狐臭柴叶发酵面包制作工艺优化与理化指标分析

为提升狐臭柴(Premna puberula Pamb.)资源的综合开发利用,以狐臭柴叶汁、小麦粉、乳酸菌和酵母等原料制作发酵面包。根据狐臭柴叶汁料液比、清酒乳杆菌(Lactobacillus sakeiDPC)添加量、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae-L23)添加量、白砂糖质量分数、烘烤时间、烘烤温度筛选面包制作条件;进一步探究狐臭柴叶汁料液比、菌种添加量、烘烤时间对狐臭柴叶发酵面包的影响,确定最优工艺。结果表明,料液比、菌种添加量、白砂糖质量分数、烘烤时间及温度均影响狐臭柴叶发酵面包的品质;进一步优化得到料液比1 g∶8 mL、清酒乳杆菌100 mL、酿酒酵母700 mL、烘烤时间25 min为最优工艺,得分82.59,对该工艺条件下面包的理化指标进行检测,表明狐臭柴叶发酵面包符合国标要求,添加狐臭柴叶汁可以提高活性成分含量和抗氧化能力。该研究为狐臭柴的综合利用提供了技术参考。

贵州狐臭柴不同部位提取物及其抗氧化活性

目的:丰富天然抗氧化剂的来源。方法:以贵州地区的狐臭柴(Premna puberula Pamb.)为原料,超声提取并检测了根、茎、叶中总酚和总黄酮含量,比较了根、茎、叶中柚皮素、芹菜素、芦丁、槲皮素4种黄酮类成分含量,测定了提取物对DPPH自由基和ABTS+自由基的清除能力。结果:狐臭柴根、茎、叶中总酚含量分别为3.26,9.58,30.05 mg/g,总黄酮含量分别为0.22,0.58,6.54 mg/g,芦丁和芹菜素含量依次为茎>根>叶。各组织提取物的抗氧化活性均随浓度的升高而增强,与总酚、总黄酮含量呈正相关,其中叶提取物的抗氧化活性最强,当叶质量浓度为0.1 mg/mL时,DPPH自由基和ABTS自由基的清除率分别为82.5%,81.9%,与维生素C的总还原力接近。结论:狐臭柴具有良好的抗氧化活性。

Plackett-Burman联用响应面法优化超声波-酸法提取狐臭柴果胶工艺

探究超声波-酸法果胶提取工艺条件并分析狐臭柴叶片果胶分子结构与理化性质。通过单因素试验确定各因素的范围,再利用Plackett-Burman试验设计筛选影响果胶得率的关键因素,最后采用响应面法进行优化。结果表明,影响果胶提取的关键因素为pH、液料比、超声功率和反应时间。优化得到的工艺参数为pH值1.9、液料比12.5∶1(mL∶g)、超声功率450 W、反应时间95 min,在此条件下果胶得率为11.53%。通过高效液相色谱法对果胶分子质量进行测定,其重均分子质量(weight-average molecular weight,M w)为87.90 kDa,数均分子质量(number-average molecular weight,M n)为56.06 kDa,M w/M n为1.57。狐臭柴果胶中的单糖有鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、木糖、葡萄糖和果糖,其中半乳糖醛酸含量为70.64%,酯化度为77.77%,属于高酯果胶。狐臭柴果胶有很好的凝胶和增稠功能,且DPPH自由基清除率EC 50为(269.31±0.26)μg/mL,有良好的抗氧化活性。

UPLC-FLD法同时测定不同产地白芷中5种香豆素

目的建立UPLC-FLD法同时测定白芷中水合氧化前胡素、佛手柑内酯、氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素的含有量。方法白芷甲醇提取物的分析采用Agilent ZORBAX ECLIPSE Plus C18柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm);流动相0.1%甲酸水-乙腈;体积流量0.4 mL/min;柱温35℃;荧光检测器激发波长259 nm,发射波长490 nm。结果5种成分在各自范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率98.7%~102.5%,RSD 1.02%~4.17%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于白芷的质量控制。

丹荷颗粒治疗高脂血症质量标志物发现研究

为寻找丹荷颗粒治疗高脂血症的质量标志物,该研究基于丹荷颗粒体内成分分析结果,采用Cytoscape软件构建高脂血症-共有靶点-丹荷颗粒体内成分作用网络,利用DAVID及String数据库分别对共有靶点进行生物过程、通路富集及网络拓扑分析,明确丹荷颗粒降脂作用关键靶点及成分,再建立油酸诱导的HepG2细胞脂质堆积模型验证关键成分的降脂药效,最后结合相关成分在制剂中的含量、稳定性、特征性综合确定质量标志物。结果发现,丹荷颗粒体内成分作用于CES1、ADORA2A、ADORA1、APOB、LDLR、PPARA、PPARG、INSR、ESR2、ESR1共10个高脂血症疾病靶点,主要参与脂质代谢过程以及PPAR、cAMP信号通路,其中LDLR、PPARA、PPARG可能是关键靶点,而网络中与关键靶点直接作用的成分为白藜芦醇、柚皮素。白藜芦醇和柚皮素均可降低油酸诱导的HepG2细胞内脂滴数量,改善细胞脂质堆积严重程度,并显著降低细胞内甘油三酯含量,可能为关键成分;鉴于入体成分白藜芦醇和柚皮素来源于制剂中虎杖苷及柚皮苷,且制剂中虎杖苷及柚皮苷特征明显、含量丰富、稳定,故虎杖苷及柚皮苷可作为丹荷颗粒治疗高脂血症的质量标志物。该研究为丹荷颗粒质量标准的建立提供了合理的候选质控指标。

杜鹃兰种子非共生萌发中的形态结构变化

为考查杜鹃兰种子非共生萌发过程中形态与组织结构的变化,通过非共生萌发试验,对其形态特征和树脂切片组织结构进行研究。结果表明,胚龄在120 d左右的种子萌发率最高;种皮木质化可能是导致种子萌发困难的原因之一,通过NaClO处理可破坏种皮,增加其透气透水性,提高种子萌发率。种子萌发、原球茎及幼苗发育伴随着贮藏物质的积累、叶绿体和分生组织的形成。

质谱能量分辨曲线法快速区分香豆素类位置异构体

利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF MS)技术,结合能量分辨曲线,建立了快速区分香豆素类位置异构体的方法。对互为位置异构体的化合物施加2~40 V的动态碰撞能量,以位置异构体中分子质量相同且丰度百分比差异较大的1对碎片离子绘制能量分辨曲线。实现了单取代线型、双取代线型和角型呋喃香豆素以及简单香豆素各类位置异构体的快速区分。依据质谱的高分辨及高灵敏的特征,根据碎片离子的丰度差异,推测了双取代线型呋喃、角型呋喃及简单香豆素产生丰度差异的碎裂机理。结果表明:4对5,8单取代线型呋喃香豆素类、1对双取代线型呋喃香豆素、1对双取代线型和角型呋喃香豆素和1对简单香豆素的能量分辨曲线表现出明显差异。本实验通过质谱能量曲线法对上述7对香豆素类位置异构体进行区分,其中5,8位双取代线型呋喃香豆素、角型和线型呋喃香豆素、双取代简单香豆素这3对位置异构体,首次通过能量分辨曲线发现了丰度有明显差异的1对碎片离子。该方法操作简单,质谱能量分辨曲线差异明显,能够实现在无对照品的情况下快速区分这7对香豆素类位置异构体。

狐臭柴实时荧光定量PCR内参基因的筛选

基于狐臭柴转录组数据,本文筛选出肌动蛋白基因(ACT)、18S核糖体RNA基因(18S rRNA)、α-微管蛋白基因(TUA)、β-微管蛋白基因(TUB)、翻译延伸因子基因(EF-1)和泛素连接酶基因(UBC)等6个候选内参基因,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测不同处理(暗培养、乙烯处理、模拟干旱处理)下、狐臭柴不同器官中各候选内参基因的表达情况,并运用Ge Norm、Norm Finder和Best Keeper等软件对候选内参基因的表达稳定性进行综合分析。结果表明:在狐臭柴不同器官中,18S rRNA和ACT的表达最稳定;暗培养条件下可选择UBC、18S rRNA和EF-1作为内参基因,ACT、EF-1、UBC可作为在外源乙烯处理下的内参基因,模拟干旱处理需引入第6个基因进行矫正。此外,ACT和EF-1在所有样品中的表达稳定性均较好,可以用于荧光定量表达分析。本研究结果为狐臭柴相关基因的功能分析及其调控机理研究提供了基础。

HPLC-MS/MS测定小鼠肝肾中的马兜铃酸-DNA加合物

采用高效液相色谱-串联三重四极杆质谱(HPLC-MS/MS)测定小鼠肝肾中4种马兜铃酸-DNA加合物的含量,并对给药后不同时间小鼠肝肾中马兜铃酸-DNA加合物的含量变化进行监测。选用资生堂Capcellpak AQ C18色谱柱(3 mm×100 mm,3μm),以0.2%乙酸-5 mmol·L^-1乙酸铵为水相,甲醇为有机相进行梯度洗脱,采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式扫描,在多反应监测模式(MRM)下测定马兜铃酸Ⅰ/Ⅱ分别与脱氧腺苷、脱氧鸟苷、脱氧胞苷结合形成的马兜铃酸-DNA加合物。通过分析Balb/c小鼠灌胃给药关木通提取物后60 d内肝肾样品中马兜铃酸-DNA加合物的相对含量发现,肾脏中的4种马兜铃酸-DNA加合物含量均明显高于肝脏,每1×10^6个正常脱氧核苷中大约有15.87个加合物,是肝脏的4.5~7.5倍,部分加合物在给药后第30天仍能检测到。肝脏中的加合物在给药后第1天含量最高,在第7~14天又出现了二次达峰的现象。该结果说明马兜铃酸-DNA加合物在体内消除困难,对研究马兜铃酸肝肾损伤机制具有重要意义。

芪参颗粒的HPLC指纹图谱与多成分定量测定研究

目的 建立芪参颗粒的HPLC指纹图谱分析方法,并对其中的主要成分进行同时定量分析,为芪参颗粒的质量控制提供依据。方法 采用HPLC法,用Agilent Eclipse plus C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长254 nm,柱温30℃。建立10批芪参颗粒样品的HPLC指纹图谱,并进行相似度评价;通过与各组方药味的比对,对共有峰进行归属,通过LC-Q TOF-MS对所有共有峰进行鉴定,并对通过对照品比对确认的9个共有峰进行定量测定。结果 10批样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均大于0.991;对标定的18个共有峰进行归属和鉴定,发现1、2、8、14、18号峰来自黄芪,3~7、9~11号峰来自金银花,12、13、15、16号峰来自丹参,17、18号峰来自甘草;通过对照品的指认,发现4号峰为绿原酸、8号峰为毛蕊异黄酮葡萄糖苷、9号峰为异绿原酸B、10号峰为异绿原酸A、14号峰为芒柄花苷、15号峰为丹酚酸B、16号峰为丹酚酸A、17号峰为甘草酸及18号峰为芒柄花素,并对这9种成分进行了定量测定,测定结果分别为6.676~10.213、0.628~0.963、1.018~1.886、1.082~1.972、0.477~0.790、11.327~17.788、0.519~0.908、2.000~3.638、0.010~0.016mg/g。结论 建立的芪参颗粒HPLC指纹图谱和9个指标成分的同时定量测定方法专属性强,简便、可靠,重复性好,可为芪参颗粒质量控制和评价提供参考。

丹荷颗粒25种特征性成分LC-MS测定及制剂一致性分析

目的建立高效液相色谱-三重串联四级杆质谱(HPLC-MS/MS)联用同时测定丹荷颗粒中25种特征性成分(没食子酸、丹参素、儿茶素、绿原酸、咖啡酸、表儿茶素、芦丁、虎杖苷、金丝桃苷、紫云英苷、柚皮苷、橙皮苷、迷迭香酸、白藜芦醇、丹酚酸B、槲皮素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、异鼠李素、大黄素、乌药碱、荷叶碱、隐丹参酮、丹参酮I、去氢荷叶碱、丹参酮IIA)含量的方法,并对其制剂批次间的一致性进行分析。方法HPLC采用Agilent Rapid Resolution HD C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液;质谱采用动态多反应监测(dMRM)扫描模式。对25种特征性成分进行含量测定。结果建立的HPLC-MS/MS方法在10 min内完成了25种特征性成分的同时定量分析,定量限分别为异鼠李素、乌药碱、去氢荷叶碱0.025 ng/mL、大黄素、丹参酮I 0.050 ng/mL,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷0.200 ng/mL,没食子酸、绿原酸、咖啡酸、表儿茶素、芦丁、金丝桃苷、紫云英苷、白藜芦醇、槲皮素、荷叶碱、丹参酮IIA 0.250 ng/mL,儿茶素、迷迭香酸、隐丹参酮0.500 ng/mL,丹参素、橙皮苷、丹酚酸B 1.000 ng/mL,虎杖苷2.000 ng/mL,柚皮苷5.000 ng/mL;且25种成分在各自质量浓度范围内线性关系良好(r>0.9901),平均加样回收率85.16%~113.46%,RSD为2.01%~8.80%。此外,该方法较为全面地囊括了丹荷颗粒中君臣佐使药材的主要成分,25种成分总量为31.49 mg/g,其中丹酚酸B(9.44 mg/g)及橙皮苷(7.60 mg/g)质量分数最高,异鼠李素(0.79μg/g)质量分数最低。经箱线图(Box-plot)分析,10个不同批次丹荷颗粒制剂中25种成分质量分数波动范围(P值)在75%<P<125%;以及统计方法分析,25种成分质量分数的RSD在2.58%~13.10%;以上结果表明10批丹荷颗粒制剂间成分含量一致性合格。结论所建立的分析方法快速、灵敏度高,结果真实可靠,能够为丹荷颗粒制剂的质量控制和制剂一致性分析提供科学方法及依据。

羟基红花黄色素A对动脉粥样硬化早期脂肪酸的调控研究

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种严重危害人类健康的复杂代谢紊乱综合征,其发生发展与游离脂肪酸(free fatty acid, FFA)代谢轮廓改变直接相关。本文采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫化巨噬细胞作为动脉粥样硬化的早期模型,采用靶向代谢组学方法研究游离脂肪酸的代谢轮廓变化以及羟基红花黄色素A (hydroxysafflor yellow A, HSYA)的调控作用。通过动态多反应监测模式(dynamic MRM)在20 min内实现细胞内27种脂肪酸的定量分析,明确27种脂肪酸的含量分布。结合模式识别筛选出13个巨噬细胞泡沫化生物标志物,其中在巨噬细胞泡沫化过程中饱和脂肪酸总量升高,而十二碳酸、十四碳酸、十八碳烯酸及单不饱和脂肪酸总量降低,羟基红花黄色素A对十二碳酸、十四碳酸和十八碳烯酸异常代谢具有回调作用,网络分析表明与之相关的通路为脂肪酸生物合成通路(de novo fatty acid biosynthesis), oleoyl-(acyl-carrier-protein) hydrolase(OLAH)可能是羟基红花黄色素A调控脂肪酸代谢的潜在靶点。

实施课前导学案,打造高效英语课堂

导学案就是教师根据教材的重点和难点,将预先编写好的学案,在课前发给学生,让学生明确学习目标,带着问题对课文进行预习。同时,教师在学生自学过程中应进行适当辅导,使学生较好地掌握教学内容,培养学生的自学能力。如何在课堂上有效的利用导学案,打造高效英语课堂,打造有效课堂的前提在于教师。学生主动学习是打造有效课堂的关键。

马兜铃酸Ⅰ、Ⅱ的制备工艺研究

目的建立分离纯化马兜铃酸Ⅰ、Ⅱ的方法。方法用95%乙醇加热回流提取关木通药材,得到粗提物,比较碱溶酸沉法和柱色谱法对粗提物中马兜铃酸的富集效果;利用反相制备液相色谱纯化马兜铃酸Ⅰ、Ⅱ。结果碱溶酸沉法的富集效果更优,制备的马兜铃酸Ⅰ、Ⅱ经核磁共振波谱及高分辨质谱确证,纯度分别为96.00%、94.45%。结论碱溶酸沉法结合反相制备液相色谱可快速制备马兜铃酸Ⅰ、Ⅱ。所用方法操作简便,所得产物纯度高,为马兜铃酸样品的制备提供了有效的方法。