通窍活血汤对缺血性脑卒中昏迷患者促醒作用的临床研究

目的:分析通窍活血汤对缺血性脑卒中昏迷患者的促醒作用,探讨其安全性与有效性。方法:选择2023年1月至2024年4月南方医科大学南方医院白云分院接诊的60例缺血性脑卒中昏迷患者,以随机数字表法将其分为对照组与观察组,各30例。对照组患者行常规西医治疗,观察组患者在对照组基础上加以通窍活血汤鼻饲治疗。比较两组患者疗效、格拉斯哥昏迷量表(GCS)、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)、苏醒情况、肌力分级、血象指标及安全性指标。结果:观察组患者治疗总有效率为80.00%,高于对照组的53.33%,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组患者的苏醒率为76.67%,高于对照组的50.00%,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组患者促醒时间较对照组短,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组患者GCS评分高于对照组,NIHSS评分低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组患者血清同型半胱氨基酸(Hcy)、N末端脑钠肽前体(NT–proBNP)水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组患者下肢肌力4~5级占比为76.67%,高于对照组的50.00%,差异具有统计学意义(P<0.05);两组患者不良反应情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:通窍活血汤联合常规西医治疗可有效提高缺血性脑卒中昏迷患者促醒效果,缩短促醒时间,改善患者神经功能、生理状况,并具有较高的安全性,其机制可能与降低Hcy、NT–proBNP水平有关。

Netrin-1对大鼠实验性脑梗死后同侧丘脑血脑屏障保护作用

目的观察脑梗死后同侧丘脑是否出现血脑屏障破坏,Netrin-1对血脑屏障破坏是否具有保护作用及其能否促进神经功能恢复。方法 Sprague-Dawley大鼠36只,建立右侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,假手术(sham)组仅暴露右侧大脑中动脉,分为sham组、MCAO+PBS组及MCAO+netrin-1组,每组6只。通过改良大鼠神经功能缺损评分(modified neurological severity scores,m NSS)评价神经功能,造模后第8天及第14天取材,HE染色观察梗死灶,免疫荧光检测occludin及albumin表达与分布,Western blot检测occludin及ZO-1表达水平。结果m NSS评分见予以Netrin-1后于梗死后第8天及第14天评分降低(P<0.05)。HE染色见右侧皮层梗死灶。Western blot见梗死后第8天开始出现occludin减少(P<0.05),第14天occludin及ZO-1均明显减少(P<0.05),免疫荧光见梗死后第8天及第14天occludin减少伴albumin血管外渗出;予以Netrin-1后,western blot及免疫荧光见梗死后第14天occludin增多(P<0.05),伴albumin渗出增多,ZO-1无明显变化。结论Netrin-1对大鼠实验性脑梗死后同侧丘脑血脑屏障破坏具有保护作用,并可促进梗死后神经功能恢复。

Netrin-1通过下调氧糖剥夺诱导的人神经母细胞瘤自噬促进细胞存活

目的通过建立体外人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)氧糖剥夺(oxygen and glucose deprication,OGD)模型模拟脑梗死后神经元缺血缺氧环境(OGD),探索神经导向因子Netrin-1是否影响OGD后细胞的生存,以及自噬在其中的可能作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,检测Netrin-1对细胞活性及自噬的影响。使用自噬诱导剂雷帕霉素、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤干预自噬水平,同时构建过表达Netrin-1受体UNC5H2-HA基因的HEK293T细胞;CCK-8试剂盒检测细胞活性,免疫印迹检测自噬相关标志物(Beclin 1、LC3、p62)的表达及免疫荧光检测LC3斑点的形成。结果与OGD对照组相比,Netrin-1及3-甲基腺嘌呤的干预均显著提高细胞活性,伴有LC3-Ⅱ斑点形成减少;相反,雷帕霉素增加LC3-Ⅱ斑点的同时抑制细胞活性,并减弱了Netrin-1提高细胞活性的作用。过表达UNC5H2-HA细胞较对照质粒组相比,LC3-Ⅱ表达增加;同时进行Netrin-1干预后仅过表达组出现LC3-Ⅱ表达下降,p62表达上升。结论 Netrin-1可能通过受体UNC5H2下调OGD损伤的人神经母细胞瘤自噬而提高细胞活性。

Netrin-1促进氧糖剥夺后脑微血管内皮细胞存活

目的通过建立体外氧糖剥夺模型模拟缺血缺氧环境,观察轴突导向因子netrin-1对脑微血管内皮细胞氧糖剥夺损伤后的作用。方法体外培养脑微血管内皮细胞,免疫荧光法检测其netrin-1受体结直肠癌缺失基因(deleted in colorectal cancer,DCC)及uncoordinated(UNC)5H2的表达;并使用不同浓度netrin-1作用于氧糖剥夺损伤的脑微血管内皮细胞,Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒及Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒检测其细胞活性。结果脑微血管内皮细胞表达UNC5H2受体,无DCC受体表达;与对照组相比,浓度为10、50、100 ng/m L的netrin-1作用于氧糖剥夺损伤的脑微血管内皮细胞后细胞活性增强(10 ng/m L:1.25±0.20,存活率63.33%,P<0.05;50 ng/m L:1.41±0.17,存活率79.40%,P<0.05;100 ng/m L:1.33±0.27,存活率75.98%,P<0.05),且在其浓度为50 ng/m L时细胞活性最强。结论 Netrin-1对氧糖剥夺损伤的脑微血管内皮细胞具有剂量相关的保护作用,这种保护作用可能由其受体UNC5H2介导。