四川省动物疫病净化的探索和实践

近年来,畜牧业发展正从“小规模饲养、粗放型经营”向“规模化养殖、产业化经营”转变。与此同时,动物疫病防控工作也在不断转变,逐步建立疫病净化的防控理念和以监测、隔离、淘汰、提高生物安全水平为主的综合防控措施,这样的防控发展观念和防控意识是动物疫病防控的必经之路和发展之路。

四川省部分地区养犬户狂犬病防控知行情况问卷调查

为了解四川省养犬户狂犬病防控知行情况,在青神县、阆中市、广汉市和涪城区4个县(市、区)进行了问卷调查,共调查养犬户250人。结果显示:狂犬病防控基本知识方面,知道狂犬病发作一定会死亡的占97.6%,知道其他温血动物可携带狂犬病病毒的占92.8%;伤口处理和疫苗注射方面,犬咬伤暴露后注射了狂犬病疫苗的占85.7%,注射了免疫球蛋白的占48.6%,被调查养犬户中知晓伤口不能包扎和缝合的占81.6%;犬只免疫、管理方面,给犬只注射过狂犬病疫苗的占98.8%,所养犬是栓养的占96.0%,68.4%的养犬户其所在村(社)捕杀过流浪犬。结果表明:养犬户对狂犬病基本知识知晓情况较好,但对狂犬病宿主动物了解不全;养犬户防护意识不到位,对正确的防护方法掌握不全面;犬只免疫和管理登记不够规范,存在免疫漏洞。建议各地加强养犬户狂犬病防控宣传教育,加大狂犬病治疗药品的医保报销力度,疫情高发地区要提高犬只免疫覆盖率,规范犬只管理,有效防控人间和畜间狂犬病。

细粒棘球绦虫膜联蛋白B5、B15和B25的原核表达和分泌特性分析

旨在探讨细粒棘球绦虫膜联蛋白B5、B15和B25的反应原性及其在中间宿主组织中的分泌特性,为进一步研究细粒棘球绦虫膜联蛋白与中间宿主的相互作用奠定基础。作者提取细粒棘球蚴原头蚴的总RNA并反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增获得EgANXB5、EgANXB15和EgANXB25基因全长编码序列,使用同源重组法构建pET32a-EgANXB5、pET32a-EgANXB15和pET32a-EgANXB25质粒并进行重组蛋白的原核表达,应用蛋白免疫印迹对上述重组蛋白进行鉴定,并采用免疫荧光染色试验分析EgANXB5、EgANXB15和EgANXB25在中间宿主组织中的分泌特性。结果显示:本研究成功克隆并表达出重组EgANXB5、EgANXB15和EgANXB25,并更正了EgANXB25的CDS序列(GenBank:OR245515.1)。蛋白免疫印迹结果显示,这3种蛋白均能够被感染细粒棘球绦虫的犬阳性血清和感染细粒棘球蚴的小鼠阳性血清所识别。同时,免疫荧光染色结果显示,在细粒棘球蚴包囊附近的肝实质组织中可以检测到EgANXB5、EgANXB15和EgANXB25的阳性信号。EgANXB5、EgANXB15和EgANXB25具有良好的反应原性,同时它们具有分泌进入包囊周围肝实质组织中的潜能,可能进一步参与细粒棘球蚴与宿主的相互作用。

一起猪水肿病的紧急流行病学调查

2023年7月14—24日,四川省金堂县某生猪代养场仔猪出现神经症状且大量死亡。为找出病因并评估传播风险,赴现场开展了紧急流行病学调查。调查发现,该场共有仔猪4484头,发病857头、死亡583头,袭击率为19.11%,病死率为68.03%。结合现场调查及实验室检测结果,判定这是一起由于气温骤降,圈舍保温措施不足,同时在断奶、疫病等应激下,机体抵抗力降低,致病性大肠杆菌大量繁殖引起的猪水肿病疫情。并舍、静默管理措施及场内生物安全管理不严是疫情在场内扩散的原因。追踪调查显示,疫情外泄风险较小。通过抗生素治疗、及时清理病死猪、强化保暖及生物安全等措施,疫情得到有效控制。该起疫情提示,对断奶仔猪应避免气温突降应激,加强圈舍保温管理,提高仔猪抵抗力,以防引发病原感染,同时养殖场人员应加强生物安全学习,提高饲养管理能力,以防此类事件再次发生。

四川省重点养殖区域规模牛场牛结核病流行病学调查

为了解四川省规模牛场牛结核病流行情况,采用牛结核分枝杆菌IFN-γ抗体夹心ELISA检测方法,对30个牛场采集的910份牛全血样品进行了检测,并运用卡方检验对不同品种、不同养殖规模及不同海拔高度样品的检测结果进行了统计分析。结果显示:910份样品的个体表观阳性率为9.34%,个体真实阳性率为6.40%,场群阳性率为46.67%;奶牛场和肉牛场的个体表观阳性率分别为12.00%和8.82%,无统计学差异(P>0.05);小型规模场和大型规模场的个体表观阳性率分别为10.00%和5.00%,无统计学差异(P>0.05);低海拔牛场和高海拔牛场的个体表观阳性率分别为10.53%和3.33%,差异显著(P<0.05)。结果说明:四川省规模牛场牛结核病流行水平较高,尤其是低海拔牛场流行严重,而品种和养殖规模对牛结核病流行无显著影响。建议持续进行牛结核病风险监测,重点加强低海拔地区牛场的饲养管理,同时提高养殖场户的主体防疫意识,从源头阻断牛结核病传播。

牛羊布鲁氏菌病的诊断及综合防控措施探究

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患传染病,该病会引起家畜繁殖障碍、关节炎等症状。布鲁氏菌病传播速度快,范围广,会影响牛羊的健康生长,进而对我国养殖经济造成一定危害。文章从布鲁氏菌病的病原特点、诊断技术和防治对策等方面进行概述,以期为探究有效的防控布鲁氏菌病的方法以及牛羊健康养殖提供参考。

2023年四川地区猪瘟免疫抗体的检测与分析

为了解2023年1—12月四川不同区域和不同养殖规模猪群的猪瘟免疫效果,对19945份血清样品采用酶联免疫吸附试验进行猪瘟抗体检测。结果显示:2023年度四川地区猪群的猪瘟抗体阳性率为93.54%;种猪场猪群的猪瘟抗体阳性率为99.01%;育肥场和散养户猪群的猪瘟抗体阳性率分别为92.94%和93.76%,高于屠宰环节和调运环节猪群(86.04%和72.72%);分区调查结果显示猪瘟抗体平均阳性率都达到90%以上,其中成都平原经济区最低为80.95%,川南经济区最低为81.52%,川东北经济区最低为81.27%,攀西经济区低值为57.14%和62.5%。综合来看,2023年度四川地区猪瘟免疫效果整体良好,但自繁自养场户、调运环节和屠宰环节的免疫工作还需加强,以确保基础免疫的稳定。

4种狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的评价

为评价国产狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的性能,选择4种国产品牌ELISA抗体检测试剂盒,分别检测463份已用荧光抗体病毒中和试验(FAVN)测知狂犬病病毒抗体效价的犬血清,用Kappa检验和配对卡方检验评价ELISA试剂盒与FAVN检测结果的一致性和差异性,计算ELISA试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性、符合率和重复性等,并比较4种试剂盒的使用范围、样品稀释倍数等参数。结果显示:经Kappa检验,4种试剂盒与FAVN一致性均为弱;经配对卡方检验,A、B试剂盒与FAVN检测结果的差异不显著(P>0.05),而C、D试剂盒差异显著(P<0.05)。诊断敏感性,D试剂盒最高,B试剂盒最低;4种试剂盒诊断特异性均较低,为29.5%~57.7%;各试剂盒符合率相当,为71.3%~72.8%。综合敏感性、特异性、重复性等考量因素,得出C试剂盒更能满足免疫后抗体检测需求,A试剂盒也较好,两者可作为候选试剂盒。结果表明,4种国产狂犬病病毒ELISA试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性、批间稳定性等性能需进一步提高,以满足基层免疫抗体监测需求。

细粒棘球绦虫泛素结合酶基因家族的生物信息学及表达分析

本研究对细粒棘球绦虫泛素结合酶(EgE2s)基因家族进行鉴定、生物信息学分析以及检测其在不同发育阶段的转录水平,为其功能研究和构建优势抗原表位疫苗奠定基础。本研究基于数据库中细粒棘球绦虫基因组学信息,对EgE2s基因家族进行T-A克隆、生物信息学分析以及采用qRT-PCR法检测了这些基因在原头蚴(Protoscolex, PSCs)和28日龄童虫中的转录水平。结果成功克隆并测序19个EgE2s基因,更正了两个原序列有误的EgE2s,分别为EgE2L3(登录号:MZ277618);EgE2J1(登录号:MZ277619)。三级结构和保守基序预测结果表明EgE2s高度保守。qRT-PCR结果显示,EgE2s的转录水平在PSCs和28日龄童虫中存在差异,其中EgE2A(P<0.001)、EgE2J1(P<0.01)在PSCs阶段高表达。B细胞抗原表位预测表明EgE2N的139-157区域位于EgE2s保守基序外。同时,T细胞抗原表位预测表明EgE2N与人和犬MHCⅠ类分子各有两个强结合位点,且有一个共同的抗原表位位点104-113。综上,EgE2A和EgE2J1可能在PSCs的生长发育中起重要作用。EgE2N的139-157和104-113区域可能是药物研究和疫苗开发的靶序列。

2019-2022年四川省犬细粒棘球绦虫感染流行病学调查

为了解四川省犬细粒棘球绦虫感染情况,评估防控措施的有效性,2019-2022年对四川省35个棘球蚴病流行县,采集犬粪便通过抗原夹心ELISA检测方法开展犬只棘球绦虫感染情况监测。结果显示:2019-2022年,全省35个棘球蚴病流行县的犬细粒棘球绦虫年均感染率分别为3.06%(159/5 200)、2.11%(123/5 826)、1.33%(83/6 227)、1.12%(67/5 968),不同年份间的犬感染率差异有统计学意义(P<0.05);甘孜州、阿坝州、凉山州、雅安市的年均犬感染率分别为1.30%(166/12 673)、3.09%(205/6 627)、1.48%(35/2 367)、1.78%(26/1 464),阿坝州感染率明显较高(P<0.05)。结果表明:四川省犬细粒棘球绦虫感染总体呈下降趋势,但在川西高原草原牧区依然较严重,对当地家畜及人类构成了较大威胁,需要继续加强犬棘球绦虫感染的控制,通过犬只驱虫、犬粪便无害化处理,从源头做好棘球蚴病防控工作,保障该地区家畜养殖业的健康发展和人类健康安全。

四川畜间布鲁氏菌病流行形势与防治策略

布病是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患的慢性传染病。为保护人民群众身体健康,保障畜牧业生产健康发展,进一步加大动物布病防治工作力度,提高防治能力和科学防治水平,本文对当前四川省布病流行情况、存在问题等进行全面、系统分析,提出科学的防治对策。

2022年四川省市级兽医系统实验室布病检测能力比对分析

为评估四川省内兽医系统实验室对布鲁氏菌病的检测能力,我们于2022年开展了全省市级兽医实验室比对工作,共20个市级兽医系统实验室参与比对。布鲁氏菌病抗体检测项目通过虎红平板凝集试验比对,11个市(州)使用A厂家试剂,9个市(州)使用B厂家试剂。结果得出:布鲁氏菌病抗体检测项目结果总体符合率为68.75%,A厂家符合率为81.82%,B厂家符合率为52.78%。本研究表明,四川省市级兽医系统实验室对动物布鲁氏菌病的检测能力有待提高,实验试剂对实验结果的影响很大。

四川地区猪圆环病毒病流行诊断与防控建议

为了解四川省猪圆环病毒的流行情况,笔者在中国知网数据库检索了2004年以来本省猪圆环病监测相关文献,并结合眉山市动物疫控中心兽医实验室2020-2022年检测数据进行了汇总分析。结果显示,四川地区PCV2平均病原学阳性率62.39%,PCV3平均病原学阳性率8.91%;眉山市2020-2022年PCV2平均阳性率39.42%,2022年PCV3平均阳性率2.17%,表明四川省猪圆环病毒感染情况较严重,各级兽医主管部门和技术人员应积极主动向养殖场(户)科普防控知识,有针对性地调整疫病防控措施,减少传播风险,降低经济损失。

牛结核病诊断方法的研究进展

牛结核病是牛分枝杆菌等引起的一类慢性消耗性疾病,该病对畜牧业造成严重经济损失,也是公共卫生安全的难题。随着生命科学相关领域的快速发展,实验室诊断技术不断改良,牛结核病诊断方法和技术也有所发展。文章主要针对实验室诊断中的PCR、PPD皮内变态反应、IFN-γ检测法、ELISA等生物学方法进行探讨,对其优缺点作了概述,以期为牛结核病的诊治与防控提供依据,对牛结核病的防疫提供技术支撑。

四川某猪场猪链球菌2型菌株的分离鉴定与耐药性分析

本研究采集某发病猪场的环境及病猪样品,通过细菌分离纯化、PCR鉴定为猪链球菌2型致病菌株,随后用纸片扩散法测定该菌株的耐药性,结果显示对青霉素类、头孢类(头孢噻呋)、喹诺酮类、糖肽类、氨基糖苷类、多肽类最为敏感,对头孢类(头孢西丁)、氯霉素类较为敏感,对磺胺类、碳青霉烯类(亚胺培南)、四环素类、大环内酯类耐药。选取敏感的10种药物进行最小抑菌浓度(MIC)值测定,结果显示:阿莫西林的MIC为8μg/mL,苯唑西林、头孢噻呋、氧氟沙星、万古霉素和庆大霉素的MIC为4μg/mL,恩诺沙星和恩拉霉素的MIC为1μg/mL。

羊棘球蚴病基因工程亚单位疫苗EG95免疫绵羊的抗体检测

棘球蚴病（Echinococcosis）又称包虫病（Hyda-tidosis）,是由带科（Taeniidae）棘球属（Echinococcus）的棘球绦虫（Echinococcus granulosus）的中绦期幼虫寄生于动物和人的肝、肺及其他器官内所引起的一种人兽共患病,农业部将其列为二类动物疫病,卫生部将其列入丙类传染病[1]。我省是全国包虫病重点省份之一,主要分布于甘孜州、阿坝州的31个疫区县,严重危害人民身体健康和生命安全,影响养殖业发展和畜产品安全,对社会经济发展造成严重威胁[2]。

四川某猪场猪2型链球菌病的监测及综合防控

猪链球菌病主要是由猪链球菌感染引起的一种常见的猪传染病,不仅给养猪业造成严重经济损失,也给公共卫生和食品安全带来威胁,危害人们健康。对四川某猪场猪群猪链球菌感染情况进行监测,抽取环境样品10份、猪唾液拭子20份进行PCR检测、细菌分离鉴定、染色镜检、药敏实验等,检出猪链球菌2型菌株核酸阳性14份,含环境拭子5份,猪唾液拭子9份。根据药敏实验结果用青霉素对猪群进行治疗,有效控制了猪群进一步感染的趋势。

伪狂犬病病毒Fa株gE基因在大肠杆菌中的表达及gE-ELISA鉴别诊断方法的建立

试验以pPGE DNA为模板,用1对分别含有EcoRⅠ和Bam HⅠ酶切位点的伪狂犬病病毒gE基因特异性引物,扩增出约1.7kb的含完整gE基因的DNA片段;目的片段经EcoRⅠ和Bam HⅠ双酶切后,插入原核表达载体pBV220得到重组表达质粒pBVgE,并转化大肠杆菌DH5α;对温敏诱导表达所获产物进行SDS-PAGE、Western-Blot和琼脂双扩散检测。结果表明,gE糖蛋白得到了高效表达,表达产物约占总蛋白的17%。为了鉴别伪狂犬病疫苗免疫猪和自然感染猪,用表达纯化的gE蛋白为抗原,建立了GE-ELISA方法。选定的反应条件包括GE抗原包被浓度为6.6mg/L,血清最适稀释度为1∶40。测试结果:与PRV、HCV、PRRSV、JEV、SA215阳性血清呈阴性反应,而与PRV标准阳性血清呈阳性反应。这一结果表明该法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于猪伪狂犬病的临床诊断,尤其疫苗免疫猪和自然感染猪的鉴别。

伪狂犬病病毒主要毒力基因缺失后的免疫原性研究

本试验研究伪狂犬病病毒(PRV)基因缺失疫苗株D1、D2和D3的免疫原性.对4周龄仔猪按不同剂量分别肌注接种D1、D2、D3后,于7、14d后采血;14d后用107PFU强毒株PRV Fa滴鼻攻毒所有试验猪,攻毒7d后检查PRV在猪体内器官的分布.基因缺失毒株接种后试验组仔猪体温略有升高,接种部位未发生炎性反应,不向外散毒.PRV Fa攻毒后试验组的仔猪体温稍有升高但不超过40℃,对照接毒组连续4d均超过40℃、有1头出现明显神经症状并死亡.强毒攻毒后,各剂量免疫组散毒均为2～3d,而对照组、同居猪散毒均为5d.对照组10个器官组织(大脑、小脑、三叉神经、心、肺、肝、肾、淋巴结、脾和扁桃体)均检测出PRV;D1组除大脑、小脑、肺脏外均检测出PRV;D2、D3组除大脑、小脑外,其它均检出PRV.免疫组的保护率均为100%,对照组为75%.试验结果表明D1、D2和D3能对接种猪提供充分的保护;攻毒后疫苗接种猪都向外排毒,但散毒天数均远低于对照组且未从同居感染猪中分离出病毒;D1、D2和D3是具有高度免疫原性且接种安全的基因缺失疫苗株.

2016—2017年四川省奶牛主要养殖地区奶牛结核病的流行病学调查

为了掌握四川省奶牛主要养殖地区结核病的流行情况,试验采用问卷调查、现场调查等方法对81个不同规模奶牛场进行19项内容调查,针对各类型场群结核病流行的主要相关影响因素进行分析,并应用结核菌素的纯蛋白衍生物(PPD)法、结核病γ-干扰素体外释放ELISA法对部分牛场奶牛进行结核病抗原的检测。结果表明:19项内容分别按不同规模程度进行了调查,每项内容累计调查81次(81个场点),共1 539次,其中符合调查项目的占67.64%(1 041/1 539)。规模场中每项内容15次,累计285次,其中符合调查项目的占91.23%(260/285);适度规模场及散养户累计1 254次,符合调查项目的占62.28%(781/1 254)。建立并执行检疫制度的场户占67.90%(55/81),开展结核病检测的场户占67.90%(55/81),结核病阳性场占4.94%(4/81);规模场结核病个体阳性率为0.08%(12/14 489),适度规模场及散养户结核病个体阳性率为0.14%(2/1 423)。对59个养殖场的15 453头奶牛进行检测,结核病阳性奶牛6头,其中一至四季度个体阳性率分别为0(0/607)、0.05%(1/2 085)、0.05%(2/4 104)、0.03%(3/8 657),群体阳性率分别为0(0/2)、5.00%(1/20)、8.70%(2/23)、9.68%(3/31)。不同规模化程度的场(户)在综合管理方面存在差异,规模场较适度规模及以下场(户)在圈舍选址、建设布局、隔离、消毒灭源、挤奶方式、场内兽医人员配置等方面更加科学,各项制度落实更加规范。部分养殖场(户)结核病流行的主要原因为工作人员进入场区不洗澡及不更换衣服、进入生产区不换胶靴,场内仅采用喷雾方式消毒,共用挤奶器,引进奶牛未进行结核病检测、隔离期未达到要求,场内专业技术人员学历低、年龄较大,人员对结核病认识不足等。