抗人肝癌免疫毫微球的制备及其抗癌效果观察

目的制备抗人肝癌免疫毫微球,观察其活性及抗癌效果。方法抗人肝癌单克隆抗体HAb18通过异型双功能交联剂SPDP与载阿霉素(ADR)人血清白蛋白毫微球[HSA(ADR)-NS]偶联,制成抗人肝癌免疫毫微球HAb18-HSA(ADR)-NS,使用凝集试验及免疫荧光检测其活性,光镜和电镜下观察其与人肝癌细胞株SMMC-7721特异性结合。MTT法检测该免疫毫微球的体外杀伤性。于人肝癌裸鼠模型上分别使用HAb18-HSA(ADM)-NS、HSA(ADM)-NS及ADM,检测3者的肿瘤抑制率。结果HAb18-HSA(ADM)-NS具有单抗活性,能与肝癌细胞特异结合;其体外杀伤SMMC-7721细胞IC50值为44.6μg/ml,与HSA(ADM)-NS(345.5μg/ml)及ADM(365.5μg/ml)相比,明显降低;体内肿瘤抑制率比HSA(ADM)-NS及ADM明显增强(P<0.001)。结论HAb18-HSA(ADM)-NS具有免疫活性,对肝癌细胞有主动靶向性,体内外均具有比HSA(ADM)-NS及ADM更强的抗癌效果。

索拉非尼治疗肝移植术后肝癌复发的疗效与肿瘤组织Ki-67表达及微血管密度的关系

目的:研究索拉非尼对肝移植术后肝癌复发的治疗效果与肿瘤组织Ki-67表达及微血管密度(MVD)的关系。方法:观察索拉非尼治疗肝移植术后肝癌复发30例的疗效;用免疫组化法检测Ki-67及CD34在肝癌组织中的表达,计算肿瘤MVD。结果:30例患者中,完全缓解(CR)0例,部分缓解(PR)13例,稳定(SD)8例,进展(PD)9例。索拉非尼对肝移植术后肝癌复发的疗效与Ki-67表达阳性之间有显著正相关性。PR患者13例,MVD均数为356.45±156.13;SD患者8例,MVD均数为234.13±145.43;PD患者9例,MVD均数为99.39±49.88;PR与PD患者之间,MVD均值具有显著差异。结论:索拉非尼对肝移植术后肝癌复发有疗效。Ki-67阳性染色及MVD高的肝癌患者,肝移植术后肝癌复发使用索拉非尼治疗效果较好。

胰腺癌P53蛋白表达与AgNORs量及组织学分级的关系

目的:研究胰腺癌P53蛋白表达与癌细胞核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)量及组织学分级的关系。方法:用免疫组织化学法检测56例胰腺癌组织及25例正常胰腺组织中突变型P53蛋白的表达;AgNORs染色技术检测胰腺癌细胞的AgNORs含量;观察肿瘤的组织学分级。结果:56例胰腺癌中P53蛋白表达阳性28例(50%),正常胰腺细胞均为阴性,P53蛋白在胰腺癌组织和正常胰腺组织中的表达有显著差异(P<0.01)。28例P53蛋白阳性的胰腺癌组织,AgNORs计数为9.14±2.08;28例P53蛋白阴性的胰腺癌中,AgNORs计数为5.99±1.84,二者有显著差异(P<0.01)。P53蛋白表达与肿瘤组织学分级呈显著负相关。不同的组织学分级之间,AgNORs计数有显著差异(P<0.01)。结论:胰腺癌发生发展的过程包含了p53基因的突变。P53蛋白表达和AgNORs含量可反映胰腺癌的恶性程度,是一个有效的判断胰腺癌预后的指标。

多吉美对肝癌的疗效与Ki-67及CD34表达的关系

目的研究多吉美对肝癌的疗效与Ki-67及CD34表达的关系。方法应用多吉美治疗肝癌28例,观察其疗效。用免疫组化法检测28例肝癌组织中Ki-67及CD34表达,计算出肿瘤微血管密度(MVD)。结果 28例患者CR0例,PR12例,SD7例,PD9例。吉美对肝癌的疗效与Ki-67阳性之间有显著正相关性。12例CR患者中,MVD计数均数为346.03±146.98。SD7例,MVD计数均数为206.03±101.34。PD9例,MVD计数均数为89.14±45.66。CR与PD患者之间,MVD计数均值有非常显著的差异。结论 Ki-67阳性染色及MVD计数高的肝癌患者使用多吉美效果好。

免疫治疗预防大肠癌术后肝转移

目的 探讨肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)、重组白细胞介素 2 (rIL 2 )和环磷酰胺经门静脉输入治疗对进展期大肠癌根治术后患者免疫功能的影响及术后肝转移的预防作用。方法 将12 4例DukesB及C期大肠癌患者于根治术后随机分为免疫治疗组和对照组。对照组 5 9例 ,术后使用氟尿嘧啶 (5 Fu)、丝裂霉素C(MMC)经静脉化疗 ;免疫治疗组 6 5例 ,术后使用TIL ,rIL 2和环磷酰胺经门静脉插管输入 ,以后的治疗与对照组相同。所有病例均随访 3年。结果 免疫治疗组术后 3年内大肠癌肝转移 8例 (12 3% ) ,而对照组为 19例 (33 2 % ) ,二者差异显著 (P <0 .0 5 )。免疫治疗后 ,患者外周血自然杀伤细胞 (NK)、白细胞介素 2 (IL 2 )活性及T细胞亚群CD3,CD4,CD4 CD8都显著上升 (P <0 .0 5 )。结论 TIL ,rIL 2联合环磷酰胺免疫治疗对提高进展期大肠癌术后患者抗肿瘤细胞免疫力 。

抗人大肠癌免疫毫微球的制备及其抗癌效果观察

目的 制备抗人大肠癌免疫毫微球 ,并观察其活性及疗效。方法 抗人大肠癌单克隆抗体SC3Ab通过异型双功能交联剂SPDP与载 5 Fu人血清白蛋白毫微球 [HSA(5 Fu) NS]偶联 ,制成抗人大肠癌免疫毫微球SC3Ab HSA(5 Fu) NS。使用凝集试验及免疫荧光检测其活性 ,光镜和电镜下观察其与大肠癌细胞SW 1116的特异性结合。MTT法检测该免疫毫微球的体外杀伤性。于人大肠癌裸鼠模型上分别使用SC3Ab HSA(5 Fu) NS、HSA(5 Fu) NS及 5 Fu ,检测三者的肿瘤抑制率。结果 SC3Ab HSA(5 Fu) NS具有单抗活性 ,能与大肠癌细胞特异结合 ;其体外杀伤SW 1116细胞IC50 值为 2 4 6 μg/ml ,与HSA (5 Fu) NS(345 3μg/ml)及 5 Fu(32 5 6 μg/ml)相比 ,明显降低 ;体内肿瘤抑制率比HSA(5 Fu) NS及 5 Fu明显增强 (P <0 0 0 1)。结论 SC3Ab HSA (5 Fu) NS具有免疫活性 ,对大肠癌细胞有主动靶向性 ,体内外均具有比HSA(5 Fu) NS及 5 Fu更强的抗癌效果。

泰素免疫毫微球的制备及其抗人肝癌效果的动物实验研究

目的制备抗人肝癌泰素免疫毫微球,观察其特性及抗人肝癌效果。方法抗人肝癌单克隆抗体HAb18通过异型双功能交联剂SPDP与泰素(Paclitaxel,PTX)人血清白蛋白毫微球[HSA(PTX)-NS]偶联,制成抗人肝癌泰素免疫毫微球HAb18-HSA(PTX)-NS,使用凝集试验及免疫荧光检测其活性,光镜和电镜下观察其与人肝癌细胞株SMMC-7721特异性结合。MTT法检测该免疫毫微球的体外杀伤性。于人肝癌裸鼠模型上分别使用HAb18-HSA(PTX)-NS、HSA(PTX)-NS及PTX,检测三者的肿瘤抑制率。结果 HAb18-HSA(PTX)-NS具有单抗活性,能与肝癌细胞特异结合;其体外杀伤SMMC-7721细胞IC50值为46.9μg/ml,与HSA(PTX)-NS(356.5μg/ml)及PTX(378.3μg/ml)相比,明显降低;体内肿瘤抑制率比HSA(PTX)-NS及PTX显著增强(P<0.001)。结论 HAb18-HSA(PTX)-NS具有免疫活性,对肝癌细胞有主动靶向性,体内外均具有比HSA(PTX)-NS及PTX更强的抗癌效果。

阿霉素免疫毫微粒对多药耐药肝癌的体内杀伤作用

目的探讨阿霉素免疫毫微粒对多药耐药(MDR)肝癌的体内杀伤作用及其可能的机制。方法用人肝癌细胞株耐阿霉素亚株(SMMC-7721/ADM)制成肝癌裸鼠模型,分别使用阿霉素免疫毫微粒、阿霉素毫微粒及阿霉素,检测三者的肿瘤抑制率;同时检测三者在肿瘤组织中的药物浓度。结果阿霉素免疫毫微粒有比普通阿霉素毫微粒及阿霉素更强的体内逆转MDR的功能;阿霉素免疫毫微粒比阿霉素毫微粒及阿霉素在肿瘤中的药物浓度明显高。结论免疫毫微粒有体内逆转MDR的功能,其可能机制是免疫毫微粒在体内可与肿瘤细胞紧密结合,所载药物释放后形成肿瘤组织内有较高的药物浓度。

胰腺癌ras p21蛋白表达与AgNORs计数及组织学分级的关系

目的研究胰腺癌rasp21蛋白表达与AgNORs计数及组织学分级的关系。方法用免疫组化法检测了50例胰腺癌组织及50例正常胰腺组织中rasp21蛋白的表达;AgNORs染色技术检测胰腺癌细胞的AgNORs含量;观察肿瘤的组织学分级。结果rasp21蛋白在胰腺癌组织和正常胰腺组织中的表达有显著差异;rasp21蛋白阳性胰腺癌的AgN0Rs计数比阴性的AgN0Rs计数明显增多(P<0.001);rasp21蛋白表达与肿瘤组织学分级呈显著负相关(rs=-0.99,P<0.001)。结论胰腺癌的发生发展过程包含了rasp21基因的突变。rasp21蛋白表达可反映胰腺癌的恶性程度,是一个有效的判断胰腺癌预后的指标。

原发性肝癌患者CTCs与CD4^+/CD8^+、NLR、TTV及肿瘤分期的相关性研究

目的:探讨原发性肝癌患者外周血循环肿瘤细胞(CTCs)与T细胞亚群CD4^+/CD8^+比值、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、肿瘤总体积(TTV)及肿瘤分期的关系。方法:收集80例原发性肝癌患者外周血,采用益善生物技术公司使用的"免疫去除结合纳米过滤法"Can PatrolTM行CTCs检测。同时使用流式细胞术检测外周血中CD4+T细胞和CD8^+T细胞数量;收集患者外周血中性粒细胞数、淋巴细胞数、肿瘤最大直径及肿瘤分期等临床病理参数。计算出外周血CD4^+/CD8^+比值、NLR及TTV。根据CD4^+/CD8^+平均值及TTV、NLR中位数将CD4+/CD8+比值、TTV和NLR分为高、低2组;根据肝癌第7版TMN分期标准将患者分为I+II期和III+IV期2组。分别比较CTCs在2组中的差别。结果:高CD4^+/CD8^+比值组外周血CTCs数及间质型CTCs数明显低于低CD4^+/CD8^+比值组(P<0.05)。高TTV组外周血的CTCs数、间质型CTCs数及混合型CTCs数明显高于低TTV组(P<0.05);肿瘤分期I、II期组外周血的CTCs数、间质型CTCs数及混合型CTCs数明显低于III、IV期组(P<0.05)。高NLR组与低NLR组外周血的CTCs数、间质型CTCs数、混合型CTCs数和上皮型CTCs数间的差异无统计学显著性。结论:原发性肝癌患者外周血中存在CTCs;外周血CTCs与T细胞免疫、TTV及肿瘤分期有显著相关:T细胞免疫越差、TTV越大及肿瘤分期越晚,外周血的CTCs越多。

胆囊结石合并胆总管结石的微创治疗

目的比较胆囊结石合并胆总管结石的微创与开腹手术的治疗效果。方法将120例胆囊结石合并胆总管结石患者随机分为两步微创组与传统开腹组。两步微创组54例患者第一步在十二指肠镜下行逆行胰胆管造影(endoscopic retrograde cholangiopancreatography,ERCP)和内镜下乳头括约肌切开术(endoscopic sphincterotomy,EST)取石,第二步于2～5d后行腹腔镜胆囊切除术(1aparoscopic chole-cystectomy,LC);传统开腹组66例患者采取开腹胆道探查术(open common bile duct exploration,OCBDE)。比较两组患者的手术时间、手术出血量、住院时间,治疗费用及术后并发症的发生率。结果两步微创组在手术时间、术中出血量、住院时间均优于传统开腹组(P<0.05);两步微创组术后出现并发症4例,传统开腹组出现并发症9例,差异有统计学意义(P<0.05);两组住院费用比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论两步微创治疗胆囊结石合并胆总管结石有疗效好、创伤小、住院时间短等优点,有取代传统剖腹手术的趋势。

医源性胆胰肠结合部损伤的预防与处理

目的总结医源性胆胰肠结合部损伤的防治经验.方法病例资料的回顾性分析.我院于1994年1月～2004年12月共发生医源性胆胰肠结合部损伤7例,2例发生在十二指肠乳头括约肌切开后的取石过程中,5例发生在开腹胆道手术中扩张胆总管下段狭窄时.针对损伤实施胰十二指肠切除术2例;胆总管横断型胆总管空肠吻合术5例,其中4例同时加做十二指肠憩室化手术.全部病例均在术中于局部放置双套管引流,术后给予施他宁抑制胰腺分泌.结果6例痊愈;1例死亡.结论在取出结石和扩张狭窄过程中控制好操作力度是防止发生医源性胆胰肠结合部损伤的关键.全胆汁改道和十二指肠憩室化是处理胆胰肠结合部损伤的有效措施,强调全胆汁改道手术和十二指肠憩室化手术同时实施.具体术式推荐横断胆总管型胆管空肠吻合术和胃肠吻合加胃窦部可吸收肠线捆扎术.局部损伤严重时可行胰十二指肠切除术.

胸锁乳突肌表面肌电图的研究

目的:记录胸锁乳突肌不同体位姿势时的表面肌电图以评估其疲劳的发生及临床意义。方法:采用表面肌电图仪,用双电极引导法对8名健康受试者的胸锁乳突肌进行等长收缩和屈伸疲劳状态下的检测。观察指标为中位频率(MF)和平均功率频率(MPF)。在头平视、头前屈、头后伸、深吸气、头旋转、头强力前屈等姿势下记录右侧胸锁乳突肌的表面肌电图。结果:头平视位60s时MF为33.00±2.12,MPF为51.00±4.33;头前屈位60s时MF为28.50±1.51,MPF为58.00±3.13;头后伸位60s时MF为23.00±1.35,MPF为45.30±6.21;深吸气60s时的MF为21.00±1.75,MPF为41.00±3.51。头向左侧旋至极限60s时,其MF为46.00±3.42,MPF为56.00±2.72;头向右侧旋至极限60s时,MF为59.00±2.53,MPF为71.00±4.64;头强力前屈5min的前1minMF为43.00±4.27,MPF为95.00±4.61;后1min时MF为19.00±3.73,MPF为48.00±4.22。结论:不同体位下胸锁乳突肌的MF和MPF值不同,这可能与该肌的不同部位、形态结构特点及功能相关。提示某些不当体位姿势可造成胸锁乳突肌的劳损。

原发性肝癌患者T淋巴细胞亚群变化及其与CTCs、TTV及HBV-DNA的关系

目的探讨原发性肝癌(HCC)患者T细胞免疫功能变化及其与外周血循环肿瘤细胞(CTCs)、肿瘤总体积(TTV)及乙肝病毒(HBV-DNA)定量的关系。方法收集45例HCC患者外周血,45例正常成年人外周血作为对照组。用流式细胞学技术测定CD3^+T细胞、CD4^+T细胞及CD4^+/CD8^+比值;采用益善生物技术公司的"免疫去除结合纳米过滤法"Can Patrol TM行CTCs检测。收集患者肿瘤最大直径及乙肝病毒定量(HBV-DNA)等临床病理参数。将HCC组患者依据CD4^+/CD8^+平均值分成高、低两组,比较两组之间CTCs、TTV、HBV-DNA定量的差别。结果 HCC组CD3^+T细胞、CD4^+T细胞及CD4^+/CD8^+明显低于对照组(P<0.05),CD8^+T细胞值明显高于正常组(P<0.05)。高CD4^+/CD8^+组CTCs总数及间质型CTCs明显低于低CD4^+/CD8^+组(P<0.05),而两组上皮型CTCs及混合型CTCs无明显差异(P>0.05)。CD4^+/CD8^+比值与TTV呈正相关(P<0.05),与CD8^+T细胞百分比呈负相关(P<0.05)。不同HBV-DNA组之间,CD4^+/CD8^+没有统计学差异(P>0.05)。结论 HCC患者T细胞免疫功能明显降低。T细胞免疫功能与CTCs、TTV与有着密切关系:T细胞免疫功能越差,外周血中CTCs越多、TTV越大。

急性门静脉血栓形成的诊治

目的探讨急性门静脉血栓形成(PVT)的诊治。方法回顾性分析55例经影像学检查或手术证实的急性门静脉血栓形成患者的诊断和治疗经过。结果 11例以非门静脉血栓形成的诊断入内科治疗,首诊为门静脉血栓形成44例入外科治疗。采取药物治疗47例,死亡4例,治愈43例。手术取栓8例,治愈5例,死亡3例。结论门静脉血栓形成容易误诊或漏诊,及早给予溶栓等药物治疗对大部分门静脉血栓形成治疗有效,严重并发症患者及时手术或介入治疗,可以显著降低死亡率。

载^(131)I和阿霉素“双弹头”F(ab′)_2片段免疫毫微粒的抗人肝癌作用

目的研究载131I和阿霉素“双弹头”F(ab′)2片段免疫毫微粒的抗肿瘤效应及其在荷瘤裸鼠体内的分布。方法采用氯胺T法,将核素131I结合到抗人肝癌HAb18抗体的F(ab′)2片段靶向的载阿霉素毫微粒上,构建“双弹头”F(ab′)2片段免疫毫微粒;采用花环形成实验、MTT比色分析法等分别研究该免疫毫微粒对人肝癌细胞株(SMMC-7721)的特异性结合及体外细胞毒作用;应用皮下荷人肝癌裸鼠模型,评价该免疫毫微粒的体内分布及其抗肝癌作用。结果“双弹头”F(ab′)2片段免疫毫微粒能特异性结合于SMMC-7721细胞周围形成花环,其IC50明显低于“单弹头”F(ab′)2片段免疫毫微粒;该免疫毫微粒经尾静脉给药后,主要分布于肝、脾等处,而经瘤体注射主要滞留于瘤体内,其抑瘤率显著高于对照“单弹头”毫微粒。结论载131I和阿霉素“双弹头”F(ab′)2片段免疫毫微粒,具有较“单弹头”F(ab′)2片段免疫毫微粒更佳的抗肿瘤效应。

86例肝移植术后早期细菌感染患者的细菌类型及耐药性分析

目的:探讨肝移植术后早期肺部并发症的临床特点及危险因素,为临床防治提供参考和依据。方法:回顾性分析本院2004年8月至2009年12月所施行的163例肝移植患者中细菌感染病例,通过细菌培养鉴定及药敏试验分析细菌感染特点。结果:86例患者术后发生细菌感染,共分离出166株病原菌,患病率为52.7%。感染部位主要发生在呼吸道(68.2%),其次为血夜(9.6%)和中段尿(8.4%),感染主要发生在术后1月内,前两周最常见(81.9%)。感染的细菌中G-菌76株(46.2%),G+菌68株(39.3%),真菌24株(14.5%),其中以鲍曼氏不动杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌、溶血葡萄球菌、金黄色葡萄球菌常见(53.2%)。其中40例病人合并两种以上病原菌感染。碳青霉烯类和氨基糖苷类、恶唑烷酮类分别对G-菌和G+菌高度敏感。结论:细菌感染是肝移植术后早期常见的并发症,临床上应加强肝移植术后患者细菌的鉴定和耐药监测,争取合理选用抗菌药物。

有效镇痛对肝癌术后肝功能恢复的影响

目的探讨疼痛对开腹肝切除术后肝功能恢复的影响。方法收集257例行肝部分切除术且经病理诊断为原发性肝癌患者的临床病理资料,按数字等级法(NRS)分为有效镇痛组(NRS≤3分)和无效镇痛组(NRS>3分),对比分析两组术后丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBi L)、白蛋白(ALB)及凝血酶原时间(PT)等肝功能指标变化情况。结果两组患者术前肝功能无差异,有效镇痛组患者术后1、3、5、7 d ALT、AST、PT、TBIL明显低于无效镇痛组(P<0.05),肝功能恢复延迟发生率低、恢复快。结论有效镇痛治疗可减轻肝癌患者术后肝功能损害、加速肝功能恢复。

肝移植及常规肝切除术后胸腔积液对比分析

目的对比分析肝移植及常规肝切除术后胸腔积液的原因,总结其诊断及治疗经验。方法回顾性总结符合入选条件的56例肝移植病例及同期83例常规肝切除病例,通过B超及X线检查对比分析两种术式术后胸腔积液情况,对影响呼吸功能的患者实施胸腔穿刺置放深静脉插管抽液,分析胸腔积液的原因。结果 56例肝移植患者中B超检查提示有39例术后发生右侧胸腔积液,而X线检查提示有27例术后发生右侧胸腔积液。83例常规肝切除患者中B超检查提示有25例术后发生右侧胸腔积液,而X线检查提示有12例术后发生右侧胸腔积液。两种方法检查间差异有显著性(P<0.05)。肝移植术后右侧胸腔积液的发生率明显高于常规肝切除组(P<0.01)。结论肝脏手术后胸腔积液是多因素导致的;肝移植术后胸腔积液的发生率明显高于常规肝切除;B超检查诊断胸腔积液的准确度明显高于X线,如需同时了解肺部情况,则选择X线检查或同时行B超及X线检查;少数影响呼吸功能的胸腔积液患者需及时行穿刺插管抽液。

双袖套法大鼠异体原位肝移植模型改进与体会

目的探讨建立一种灌注更彻底,操作更简便实用的改进双袖套法大鼠异体原位肝移植模型。方法在Kamada双袖套法的基础上进行改良。供、受体均为SD雄性大鼠,以4℃林格氏液经腹主动脉、肝门静脉低压双重灌注供肝,受体肝上下腔静脉采用血管膜端端"三点"标记吻合法,肝门静脉及肝下下腔静脉采用袖套吻合法,胆管吻合采用单管插管吻合。结果 54例正式实验受体无肝期较短,手术1d存活率94.4%(51/54)。受体大鼠术后一般状况良好。结论改良后双袖套法大鼠原位肝移植模型操作简易快捷,成功率较高。