抗人肺癌单克隆抗体的制备及其生物特征的研究

目的制备抗人肺癌细胞的单克隆抗体(McAb),鉴定其生物学特征。方法用人肺癌细胞株A549作为抗原,采用杂交瘤技术制备抗人肺癌细胞McAb,用ELISA进行筛选和鉴定其亚类,并用细胞扒片免疫化学方法检测其特异性。结果获得了1株分泌抗人肺癌细胞McAb杂交瘤细胞(命名为1D11),其染色体呈双亲特点,该McAb与人卵巢癌细胞株SKOV3有交叉反应,与肝癌细胞株SMMC7721、宫颈癌细胞株Hela、表皮癌细胞株A431、正常肝细胞株L02无交叉反应。结论该McAb对肺癌和卵巢癌具有特异性。

教育数字化转型下的教学时空:价值、博弈与重构

教育数字化转型深刻塑造教学系统,教学系统的重大变革引发学界对于教学时空的再思考。教育数字化转型下教学时空的独特价值有凸显师生求索本性、助益教学互动共生、扩宽教育认知领域。目前,教育数字化转型中的教学时空存在博弈困境,主要体现在可测度时间抑或弹性化时间的时间博弈,生产的空间抑或规训的空间的空间博弈,统一性时空抑或差异性时空的时空博弈。为更好重构教育数字化转型下的教学时空,需要断续时间中施用延续教学行为、异地空间内采用同步教学举措、分离时空内开展整全教学管理。

小鼠sFlt重组腺病毒抑制小鼠Lewis肺癌的生长

背景与目的实体肿瘤组织的生长具有血管依赖性,肿瘤新生血管生成已证实为肿瘤生长的控制点之一。本研究拟探讨编码小鼠可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt1)的复制缺陷型腺病毒对肿瘤新生血管和肿瘤生长的影响。方法应用小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)株建立肺癌模型进行抗肿瘤的研究,以编码sFlt1的复制缺陷型重组腺病毒(sFlt1Adv)作为治疗组,编码绿色荧光蛋白的复制缺陷型重组腺病毒(GFPAdv)和生理盐水作为对照组,皮下接种小鼠LLC一周后,经尾静脉给药2次(间隔2周),第二次给药后2周,处死全部实验鼠,剥离肿瘤组织并称重,用3%多聚甲醛固定,用抗CD31作免疫组织化学染色。结果sFlt1Adv治疗组肿瘤明显小于GFPAdv对照组和生理盐水组(P<0.01),其抑瘤率达到71.8%;治疗组的肿瘤微血管密度低于GFPAdv对照组和生理盐水组(P<0.01)。结论复制缺陷型重组腺病毒能抑制肿瘤组织的新生血管形成,从而抑制肿瘤的生长,有较好的应用价值。

抗人PCIA1单克隆抗体的制备及其生物特征的研究

目的:筛选制备抗人PCIA1的单克隆抗体,鉴定其生物学特征。方法:采用原核表达并纯化的PCIA1蛋白作为抗原,采用杂交瘤技术制备抗人PCIA1单克隆抗体的杂交瘤,用ELISA进行筛选和鉴定其亚类,并用细胞扒片免疫化学方法检测其反应性。结果:获得了32株分泌抗人PCIA1的McAb杂交瘤细胞,McAb-1A4的染色体呈双亲特点,该McAb与多种人肿瘤细胞株和正常肝细胞株有反应。结论:McAb-1A4可用于PCIA1的细胞内定位研究。

289例中晚期肿瘤病人外周血T淋巴细胞表型分析

目的 :分析中晚期肿瘤病人外周血T淋巴细胞亚群测定值的特点 ,探讨其影响因素及临床意义。方法 :采用流式细胞术检测 2 89例中晚期肿瘤病人外周血T淋巴细胞亚群水平。结果 :2 89例中晚期肿瘤病人外周血T淋巴细胞亚群测得值分别为CD3+ 细胞 5 9 0 7± 14 2 8,CD4 + 2 4 70± 10 70 ,CD8+ 33 4 5± 12 72 ,CD4 /CD80 89± 0 5 6。除性别对CD3表达的影响具有统计学意义外 (P =0 0 0 3) ,其余指标不受患者性别及年龄的影响 (P >0 0 5 )。结论 :中晚期肿瘤患者普遍存在T淋巴细胞介导的细胞免疫功能下降。

用McAb-AST及骨髓涂片法对四川省汶川县犬感染利什曼原虫的调查研究

作者等用单克隆抗体-抗原斑点试验(McAb-AST)及骨髓穿刺涂片法对汶川县125只犬进行感染利什曼原虫调查,骨髓涂片法查出原虫的阳性犬46只,感染率为36.8％,较之历年来陇南、川北报道的犬感染率为高,不但查明了当地犬感染利什曼原虫的严重性,且为本年在白蛉繁殖季节前消除这些传染源提供了确切依据。为了研究对犬利什曼病的简易、准确的调查方法,我们同时用McAb-AST对该125只犬的血清,检测其循环抗原,结果与骨髓涂片阳性符合率为97.8％,总符合率95.2％,可望取代骨髓涂片法。

人工智能时代情感教育的价值、困局与建构

人工智能出现质的飞跃,在人工智能时代思考情感教育问题是大势所趋。人工智能时代情感教育具备促进认知能力提升、联系师生共同应对革命性挑战、助力人工智能转向责任性发展和推动人机深度交融的特殊价值。人工智能时代情感教育面临情感应激、情感荷载和情感孤悬的困局,具体表现为自身非理性倾向产生源发抑制、接触人工智能诱发主体性隐匿、误用人工智能导致表现性衰退和滥用人工智能促使道德感消解等方面。为更好地促进人工智能时代情感教育的生发,提出情感教育纳入课程体系、情感教育融入人工智能、人工智能助推情感教育、确保透明度与实行问责制的建构策略。

流式细胞术PI、Annexin V/PI和APO2.7法检测细胞凋亡的比较

目的:探讨流式细胞术PI法、APO2.7法以及AnnexinV/PI法三种凋亡检测方法的应用价值。方法:使用PI法、APO2.7法以及AnnexinV/PI法三种方法同时对槲皮素处理后的慢性粒细胞白血病K562细胞进行凋亡检测对比研究。结果:三种方法不同时间组间的相关系数分别为0.823(P>0.05),0.949(P<0.05),0.994(P<0.01)。药物作用24小时组APO2.7法与AnnexinV/PI法检测细胞凋亡相关系数为0.925(P<0.05),48小时组相关系数为0.993(P<0.01)。结论:流式细胞术检测凋亡时可以选用AnnexinV/PI法和APO2.7法,不推荐选用PI法。

表达sFlt-1的小鼠骨髓间充质干细胞介导的抗肿瘤作用研究

目的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是存在于骨髓中的一种具有多向分化潜能和很强增殖能力的细胞。经静脉输注的MSCs能特异性地聚集于新生组织,如伤口和肿瘤等,本实验将MSCs作为基因治疗靶向载体,研究其在肿瘤组织内的抗血管作用。方法从雄性小鼠股骨骨髓中分离和培养MSCs,用流式细胞仪检测CD34、CD29、CD44的表达。再用sFlt-1(VEGF-R1)重组腺病毒感染后,给荷瘤小鼠静脉注射。结果间充质干细胞聚集在肿瘤内表达sFlt-1,使得肿瘤血管生成受抑制、肿瘤细胞凋亡增加、肺转移灶减小、生存时间延长。结论本研究表明,MSCs作为基因的运载工具在抗肿瘤领域可能有一定的应用价值。

一种可生物降解温度敏感型聚乙二醇-聚己内酯-聚乙二醇水凝胶的合成和表征

合成了一系列分子量较低的聚乙二醇-聚己内酯-聚乙二醇(Poly(ethylene glycol)-Polycaprolactone-Poly(ethylene glycol),PEG-PCL-PEG)三嵌段共聚物。分别采用FTIR和1H-NMR对其结构进行了表征。所合成的PEG-PCL-PEG共聚物具有良好的水溶性,当水溶液浓度高于临界凝胶浓度(Critical gel concentration,CGC)时,随着温度的变化聚合物水溶液会呈现特有的凝胶-溶胶转变。研究了共聚物亲水疏水链段的比例和长度,以及热历史等对凝胶-溶胶转变行为的影响。通过调节上述条件,可以在一定程度上拓宽凝胶-溶胶转变温度范围,有助于PEG-PCL-PEG水凝胶在可注射药物控制释放系统等方面的应用。

应用单克隆抗体—抗原斑点试验检测血清抗原诊断黑热病的进一步研究

用单克隆抗体—抗原斑点试验(McAb-AST)又一次对50例黑热病确诊患者作血清抗原检测,以诊断黑热病。阳性率达100％。与前文报道的51例共计101例的阳性率为97.03％。509份对照血清(合计)中,假阳性反应1例(0.2％),特异性达99.8％。本文新病例乃在改进及简化方法基础上获得了更满意的效果。分析甘肃陇南、四川北部63例患者的年龄分布可见:10岁以下占65.1％;11—20岁,12.7％;21—30岁, 17.4％;21—40岁,4.8％;40岁以上无病例。符合山丘型黑热病的特点。本文总结出McAb—AST为敏感性高(97.03％),特异性强(99.8％)的黑热病实验断方法。经简化后,适合于广大基层单位推广使用,由于所需血清样品量微,取材方便,在儿童多发的山丘型黑热病疫区的应用,较之骨髓涂片诊断法的优越性,更显而易见。

IP-10质粒联合吉西他滨抗肿瘤作用的实验研究

背景与目的:IP鄄10是α趋化因子家族成员,IP鄄10具有抗肿瘤血管作用,表现为抑制新生血管分化成毛细血管。研究表明,化疗与抗肿瘤血管治疗结合具有协同作用。本研究拟用IP鄄10质粒与化疗药物吉西他滨联合治疗肿瘤,观察其抗肿瘤作用。方法:质粒pBLAST鄄IP鄄10转化至大肠杆菌中,经扩增后,制备并纯化质粒。采用BALB/c及C57BL/6小鼠,分别建立H22肝癌及Lewis肺癌肿瘤模型。IP鄄10质粒及生理盐水肌肉注射,吉西他滨腹腔注射。收集小鼠血清,ELISA方法检测血清中IP鄄10蛋白表达;观察肿瘤体积变化、小鼠存活期及不良反应;肿瘤组织微血管免疫组化染色,确定微血管密度;TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡。结果:IP鄄10质粒肌注后小鼠血清中IP鄄10蛋白表达于第2周达高峰[(16.8±3.6)ng/ml],至第5周仍持续有较高水平表达[(14.0±2.1)ng/ml]。IP鄄10质粒联合吉西他滨组小鼠肿瘤体积较对照组显著受抑甚至消退,在接种肿瘤细胞后第9周联合给药组小鼠存活率为90%,明显高于其他各组(IP鄄10质粒组55%,吉西他滨组以及生理盐水组为0%)(P<0.005);各组小鼠均未出现明显的不良反应。肿瘤组织内微血管密度在联合给药组为15.8±2.4,显著低于其它各组(IP鄄10组45.6±2.0,吉西他滨组50.2±3.5和生理盐水组51.3±3.0)(P<0.01)。在接种肿瘤细?

大鼠睾丸异种抗原的血清学筛选

目的 通过重组 c DNA表达文库的血清学分析 (SEREX)技术获得来自大鼠睾丸文库有潜在治疗价值的异种同源抗原的 c DNA序列。方法 将人卵巢癌细胞株免疫兔后收集的抗血清作为筛选血清 ,采用 SEREX技术筛选大鼠睾丸 c DNA文库。结果 通过两轮筛选获得 10个阳性克隆。通过生物信息学分析认为这 10个阳性单克隆 c DNA序列编码 7种不同的蛋白 ,其中 OV- 2、OV- 4为肿瘤相关序列 ,OV- 6、OV- 7为编码未知蛋白的序列。结论 用异种免疫血清筛选异种同源肿瘤抗原拓宽了 SEREX技术的应用范围 ,是一种行之有效的方法。

人白细胞介素4的原核表达、复性、纯化及生物学活性鉴定

用PCR方法从pORF-hIL4质粒中扩增重组人白细胞介素4(hIL-4)的基因,构建PQE60原核表达载体并诱导其目的蛋白的表达。对表达的目的蛋白的可溶性进行鉴定,发现hIL-4基因表达产物在大肠杆菌中主要以不溶性包涵体形式存在,经过超声波破细菌、包涵体提取、洗涤处理后,用5mol/L盐酸胍变性溶解包涵体沉淀,上清稀释复性后透析,再经镍亲和层析进行纯化。纯化后的hIL-4进行TF-1细胞体外增生实验检测其生物学活性后,可用于人外周血树突状细胞的体外诱导培养。

恶性实体瘤患者自体PHA-LAK细胞过继性免疫治疗对淋巴细胞表型及功能的影响

目的 :研究回输自体PHA LAK细胞对恶性实体瘤患者淋巴细胞表型及功能状态的影响。方法 :入组2 0 4例实体瘤患者 ,并以 10例健康成人作为对照 ,采集与分离外周血单个核细胞 ,体外扩增PHA LAK细胞 ,采用流式细胞术分析淋巴细胞表型 ,MTT法检测淋巴细胞杀伤活性。结果 :实体瘤患者较正常人淋巴细胞亚群CD3 + /CD4+ 细胞、CD3 + /CD8+ 细胞、B细胞、NK细胞减少 ,淋巴细胞杀伤活性下降。扩增的PHA LAK是以激活的淋巴细胞亚群CD3 + /CD8+ 细胞、CD3 + /CD56+ 细胞、CD4+ /CD2 8+ 细胞为主的异质性群体 ,其数量及杀伤活性明显增加 ,激活淋巴细胞标记性抗原分子表达亦增加。PHA LAK细胞回输治疗后 ,患者外周血上述激活淋巴细胞亚群数量增加 ,淋巴细胞杀伤活性增强。结论 :实体瘤患者淋巴细胞亚群数量及功能低下 ,PHA LAK细胞过继性免疫治疗使患者体内激活淋巴细胞亚群数量增加 。

异种血管内皮细胞生长因子重组蛋白质疫苗联合阿霉素治疗淋巴瘤的研究

目的探讨重组非洲爪蟾血管内皮细胞生长因子(Xenopuslaevisvascularendothelialgrowthfactor,xVEGF)肿瘤疫苗免疫治疗,联合阿霉素抗小鼠淋巴瘤的作用。方法采用C57BL/6小鼠建立EL4淋巴瘤模型。实验小鼠随机分成4组xVEGF联合阿霉素组(简称联合用药组)、阿霉素组、xVEGF组、生理盐水对照组。观察肿瘤生长、小鼠生存率和毒副反应,并检测分泌抗自身VEGF抗体的B细胞、肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)和肿瘤细胞凋亡等。结果联合用药组肿瘤明显小于其他3组(P<0.05),其中有3只小鼠肿瘤完全消退;接种肿瘤后48d,联合用药组小鼠生存率为100%,明显高于生理盐水对照组(0%)(P<0.01)。ELISPOT检测发现,异种蛋白质疫苗免疫的小鼠(联合或单用)产生了分泌抗自身VEGF抗体的B细胞,其数量与阿霉素组或生理盐水对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。联合用药组肿瘤MVD明显低于其他3组(P<0.05),肿瘤细胞凋亡指数明显高于其他3组(P<0.05)。结论采用异种同源蛋白质疫苗xVEGF免疫治疗,与阿霉素化疗联合有协同增强的抗小鼠淋巴瘤的作用。

温度敏感型PCL-Pluronic-PCL水凝胶的合成与性能

通过泊洛沙姆(Pluronic)引发己内酯(ε-CL)开环反应,合成了一种较低分子量的PCL-Pluronic-PCL多嵌段共聚物,并采用FT-IR和1H-NMR对其结构进行表征。这种PCL-Pluronic-PCL共聚物有良好的水溶性,并且当其水溶液浓度高于临界凝胶浓度(CGC)时,随着温度的变化呈现出凝胶-溶胶转变特性。采用试管法测试共聚物水溶液的凝胶-溶胶转变。该共聚物水凝胶在可注射药物控制释放系统等方面有着广泛的潜在应用价值。

应用蛋白印迹-免疫沉淀-质谱法筛选卵巢癌肿瘤抗原

背景与目的肿瘤抗原的筛选对卵巢癌的早期诊断有重要意义。目前,噬菌体抗体库技术(phageantibodylibrary)、核糖体展示技术(ribosomedisplay)和血清学筛选重组cDNA表达文库(serologicalanalysisofrecombinantcDNAexpressionlibraries,SEREX)技术等作为常用的肿瘤抗原筛选方法已得到广泛应用。本研究采用蛋白印迹鄄免疫沉淀鄄质谱方法筛选和鉴定卵巢癌肿瘤抗原,以期建立一种新的筛选肿瘤抗原的方法及技术路线。方法应用蛋白印迹(Westernblot)法筛选出差异明显的卵巢癌患者血清,用该血清与SKOV3细胞裂解物反应,免疫沉淀富集抗原,与正常血清的免疫沉淀样品比较,获得差异蛋白条带,然后进行质谱鉴定、生物信息学分析。结果采用蛋白印迹筛选到标记为7号的卵巢癌患者血清,与其他血清比较有明显的差异,经免疫沉淀、聚丙烯酰胺凝胶电泳与正常血清免疫沉淀样品比较,发现在接近66.2ku的位置处有一差异蛋白条带,经质谱鉴定、生物信息学分析为热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)70及细胞角蛋白(cytokeratin)9。结论采用蛋白印迹鄄免疫沉淀鄄质谱法进行卵巢癌肿瘤抗原的筛选和鉴定是一种行之有效的方法。

用McAb—AST对黑热病患者疗效考核的进一步研究

用单克隆抗体一抗原斑点试验(McAb—AST)对我国山丘疫区27例(32人次)黑热病患者在斯锑黑克治疗前、后检测循环抗原作了对比观察,以考核疗效。其中25例治前骨髓涂片查见病原体,2例骨髓片漏诊。32人次治疗前MeAb—AST均显阳性反应。一个疗程后McAb—AST转为阴性的16人次,临床表现为痊愈,McAb—AST仍为阳性反应的9例,临床表现也未愈;余7人次McAb—AST与临床症状均有一定程度好转。本法显示的结果与患者病情的归转状况及病原体的查获与否是相吻合的。表明McAb—AST可用于黑热病治后近期疗效考核,且可弥补骨髓涂片的漏诊。

表达人CD40配体的重组腺病毒载体的构建

目的构建含有hCD40L基因的重组腺病毒载体,为其在动物模型体内表达和肿瘤基因治疗提供基础。方法用XhoⅠ、SwaⅠ双酶切质粒pORF_hCD40L,回收1 900 bp基因片段并定向克隆插入穿梭质粒pShuttle中XhoⅠ、EcoRⅤ双酶切位点,得到重组质粒pShuttle_hCD40L。经PmeI酶切与腺病毒骨架质粒pAdEasy_1共转化BJ5183细菌,同源重组后用选择培养基筛选阳性克隆,提取质粒PacI酶切线性化后用脂质体介导转染293细胞。酶切分析和PCR鉴定重组的腺病毒。结果酶切分析、PCR验证表明,hCD40L基因成功克隆到腺病毒pAdEasy_1载体中。结论成功构建表达hCD40L基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其在哺乳动物内表达及基因治疗提供了基础。