舒洛地特对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的研究舒洛地特(SDX)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及其机制。方法 CCK-8法确定ox-LDL干预HUVEC剂量及SDX药物浓度,活性氧(ROS)检测试剂盒验证SDX对HUVEC的保护作用。实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS)、小凹蛋白(caveolin)-1 m RNA表达,免疫印迹试验检测e NOS、caveolin-1蛋白表达。Transwell试验检测HUVEC迁移能力,免疫印迹试验检测抗磷酸化e NOS(p-e NOS)蛋白表达。结果 100μg/ml ox-LDL刺激下,HUVEC细胞活力显著下降(P<0.01),加入0.125 LRU/ml SDX后细胞活力明显改善(P<0.01),ROS产生降低(P<0.01)。SDX可下调ox-LDL损伤HUVEC后caveolin-1 m RNA和蛋白表达(P<0.05),上调e NOS m RNA和蛋白、p-e NOS蛋白表达(P<0.05),明显改善受损HUVEC迁移能力(P<0.01)。结论 SDX通过调控caveolin-1/e NOS信号通路改善受损HUVEC细胞迁移能力,从而保护内皮细胞。

一站式治疗重症缺血性糖尿病足感染15例

目的总结重症缺血性糖尿病足感染创面的一站式治疗经验。方法回顾性分析2015年6月至2016年4月收治的15例重症缺血性糖尿病足坏疽患者(15条患肢)临床资料。对所有患者采用腔内修复术(EVR)开通闭塞段血管、手术清创及创面封闭负压引流(NPWT)、抗菌保湿伤口敷料进行一站式序贯治疗,评价感染创面愈合率及患肢保肢率。结果 15例患者中下肢动脉造影显示下肢多节段病变13例,单纯小腿病变2例;泛大西洋学会联盟(TASC)Ⅱ分级D级小腿动脉病变13条,C级病变2条。EVR术后,14条患肢至少开通1支小腿流出道;足底动脉环路(PPL)呈完整弓6例,半弓7例,无弓2例;清创后应用带自制冲洗设备NPWT,创面感染控制时间为(7.85±2.84)d。出院后每3~4日随访,并以抗菌保湿的磺胺嘧啶银脂质水胶伤口敷料换药,结果显示创面愈合12例,平均愈合时间(3.70±0.87)个月,3例未愈合,其中2例小腿截肢(13.3%,足部均为PPL无弓),1例死于心血管事件;创面愈合组PPL病变情况与未愈合组比较,差异有显著统计学意义(P=0.006 7)。结论重症缺血性糖尿病足感染治疗较复杂。EVR、带自制冲洗设备NPWT及抗菌保湿创面敷料一站式联合治疗,可作为首选方法有效增加患肢血供,缩短感染控制时间,降低截肢率。

神经轴突因子Netrin-1调控急性肠系膜缺血后微血管新生机制的研究进展

急性肠系膜缺血（acute mesenteric ischemia,AMI）是一种急性腹部血管危重症,是指血栓形成、心脏栓子脱落、血管狭窄、局部受压、非阻塞性因素等各种原因引起的肠系膜动脉或静脉血流障碍,直接导致肠道缺血的一组临床病症。AMI发病率虽不及心肌梗死、脑卒中,死亡率却高达50%-80%。

慢病毒介导的miPSC-EC YAP基因过表达及稳定感染细胞系的建立

目的建立稳定过表达Yes相关蛋白(YAP)的小鼠诱导性多能干细胞来源的内皮细胞(miP SC-EC)系,为miP SC-EC过表达YAP基因的体内外实验研究奠定基础。方法将模板质粒(p CMV-Flag-YAP2-5SA)改建成慢病毒表达质粒(p PGK-2Flag-YAP2-Puro);将慢病毒表达质粒与包装质粒组成共包装系统转染293FT细胞;包装慢病毒,收集病毒原液,超滤浓缩,测定滴度。诱导miP SC分化为EC,观察其形态特征,并行组织化学鉴定。包装好的慢病毒感染miP SC-EC,嘌呤霉素筛选稳定感染的细胞系miP SC-EC/YAP,并用RT-PCR及Western blot方法验证。结果慢病毒表达质粒(p PGK-2Flag-YAP2-Puro)构建成功,并成功包装YAP基因过表达慢病毒,滴度达到1.2×109 TU/ml。miP SC诱导分化所得细胞符合EC形态特征,几乎都表达EC标志CD31。转染YAP的miP SC-EC中YAP m RNA表达水平较未转染细胞明显升高,YAP蛋白高表达(未转染细胞中YAP蛋白几乎不表达)。结论成功构建YAP基因慢病毒过表达载体,诱导miP SC分化为EC,成功建立YAP基因稳定感染细胞系miP SC-EC/YAP。

2016华夏医学论坛血液透析通路医师继续教育需求调查与分析

近年来因慢性肾衰竭进行血液透析的患者不断增加，而目前国内临床医师对血液透析通路的理解和处理多数是依据各自长期的临床经验。由于血液透析通路相关的学术交流有限、跨学科交流缺乏，使得我国的血液透析通路临床医师水平参差不齐。因此通过定期进行血液透析通路继续教育，普及血液透析通路的基础知识，进而提升国内血液透析通路医师的水平。本研究通过调查参加2016年华夏医学论坛血液透析通路论坛的医师基本情况及其继续教育需求，为今后开展血液透析通路继续教育提供一定理论依据。

降低/消除诱导性多能干细胞致瘤性的研究进展

诱导性多能干细胞,即i PSC(Induced Pluripotent Stem Cell),是指通过基因重新编排方法,对已成熟分化的细胞进行诱导,得到具有类似胚胎干细胞(ESC,Embryonic Stem Cell)的多向分化潜能性细胞。随着i PSCs诱导技术的不断发展,基因治疗为突破疾病的传统疗法提供了无限可能。而i PSC应用到临床基因治疗之前,需要进行一系列标准化的检测,对其稳定性(stability)。

慢病毒介导Yes相关蛋白基因过表达促小鼠诱导性多能干细胞来源的内皮细胞增殖

目的探讨慢病毒介导Yes相关蛋白（YAP）过表达促小鼠诱导性多能干细胞来源的内皮细胞（miPSC-EC）增殖的机制。方法诱导小鼠诱导性多能干细胞（miPSC）为内皮细胞（EC），慢病毒介导质粒pPGK-2Flag-YAP转染miPSC-EC，嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株miPSC-EC/YAP。Western blot验证YAP是否成功转染miPSC-EC，并检测转染YAP后miPSC-EC内人第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因（PTEN）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）等蛋白的表达，同时应用噻唑蓝（MTT）比色法检测YAP对miPSC-EC增殖的影响。结果miPSC诱导分化所得细胞形态符合EC特征，几乎都表达EC标志血小板内皮细胞黏附分子（CD31）。Western blot结果显示，转染YAP的miPSC-EC中YAP高表达（未转染细胞YAP几乎不表达），miPSC-EC/YAP组较未转染组PTEN相对表达量明显降低（0.635±0.017比0.879±0.034, P=0.023），p-Akt/相对表达量显著升高（0.450±0.025比0.073±0.018, P=0.007）。同步化之后24、48、72 h，miPSC-EC/YAP组吸光度（A）值较未转染组显著增加（0.113±0.004比0.077±0.004，P=0.000；0.368±0.010比0.199±0.006，P=0.000；0.716±0.004比0.418±0.018，P=0.000）。结论成功诱导miPSC为EC，建立过表达YAP的细胞株miPSC-EC/YAP。过表达YAP抑制PTEN的表达，提高Akt磷酸化。YAP可能通过参与磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路促进miPSC-EC的增殖。

伤口呈色显影用于预测重症肢体缺血患者血管腔内治疗后溃疡愈合的价值初探

目的探讨伤口呈色显影预测重症肢体缺血患者血运重建术后溃疡愈合的价值。方法回顾性分析上海交通大学医学院附属仁济医院血管外科2011年6月1日-2014年6月30日收治成功实施Angiosome概念指导腔内血运重建的重症肢体缺血的缺血性溃疡患者临床资料。根据血管腔内血运重建术后伤口呈色显影情况分组，其中伤口呈色（＋）组109例，伤口呈色（-）组64例，分别比较患者保肢率，溃疡愈合时间的差异，试分析其作为重症肢体缺血的缺血性溃疡愈合预测因子的价值。采用SPSS19．0软件进行统计学分析。正态分布计量资料以均数±标准差（元±s）表示，两组比较采用t检验。计数资料以频数和百分比表示，两组比较采用Pearsonx。检验或Fisher确切概率法。结果纳入研究患者共173例（173条患肢），两组患者年龄、性别比例、吸烟史、冠心病、糖尿病、慢性肾功能不全、术前踝肱指数、术后踝肱指数差异均无统计学意义，溃疡愈合时间：伤口呈色（＋）组（3．9±1．9）个月低于伤口呈色（-）组（7．9±2．6）个月，差异有统计学意义（P〈0．05）。累积保肢率：伤口呈色（＋）组（90．2％）高于伤口呈色（-）组（78．0％），差异有统计学意义（P〈0．05）。通过Logistic回归分析，校正年龄、性别、吸烟史、高血压异常等因素后，伤口呈色（-）（OR=4．5，P〈0．05）、IRc（间接血供有侧支）血运重建（OR=2．6，P〈0．05）均是溃疡难愈合的独立危险因素。结论伤口呈色显影阳性显示足部循环较好，可以作为重症肢体缺血的缺血性溃疡愈合的预测因子，而伤口呈色显影阴性是溃疡难愈合的独立危险因素。

动脉粥样斑块内微小核糖核酸-199a抑制单核细胞炎性反应

目的探讨动脉粥样硬化斑块中巨噬细胞高表达的微小RNA（miRNA，miR）-199a-3p对外周血单核细胞趋化及炎性因子表达的影响及其机制。方法运用免疫组织荧光和原位杂交技术分析下肢动脉粥样硬化斑块表达及分布；收集并提取动脉粥样硬化患者外周血中外泌体，透射电镜观察其形态并确定所携带的miR-199a-3p水平；miR-199a-3pmimics转染刺激单核细胞，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测并分析其受体极迟抗原（VLA-4）、淋巴细胞功能相关抗原（LFA）-1及炎性因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6的表达。结果斑块内巨噬细胞miR-199a-3p表达上调[阳性细胞比例：对照组（2．3430±0．2821）％，实验组（6．9680±0．5901）％，P〈0．01]，并以外泌体形式分泌到外周血中，抑制单核细胞趋化因子受体和炎性因子表达。结论动脉粥样斑块内的巨噬细胞通过miR-199a-3p外泌体抑制外周血中单核细胞趋化和炎性因子释放，减少巨噬细胞浸润和泡沫细胞的形成。

胞外组蛋白在静脉血栓形成相关机制中的研究进展

根据组蛋白与染色质结合位点不同，其可分为核心组蛋白（H2A、H2B、H3、H4）和连接型组蛋白（H1）；若按照成分不同可分为多赖氨酸组（H1、H2A、H2B）和多精氨酸组（H3、H4）；而按照组蛋白存在位置不同可分为胞外组蛋白、胞质组蛋白和核内组蛋白。核内组蛋白结合并调控DNA转录；胞质组蛋白参与调控机体免疫及炎症反应；胞外组蛋白介导炎症过程中肺、肝等组织损伤，参与脓毒症、血小板减少症、凝血酶产生等一系列生理、病理过程。目前研究显示，

中性粒细胞胞外陷阱检测技术研究进展

传统观念认为中性粒细胞作为人体固有免疫的第一道防线，通过吞噬外源性病原微生物发挥作用。2004年，Brinkmann等[1]发现活化中性粒细胞可释放解聚染色质及胞内蛋白至胞外，形成丝网状结构——中性粒细胞胞外陷阱（NETs），核内组蛋白以及胞质中高表达的抗菌肽和颗粒蛋白酶依附于胞外染色质，协同发挥捕获、杀灭病原体的作用。随后大量研究发现，NETs不仅参与清除外源性病原体，同时参与体内无菌性炎症过程，包括：慢性疾病、自身免疫性疾病、血栓形成以及癌症发生与转移。为了进一步揭示NETs在这些疾病发生发展中如何发挥作用，首先需要证实病理状态下中性粒细胞的大量活化及NETs的释放。目前的检测技术已实现NETs定量、定性分析，但各类方法在敏感性、时效性、特异性方面尚存在一定差异。