抗H7N9流感病毒神经氨酸酶嵌合抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗H7N9神经氨酸酶(neuraminidase,NA)的嵌合抗体,初步鉴定其活性与功能特点。方法采用基因工程技术,将小鼠杂交瘤技术获得的2株特异性靶向流感病毒A/Anhui/1/2013(H7N9) NA的单克隆抗体VH、VL基因分别克隆入嵌合抗体表达载体VH Express及VL Express中,共转染293T细胞后,表达纯化获得抗H7N9 NA的嵌合抗体,对抗体活性及功能进行鉴定。结果获得了两株特异性抗H7N9亚型流感病毒N9嵌合抗体1E2和3E3,这两株抗体识别抗原部位相似,能抑制NA酶活性及耐药N9神经氨酸酶活性,体外细胞实验中能抑制病毒释放,阻止病毒进一步感染细胞。结论本研究构建的两株嵌合抗体能特异性识别A/Anhui/1/2013(H7N9)的N9蛋白,KD值达pM,并能抑制N9酶活性,为流感抗体制备以及HAPI禽流感治疗提供了一种可选择的方法。

来源于H5N1患者的VH1-2编码广谱抗体的筛选与功能研究

目的从禽流感H5N1患者体内筛选分离抗流感病毒血凝素（Hemagglutinin，HA）广谱中和性抗体。方法通过B细胞体外培养、抗体可变区基因筛选及表达等技术，建立H5N1患者外周血中交叉反应性B细胞及H5N1假病毒中和活性B细胞的抗体基因文库。利用293T细胞表达系统体外表达抗体库，使用ELISA及假病毒中和试验筛选潜在的广谱抗体，并鉴定其功能。结果获得由VH1-2编码的抗体基因，其编码抗体可广谱结合H1，H5，H6，H9及H7亚型，并对GX-H5N1假病毒有良好的中和能力，该类抗体轻链为Vκ3-20/Jκ4和Vκ3-20/Jκ5。结论H5N1病毒感染可诱导产生广谱反应性抗体。