Th22细胞及miR-200a在肝纤维化小鼠模型中的表达

目的研究辅助性T细胞22(Th22)及微小RNA-200a(miR-200a)在四氯化碳(CCl 4)诱导肝纤维化小鼠模型中的表达及相互关系。方法纳入雄性BALB/c小鼠40只,根据随机数字表法分为模型组(n=20)和对照组(n=20)。对照组腹腔内注射橄榄油,模型组腹腔内注射CCl 4溶液建立肝纤维化模型。HE和Masson染色观察小鼠肝脏病理改变,免疫组织化学染色检测肝脏组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,流式细胞术检测小鼠脾脏Th22细胞数变化,RT-PCR检测肝脏组织IL-22和miR-200a mRNA的表达。结果(1)肝组织病理切片HE染色和Masson染色显示:CCl 4腹腔注射法成功建立肝纤维化小鼠模型。(2)模型组α-SMA表达量明显高于对照组(P<0.05)。(3)模型组小鼠脾脏Th22细胞亚群比例明显高于对照组(P<0.05)。(4)模型组的肝组织IL-22 mRNA的表达量明显高于对照组,模型组的肝组织miR-200a mRNA的表达量低于对照组(均P<0.05)。结论CCl 4致肝纤维化模型小鼠Th22细胞呈现高表达,miR-200a mRNA呈现低表达,Th22细胞及miR-200a可能参与了肝纤维化的发生发展过程。

线粒体内膜转位酶13调控肝星状细胞活化和增殖的实验研究

目的:研究线粒体内膜转位酶13(TIMM13)的表达对小鼠肝星状细胞活化和增殖的影响,探讨TIMM13在肝纤维化的的进展中的作用。方法:用5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL转化生长因子-β1(TGF-β1)作用小鼠肝星状细胞系JS-1细胞24 h,诱导JS-1细胞活化,实验分为对照组(0 ng/mL组)、5 ng/mL组、10 ng/mL组、20 ng/mL组;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹(western blotting)法检测各组TIMM13、肝纤维化指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)的mRNA与蛋白表达水平;在JS-1细胞中分别敲低和过表达TIMM13,将实验分为空载组(对照组)和沉默组/过表达组,用RTqPCR和western blotting法检测TIMM13、α-SMA和COL1A1的mRNA与蛋白表达水平,用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测沉默/过表达TIMM13的第0、第24、第48和第72小时细胞的增殖情况。结果:与对照组比较,5 ng/mL组、10 ng/mL组、20 ng/mL组中TIMM13的mRNA表达升高(均P<0.05),5 ng/mL组、10 ng/mL组中TIMM13蛋白表达水平增高(均P<0.05);沉默组中TIMM13、α-SMA和COL1A1的mRNA表达水平相对于对照组降低(均P<0.01),TIMM13和α-SMA的蛋白表达水平降低(均P<0.01),在第48小时和第72小时JS-1细胞增殖能力被明显抑制(均P<0.05),而过表达组中TIMM13、α-SMA和COL1A1的mRNA表达水平升高(均P<0.05),TIMM13和α-SMA的蛋白表达水平升高(均P<0.05),在第48小时和第72小时促进了JS-1细胞的增殖能力(均P<0.05)。结论:TIMM13的表达促进小鼠肝星状细胞的活化和增殖,进而促进了肝纤维化的发展。