基于Wnt通路探讨生地黄水提物对单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化的作用机制

目的观察生地黄水提物对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾纤维化的影响,并基于Wnt通路探讨其延缓肾纤维化进程的可能机制。方法通过结扎左侧输尿管建立UUO大鼠模型。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和生地黄低、中、高剂量组(0.8、1.6、3.2 g·kg^(-1)),术后连续灌胃给药14 d。采用HE染色法及Masson染色法观察生地黄水提物对梗阻侧肾脏病理损伤和纤维化的改善作用;采用免疫组化法检测肾脏纤维化相关蛋白CollagenⅠ、α-SMA、Vimentin的表达和分布;免疫荧光法检测上皮间质转化标志蛋白α-SMA、E-cadherin的表达;Western Blot法检测Wnt通路关键蛋白Wnt5a、GSK-3β和β-catenin的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾脏病理损伤和间质胶原纤维沉积严重,E-cadherin表达和分布减少,CollagenⅠ、α-SMA、Vimentin以及Wnt5a、GSK-3β、β-catenin蛋白表达明显上调(P<0.01)。与模型组比较,生地黄各剂量组能够改善UUO大鼠的肾小管扩张、小管上皮细胞空泡变性以及坏死等病理学改变和间质胶原沉积,增加E-cadherin表达和分布,并明显下调CollagenⅠ、α-SMA、Vimentin、Wnt5a、GSK-3β和β-catenin蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论生地黄水提物能够改善UUO模型大鼠肾脏病理损伤和纤维化程度,其机制可能与抑制Wnt通路活化,阻抑上皮间质转化,从而减少细胞外基质沉积,延缓纤维化进程有关。

RP-HPLC法同时测定六味地黄胶囊中3种成分含量

[目的]建立同时测定六味地黄胶囊中马钱苷、芍药苷和丹皮酚3种成分含量的反相高效液相色谱法（RP-HPLC）。[方法]以Waters ODS C18（4.6 mm×250 mm,5μm）柱为分析柱、甲醇-0.1%磷酸为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长芍药苷和马钱苷为230 nm、丹皮酚为274 nm,柱温40℃。[结果]芍药苷在0.066 5~1.663 2μg、马钱苷在0.107 9~2.697 7μg、丹皮酚在0.122 4~3.060 0μg范围内均具有良好的线性关系,相关系数（r）分别为0.999 4、0.999 8、0.999 9,平均回收率为芍药苷97.63%（RSD=0.82%）、马钱苷97.66%（RSD=0.74%）、丹皮酚96.22%（RSD=1.21%）。[结论]该方法简便、准确、重复性好,可用于六味地黄胶囊的质量控制。

补肾益精中药治疗肾精亏虚证相关疾病的生物学物质基础及作用机制的预测与验证

"肾精"是中医学的重要物质概念,但其实质至今未明。补肾益精中药治疗肾精亏虚证的临床应用极其广泛,但其生物学物质基础及其作用机制至今未被阐明。本文拟探寻多种补肾益精中药治疗多种肾精亏虚证疾病的共同作用的重要靶点,以期阐明其作用机制,并对阐释"肾精"本质提供参考。本文首先采用网络药理学方法,依据TCMSP、DisGeNET、Uniprot等数据库及研究报道文献资料,构建3味经典补肾益精中药(熟地黄、制首乌、黄精)与5种公认的肾精亏虚证疾病(骨质疏松症、阿尔茨海默症、贫血、不孕不育症、少精症)的"(补肾益精功能)药物-成分-靶点-疾病(肾精亏虚证候)"的关联网络。从该网络中筛选出关键靶点群,利用Clue GO和DAVID数据库对其进行生物功能注释。最后采用自然衰老肾精亏虚证小鼠模型,与青年小鼠、灌胃熟地黄的模型小鼠对比,验证上述网络分析所获得的重要靶点。小鼠的饲养和使用均符合中国《实验动物管理条例》及西南大学药学院实验动物伦理委员会相关规定。网络药理学分析结果发现,"(补肾益精功能)药物-成分-靶点-疾病(肾精亏虚证)"关联网络存在175个中药与疾病的相同靶点,经分析网络拓扑参数获得71个关键靶点。这些靶点涉及转录、RNA代谢、DNA依赖的转录调控等多种生物过程;核腔、细胞器内腔、膜封闭腔等细胞成分;转录调节、转录因子活性、酶结合等分子功能,以及参与过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPARα)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、缺氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1)和促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)等信号通路调控。动物实验验证结果显示,自然衰老肾精亏虚证模型小鼠EPO含量及其通路中HIF-1α、生长因子受体结合蛋白2(growth factor receptor-bound protein 2,GRB2)、MAPK3、信号传导及转录激活蛋白5A(signal transducer and activator of transcription 5A,STAT5A)、转录因子AP-1(transcription factor AP-1,JUN)和原癌基因c-Fos(proto-oncogene c-Fos,FOS)表达量均显著降低,熟地黄能显著逆转上述各项蛋白的降低。网络药理学预测结果与模型动物验证结果均表明,补肾益精中药治疗肾精亏虚证相关疾病的作用靶点及机制,可能与调节细胞核内转录活性及EPO信号通路有关。