羊栖菜硫酸多糖通过PI3K/AKT通路抑制H2O2诱导的MRC-5细胞氧化损伤

目的阐明羊栖菜硫酸多糖(SFPSⅢ)对过氧化氢(H2O2)诱导的正常人胚肺细胞(MRC-5)氧化应激损伤的保护作用及潜在分子机制。方法通过噻唑蓝(MTT)法检测MRC-5细胞暴露于H2O2或SFPSⅢ后的活力,Hoechst染色法检测细胞凋亡形态,流式细胞仪测定细胞凋亡率,酶联免疫吸附实验测定超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活力、一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量。通过免疫印迹Western bloting检测相关蛋白水平。结果H2O2处理使MRC-5细胞活力显著降低(P<0.05),而SFPSⅢ(200~600μg/mL)干预可明显增强MRC-5细胞活力。酶联免疫法结果表明,SFPSⅢ干预抑制H2O2诱导的细胞内NO和MDA的过度分泌,并增加了H2O2诱导的细胞内SOD和GSH-Px的活力。免疫印迹结果表明,120μmol/L H2O2处理的细胞中p-AKT和p-mTOR相对蛋白表达水平下调,而p-AKT和p-mTOR相对蛋白表达水平在SFPSⅢ处理的MRC-5细胞中被逆转。结论SFPSⅢ对H2O2诱导的MRC-5细胞氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能是激活PI3K/AKT/mTOR通路发挥其抗凋亡作用。研究结果为羊栖菜高附加值产品开发及天然、安全抗氧化功能因子的筛选提供了一定的理论依据。