临床分离MRSA中氨基糖苷类抗生素磷酸化酶的克隆表达与活性测定

目的:从临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中克隆氨基糖苷类抗生素磷酸化酶基因并异源表达,建立其磷酸化反应的体外测活方法。方法:考察临床分离MRSA对氨基糖苷类抗生素的敏感性,从中克隆磷酸化酶基因,并连入pET28a构建表达载体和菌株,将表达的重组蛋白以亲和色谱分离纯化;使用ESI-MS以及抗菌活性实验测定其磷酸化酶活性。结果:药敏实验表明临床分离的6株MRSA均对氨基糖苷类抗生素不敏感,重组表达克隆到的磷酸化酶,表达产物纯化后的纯度大于90%,体外催化试验表明,重组磷酸化酶2h内可以催化反应体系内的卡那霉素B完全磷酸化。结论:异源表达的氨基糖苷类抗生素磷酸化酶具有很好的活性,体外测活方法可靠快捷,为建立氨基糖苷类抗生素磷酸化酶抑制剂筛选模型打下基础。

不同提取条件对丹酚酸B和E相对含量的影响

通过HPLC、LC-MS等手段确定了丹参提取物中的小组分丹酚酸E,并考察了加水量、提取温度、时间和pH对丹酚酸B、E相对含量及丹酚酸B提取率的影响。结果显示:不同提取条件下,丹酚酸B、E相对含量变化显著,推测两者存在一定转化机制。丹酚酸B的最佳提取工艺为:丹参药材中加入8倍体积水,用1 mol/L盐酸调至pH 4 0,70℃提取60min,丹酚酸B的收率大于90%。

银杏叶中银杏内酯A分离纯化工艺研究

目的:建立一种简易的自银杏叶中提取、分离和纯化银杏内酯A的方法。方法:依次通过乙醇溶液搅拌提取、乙酸乙酯萃取、大孔树脂吸附与洗脱及结晶和重结晶对银杏叶中的银杏内酯A进行分离纯化。以银杏内酯A的得率和纯度为指标,对银杏内酯A的分离纯化工艺进行优选。结果:确定银杏内酯A提取、分离和纯化的最佳工艺条件为:将银杏叶乙醇提取物混悬液的酸碱液调节至pH3后进行萃取;选择NM100树脂为固定相,萃取物溶液调节至pH3后上柱,流速控制为1 mL.min-1,再以体积分数为30%和50%的乙醇溶液进行梯度洗脱;收集50%乙醇洗脱液,浓缩后4℃下静置过夜,得粗晶体并进行重结晶,体系中乙醇与水的体积比为2∶1。该工艺制得的银杏内酯A晶体纯度高于99%,总收率约为60%。结论:该工艺稳定、简便易行,适合工业化大生产。

不同产地白芍饮片对炮制醋白芍的影响

目的:探究不同产地白芍饮片炮制所得醋白芍的差异。方法:将安徽、浙江两个产地的白芍饮片炮制为醋白芍,用色差仪测定醋白芍的色度值(L^(*)、a^(*)、b^(*));热浸法测定水溶性浸出物的含量;采用高效液相色谱法(HPLC)建立醋白芍的特征图谱并进行相似度评价;采用SIMCA 14.1进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)。结果:与杭白芍的醋炙品比较,亳白芍的醋炙品颜色浅,L^(*)偏高、a^(*)、b^(*)偏低,水溶性浸出物含量较高,且不同批次亳白芍的醋炙品浸出物间亦有差异;10批醋白芍建立的HPLC特征图谱共标定6个共有峰,相似度为0.838~0.999;共有峰经指认分别为没食子酸、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷;PCA、OPLS-DA将10批醋白芍聚为两类,并筛选出a^(*)、L^(*)、峰4(芍药苷)峰质比、b^(*)、峰2(儿茶素)峰质比为引起不同批次醋白芍质量差异的指标成分。结论:醋白芍的外观性状和内在质量受白芍饮片产地的影响,在开发利用的过程中,固定饮片的产地是有必要的。