2020年金山区食源性疾病病例资料,包括病例基本信息、临床症状、可疑饮食暴露史和疾病诊断等。描述性分析食源性疾病病例的人群分布、时间分布、地区分布、可疑食品暴露史和病原学特征。结果2014—2020年金山区共报告食源性疾病1060例,其中感染性病例1057例,占99.72%;中毒性病例3例,占0.28%。男女性别比为0.94∶1。年龄以15~<45岁为主,504例占47.55%;职业以务工和务农为主,分别为402例和218例,占37.92%和20.57%。病例集中在5—10月,呈2个发病高峰,分别为8月和5月。可疑食物暴露以肉与肉制品为主,215例占20.28%;可疑食物暴露场所主要为家庭,363例占34.25%。采集标本712例,检出阳性164例,阳性率为23.03%。其中副溶血性弧菌123例,占75.00%,阳性率为17.84%;沙门菌26例,占15.85%,阳性率为3.65%。结论2014—2020年金山区食源性疾病夏季高发,以感染性病例为主,青年、务工和务农人员是高发人群,副溶血性弧菌和沙门菌为主要病原体。

2018-2019年金山区食源性致病菌污染情况

目的了解2018-2019年金山区食源性致病菌污染情况,为预防食源性疾病的发生提供预警。方法根据国家标准及风险监测工作手册对菜场、超市、餐饮店、网店等售卖的不同食品种类及熟肉制品生产加工环节进行致病菌检测。结果 612件食品共检出致病菌60株,检出率9.80%。2018年检出率10.15%(27/266),2019年检出率9.54%(33/346),两者检出差异无统计学意义(χ^(2)=0.01,P>0.05)。不同季度检出差异无统计学意义(χ^(2)=4.44,P>0.05)。所有检出致病菌中,副溶血性弧菌检出率最高(35.23%),其次是单核增生李斯特菌(3.40%)、金黄色葡萄球菌(2.32%)、肠产毒性大肠埃希氏菌(2.08%)、蜡样芽胞杆菌(1.20%)、鼠伤寒沙门菌(0.21%)。不同食品污染最严重的是水产及其制品(36.36%),其次是熟肉制品加工生产环节(14.70%)。速冻米面制品(3.85%)、焙烤类(3.76%)、餐饮食品(2.5%)、冷面类(2.33%)均检出致病菌。结论金山区水产类、熟肉制品加工生产环节、餐饮类、焙烤类致病菌污染较严重,且致病菌种类多样,应加强市场监督和监测,保障食品安全。

上海市金山区2017年-2018年水产品中副溶血性弧菌病原学特征分析

目的了解金山区2017年-2018年水产品中副溶血性弧菌污染情况,耐药特点及毒力基因携带。方法对2017年-2018年采集的水产品进行副溶血性弧菌分离鉴定,微量肉汤稀释法进行药敏试验,荧光PCR检测其毒力基因。结果 2017年-2018年共采集80份水产品,分离副溶血性弧菌54株(67.5%),其中海产品分离副溶血性弧菌34株(73.9%,34/46),淡水产品分离副溶血性弧菌20株(58.8%,20/34),两者在检出率上差异无统计学意义(χ2=1.39,P> 0.05)。5株(9.3%)副溶血性弧菌对测试的17种药物均敏感。其余株呈不同程度耐药。主要耐受药物为头孢唑林(90.7%,49/54)、氨苄西林(24.1%,13/54)。54株副溶血性弧菌均携带tlh基因,携带率为100%,未检测到tdh或trh基因。结论金山区水产品中副溶血性弧菌检出率较高,污染较严重。海产品中分离菌对抗生素耐药呈多样性。水产品中副溶血性弧菌毒力基因携带率较低。需重视食品中副溶血性弧菌耐药谱的变化,进一步加强食品安全风险监控。

ICU环境分离肺炎克雷伯菌分子分型及耐药性分析

目的分析2018年上海市金山区某医院重症监护病房(ICU)环境分离肺炎克雷伯菌的病原学特征及流行趋势,为合理使用抗菌药物及预防交叉感染提供依据。方法采集金山区某医院ICU环境样本,采用VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定系统分离鉴定,采用脉冲场凝胶电泳和微量肉汤稀释法对分离的肺炎克雷伯菌进行分子分型和药敏试验。结果ICU环境208份样本检出肺炎克雷伯菌19株,检出率为9.13%。床扶手和被褥检出肺炎克雷伯菌株数量最多,均为3株,各占15.79%,检出率为37.50%;其次是门把手和吸引管,均为2株,分别占10.53%,检出率为25.00%;诊疗仪器表面、面盆、呼吸机、枕头、床头柜、推注泵、治疗推车、消毒桶和电器开关各检出1株。19株菌分为两大簇,共11个带型,总体相似度在68.2%~100.0%之间,有4个带型含有2~4株相似度100.0%的菌株。检出耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌18株,占94.74%;产ESBLs 2株,占10.53%;对链霉素和多黏菌素E均敏感,仅1株对多黏菌素B耐药。结论医院ICU环境肺炎克雷伯菌污染较严重,且耐药程度普遍较高。产碳青霉烯酶和ESBLs的肺炎克雷伯菌检出率较高。

上海金山区医疗机构环境表面病原菌种类分布调查

目的 了解上海金山区综合性医疗机构环境表面病原菌种类分布,建立病原菌谱。方法 对本区14家医疗机构环境样本(包括物体表面、医护人员手、空气)采样,全自动微生物鉴定仪VITEK 2 Compact鉴定。结果 采集物体表面、医护人员手1 462份,检出病原菌194株。革兰阳性菌136株,占70. 10%,以葡萄球菌为主。革兰阴性菌53株。霉菌5株。二级医院检出率为6. 6%,明显低于社区医院检出率(11. 98%),差异有统计学意义(χ^(2)=6. 90,P <0. 01)。医护人员手与物体表面检出无差异。Ⅱ类、Ⅲ类、Ⅳ类环境检出率分别为10. 42%、14. 41%、7. 22%,差异有统计学意义(χ^(2)=18. 93,P <0. 01)。物体表面检出中,以门把手检出病原菌最多,医生手机检出率最高。空气采样标本224份,合格率为85. 71%。结论 上海金山区医疗机构环境表面病原菌以革兰阳性菌为主,多数菌株为条件致病菌,提示应增强医疗机构环境消毒,预防院内感染。

上海市金山区2012年-2017年沙门菌分布特征及与气象因素的相关性分析

目的对上海市金山区2012年-2017年沙门菌的血清型分布进行研究并分析阳性菌株检出数和气象因素(温度、降水量)的相关性。方法对2012年-2017年分离到的745株沙门菌进行血清学凝集,采用SAS 9.4软件进行统计学分析。结果 745株沙门菌分属8个血清群和31种血清型,各血清型中B群鼠伤寒沙门菌检出最多,而后依次是D1群肠炎沙门菌,E1群伦敦沙门菌,B群德比沙门菌等。经统计分析,阳性菌株数-温度呈线性正相关,阳性菌株数-降水量也呈线性正相关。结论鼠伤寒和肠炎型为本区常见的沙门菌腹泻菌型。高温、降水等气象因素与沙门菌阳性检出数呈线性正相关,提示注意高温雨季的饮食卫生,警惕相关疾病发生。

上海市金山区腹泻患者中分离的副溶血弧菌病原学特征研究

【目的】了解2016—2018年上海市金山区副溶血弧菌的分布和流行特征。【方法】对218株分离自腹泻患者的副溶血弧菌进行血清型分析及不耐热性溶血素(TLH)、耐热性溶血素(TDH)、TDH类似溶血毒(TRH)毒力基因测定和药敏试验并进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。【结果】218株副溶血弧菌可分为8个血清群,21个血清型,其中147株可获得明确血清分型结果,以O3:K6最多,达57.3%;所有受试菌株按照85%相似度水平可分为25个簇类,优势簇为JSVP02,总相似度为56.3%~100.0%;201株菌携带tdh基因,阳性率为92.2%,13株携带trh基因,阳性率为6.0%,此外7株菌tdh、trh检测结果均为阴性;35株菌对所用17种抗菌药物完全敏感,其余183株菌呈现不同程度耐药。【结论】2016—2018年金山区腹泻患者中分离的副溶血弧菌遗传分布多样化,大部分菌株具有tdh基因,对第一代头孢菌素类的头孢唑啉、青霉素类的氨苄西林耐药较严重。通过构建区域化的PFGE分子分型数据库将对高危菌株的筛查、识别、预警提供科学依据。

上海市金山区牡蛎中副溶血性弧菌半定量风险评估

【目的】研究上海市金山区海产品牡蛎中副溶血性弧菌的污染现状,并对其可能引发的风险进行评估,为相关部门提供防控依据。【方法】2017年7—10月采用随机抽样的方法在金山区农贸市场、超市、餐饮店中随机采集带壳未加工牡蛎样品40份,参照国家标准检测方法检测牡蛎中副溶血性弧菌含量,并结合2012—2013年上海市金山区居民膳食与健康状况监测结果,应用Risk Ranger软件进行半定量风险评估分析。【结果】40份牡蛎样品中副溶血性弧菌的总体阳性检出率为80.0%(32/40)。以农贸市场检出率最高为85.7%(12/14),其次是餐饮饭店和超市。生食牡蛎,副溶血性弧菌污染的风险分值为63,属于高风险,预计消费者患病的概率为6.85×10~(-4),预计金山区居民每年因生食牡蛎感染副溶血性弧菌致病的发病率为1 247.8/10万。【结论】金山区海产品牡蛎中副溶血性弧菌污染情况较严重。生食海产品牡蛎为高风险,建议消费者减少或不生食牡蛎。食用牡蛎前有效加工是降低副溶血性弧菌食源性疾病发生的有效方法,同时进一步加强海产品流通环节的监测和管理。