酪蛋白磷酸肽锌螯合肽的分离及结构性质表征

酪蛋白磷酸肽(Casein Phosphopeptides,CPPs)是一类具有二价金属元素螯合活性的多肽集,而定向获得特异性营养元素螯合活性的酪蛋白磷酸肽具有理论和实际意义。采用Q强阴离子交换色谱和高效反相制备色谱(RP-HPLC)连续色谱方案分离碱性蛋白酶酶解得到的CPPs,获得锌高螯合活性的CPPs,并运用氨基酸组成、紫外光谱、红外光谱、固体核磁共振^(13)C谱、~1H谱、^(31)P谱表征分析酪蛋白磷酸肽螯合锌(CPP-Zn)的螯合性质。结果表明:CPPs经连续色谱分离可得具有高锌螯合活性的肽,其锌螯合活性可达88.68μg/mg。螯合前后CPPs的结构及氨基酸组成发生了明显变化,其中的磷酸基团参与了螯合,推测其主要结合位点是—COOH、—NH_2及P—OH中的—OH。

酪蛋白铁螯合肽的分离纯化及结构解析

为探讨酪蛋白铁螯合肽螯合机制,对比固定金属亲和层析和阴离子交换层析初分再结合Sephacryl S-100HR凝胶过滤层析分离对酪蛋白铁螯合肽进行分离纯化效果,并通过紫外光谱、傅里叶变换红外光谱和液相色谱-质谱联用方法对纯化后多肽结构进行解析。结果表明,亲和层析与凝胶过滤层析法结合分离得到的酪蛋白多肽组分的铁螯合活性高于阴离子交换层析组分,其铁螯合活性可达39.56μg/mg。紫外光谱和红外光谱检测证明酪蛋白肽和铁离子形成螯合物,羧基位点螯合前后发生变化;质谱鉴定出3条肽段,氨基酸序列为HIQKEDVPSER、ITVDDKHYQK和TRLHPVQER,肽段中Glu、Asp、Gln出现频率高,侧链均含有C=O键,推测多肽的羰基位是铁离子的主要螯合位点。