基于TCGA数据库探索POLA2基因在肝癌中的表达及其与预后的相关性

目的探索DNA聚合酶α亚基B(POLA2)在肝癌中的表达,分析POLA2表达与肝癌患者临床病理特征和预后的关系。方法利用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库和qRT-PCR技术分析POLA2在肝癌组织及肝癌细胞中的表达水平,利用人类蛋白表达图谱(HPA)数据库评估POLA2蛋白在肝癌组织中的表达水平;应用ROC曲线评估POLA2对肝癌诊断的敏感性,采用Logistic回归分析POLA2表达与肝癌临床病理特征的相关性,通过Kaplan-Meier法、单及多因素Cox回归模型分析POLA2的表达与肝癌患者预后的关系。并进一步寻找TCGA数据库中POLA2共表达基因,进行基因本体(GO)生物功能及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。同时通过肿瘤免疫评估资源(TIMER)数据库分析POLA2与肝癌免疫浸润的相关性。结果POLA2在肝癌组织和肝癌细胞中呈显著高表达(均P<0.05),ROC曲线下面积为0.954。POLA2表达与肝癌TNM分期、组织学分级和临床分期均密切相关(均P<0.01),单及多变量Cox分析表明高表达的POLA2可作为肝细胞癌(HCC)的独立生物学标志物。GO生物功能及KEGG通路富集分析提示,POLA2基因可能参与保持解旋酶活性和DNA依赖的ATP酶活性,主要富集于细胞周期、DNA复制和范可尼贫血通路。TIMER数据库分析显示POLA2与免疫浸润细胞(Th2细胞、B细胞、CD4+T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞)具有显著正相关(均P<0.01)。结论POLA2表达与肝癌患者预后及免疫浸润具有相关性,可作为肝癌诊断及预后评估的重要生物学靶标。

微小RNA-4530通过靶向TRIB1抑制肝癌细胞增殖

目的探讨微小RNA(miRNA)-4530在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖的影响。方法利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-4530在人正常肝细胞(LO2)和肝癌细胞系(SMMC-7721、HepG2、Hep3B和Huh-7)的表达;转染miR-4530的模拟物,构建miR-4530过表达的Hep3B和Huh-7细胞;利用CCK-8实验和平板克隆实验检测miR-4530对细胞增殖的影响;利用生物信息学、荧光素酶报告实验、qRT-PCR和Western blot实验检测miR-4530对G蛋白偶联诱导蛋白2受体(TRIB1)蛋白的影响;在miR-4530过表达的Hep3B和Huh-7细胞中,转染TRIB1质粒,探讨过表达TRIB1对miR-4530介导的增殖抑制的影响。结果相比于正常肝细胞LO2,肝癌SMMC-7721、HepG2、Hep3B和Huh-7细胞中miR-4530的表达均明显减少(均P<0.05),其中Hep3B和Huh-7较为显著;过表达miR-4530,明显抑制肝癌细胞Hep3B和Huh-7的增殖(均P<0.05);TRIB1被鉴定为miR-4530的靶基因,过表达miR-4530明显减少TRIB1的表达(均P<0.01);过表达TRIB1能够显著减少miR-4530介导的肝癌细胞增殖抑制(均P<0.05)。结论miR-4530在肝癌中表达减少,miR-4530靶向抑制TRIB1的表达进而减少肝癌细胞的增殖。