一种新型植物病变取样器设计

设计背景随着城市绿色生态空间的不断拓展,人们对园林绿化品质的要求越来越高。在“科学发展观”和“生态优先,科学发展”的基本原则指导下,通过园林绿化建设,持续拓展城市生态空间,因地制宜做好绿化工作成为提高城市现代化水平和人居环境质量的重要方式和保障。城市园林绿化建设既是绿色现代化城市发展的重要组成部分,也是社会主义精神文明的体现,因此保护园林生态环境就成为城市绿化的一项必要且重要的工作。

伪狂犬病病毒TK/gI/gE三基因缺失株的构建

为了构建伪狂犬病病毒（PRV）TK/gI/gE三基因缺失重组病毒,试验以PRV-JL14作为母本株,将其基因组与转移载体进行同源重组后,以增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP）作为标记基因进行筛选,先后敲除gI、gE和TK基因大部分序列,获得重组病毒PRV-ΔgIgE/TK,并将重组病毒在BHK-21细胞中传代培养并绘制其一步生长曲线,同时以不同剂量对小鼠进行攻毒试验。结果表明：TK、gI和gE基因缺失后的重组病毒基因组稳定,在BHK-21细胞中传代培养20代未见突变;与母本株PRV-JL14相比,PRV-Δg IgE/TK在BHK-21细胞中的增殖能力没有降低,且对小鼠的致病力显著降低。说明试验构建的重组病毒PRV-ΔgIgE/TK可以作为猪伪狂犬病的候选疫苗株。

表达猫衣原体momp蛋白的重组狂犬病病毒SRV9-MOMP的构建与鉴定

为构建表达猫衣原体主要外膜蛋白(momp)的重组狂犬病病毒,以狂犬病病毒SRV9株反向遗传质粒pUC57-SRV9为骨架,在P/M基因间隔序列处插入MOMP基因,获得正确的重组全长转录质粒pUC57-SRV9-MOMP(P/M)。再将全基因组质粒与pUC57-N(SRV9)、pUC57-P(SRV9)、pUC57-G(SRV9)、pUC57-L(SRV9)4个辅助质粒共转染BSR-T7细胞系。经直接免疫荧光法验证,成功拯救出病毒SRV9-MOMP。Western-blot和RT-PCR检测表明,momp在重组病毒SRV9-MOMP感染的细胞内被稳定表达。本研究证明狂犬病病毒SRV9株具有作为载体表达外源蛋白的潜力,为研制高效、安全、经济的猫衣原体病疫苗奠定了基础。

重组杆状病毒高效表达猪圆环病毒2型Cap蛋白及其免疫特性分析

目的利用重组杆状病毒高效表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)Cap蛋白,并分析该蛋白的免疫特性。方法将PCV2 Cap基因克隆至转移载体pFastBacⅠ,转化感受态E.coli DH10Bac细胞,获得重组杆粒r Bacmid-Cap,转染Sf9细胞,SDS-PAGE和Western blot法检测重组杆状病毒,并于High Five(H5)细胞中进行高效表达。将小鼠随机分为PBS对照组、杆状病毒组、重组杆状病毒组及疫苗对照组,均经小鼠肌内注射,100μL/只,分别于第0和14天进行免疫,于首免后第21、28、35及42天经小鼠眼眶静脉丛采血,分离血清,ELISA法进行检测。结果 PCR和测序分析结果表明,重组转移质粒和重组杆粒构建正确。重组PCV2 Cap蛋白的相对分子质量约28 000,可与抗His标签单克隆抗体及抗PCV2 Cap多克隆抗体发生特异性结合。重组杆状病毒按MOI=5及1感染H5细胞约72 h,PCV2 Cap蛋白表达量最高,表达产量约150μg/mL。首免后第21、28、35及42天,重组杆状病毒组小鼠血清抗体水平明显高于PBS对照组及杆状病毒组(P <0. 001);首免后第21、28、35天,重组杆状病毒组小鼠血清抗体水平明显高于疫苗对照组(P <0. 05),首免后第42天,两组差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论成功利用杆状病毒表达系统高效表达了PCV2 Cap,重组蛋白可诱导小鼠产生较高水平抗体,本研究为PCV疫苗的研制奠定了基础。