CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与神经系统自身免疫性疾病研究进展

调节性T细胞是一群具有免疫抑制功能的T淋巴细胞,是维持机体免疫耐受的关键细胞,在免疫系统中扮演着不可或缺的角色。近年来,调节性T细胞数量或功能的改变与免疫性疾病的相关性成为研究热点。现对CD4^+CD25^+调节性T细胞与神经系统自身免疫性疾病的研究进展进行综述,进而了解调节性T细胞参与自身免疫性疾病发病的机制,为自身免疫性疾病的治疗探寻新的途径。

重症肌无力患者调节性T细胞线粒体自噬状态与其代谢的相关性研究

目的探讨外周血调节性T细胞(regulatory T cell,Tregs)线粒体自噬异常参与重症肌无力(myasthenia gravis,MG)发病的细胞代谢机制。方法选择2016年10月至2018年4月作者医院收治的MG患者15例,另选择同期体检的15名健康成年人作为对照组。采用Ficoll密度梯度离心法分离出人外周血单个核细胞(PBMC),选用基于分离柱的人CD4+CD25+Tregs分选试剂盒分离得到Tregs,以健康人群的Tregs作为对照组(health control,HCs),将MG患者的Tregs分为MG组、MG经羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)诱导组(MGCCCP)、MG经环孢素(CsA)诱导组(MG-CsA)。采用流式细胞仪检测各组Tregs线粒体质量、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、细胞凋亡水平,采用酶标仪检测各组Tregs乳酸水平。结果与对照组比较,MG组线粒体受损比例、细胞凋亡比例、平均ROS水平、乳酸水平升高(P<0.05),ROS正常细胞比例降低(P<0.05);与MG组比较,MG-CCCP组线粒体受损比例、细胞凋亡比例、乳酸水平降低(P<0.05),平均ROS水平、ROS正常细胞比例升高(P<0.05);与MG组比较,MG-CsA组线粒体受损比例、细胞凋亡比例、乳酸水平、平均ROS水平升高(P<0.05),而ROS正常细胞比例降低(P<0.05)。结论 MG患者Tregs线粒体质量下降,导致其ROS释放增加,ROS正常细胞比例减少,糖酵解生成的乳酸增多,细胞凋亡增加,CCCP通过促进MG患者Tregs线粒体自噬,可清除部分受损线粒体,缓解代谢压力,减少细胞凋亡,而CsA可通过抑制MG患者Tregs线粒体自噬,加剧代谢紊乱,使细胞凋亡增加。

喹吡罗降低C57BL/6J小鼠的预先弱刺激抑制和间隙预刺激抑制

目的探讨C57BL/6J小鼠在急性给予喹吡罗(quinpirole,QNP)前后听觉惊跳反射(acoustic startle reflex,ASR)、预先弱刺激抑制(prepulse inhibition,PPI)和空白预先刺激抑制(gap prepulse inhibition,Gap-PPI)的变化情况。方法 20只C57BL小鼠,随机分为实验组(n=10)和阴性对照组(n=10)。实验组给予盐酸QNP腹腔注射,阴性对照组给予等体积生理盐水处理。实验对象均完成惊跳反射的测试。记录注射前的数据为基础值,注射后10min、24h进行相同测试。比较各组惊跳反射强度、预先弱刺激抑制率(%PPI)和空白预先刺激的抑制率(%Gap-PPI)。结果对照组小鼠注射生理盐水前后的惊跳反射强度、%PPI和%Gap-PPI未见明显改变(P>0.05)。实验组小鼠注射盐酸QNP 10min后的惊跳反射强度[(0.030 7±0.002 6)N、%PPI(14.78±6.14)%、%Gap-PPI(17.78±9.74)%]较基础值[(0.097 1±0.004 3)N、(45.24±10.11)%、(41.49±4.33)%]降低(P<0.05);实验组小鼠在注射QNP 24h后的惊跳反射强度、%PPI和%Gap-PPI与基础值相比无明显变化(P>0.05)。实验组注射QNP 10min后最大惊跳反射强度、%PPI和%Gap-PPI均较对照组明显降低(P<0.05)。结论 C57BL/6J小鼠急性注射QNP,抑制了预先弱刺激抑制及空白弱刺激抑制,可造成感觉运动门控功能的短期受损并导致小鼠产生耳鸣,可能机制是急性损伤了C57BL/6J小鼠的边缘系统。

论知识产权惩罚性赔偿制度的缺陷与完善

2013年《商标法》修订后,我国知识产权领域正式引入惩罚性赔偿制度。一方面,惩罚性赔偿制度使得侵权成本增加,可以从根本上解决知识产权侵权案件中长期存在的侵权成本低、维权成本高的问题,其引入有充分的理论基础和实践基础;另一方面,立法中关于惩罚性赔偿的规定还不够完善:对惩罚性赔偿适用的侵权行为人主观条件模糊、规制对象不够全面、数额计算标准缺乏合理性,立法应当统一并细化惩罚性赔偿的主观要件,增加其规制对象,并对数额计算标准进行修改。

自动驾驶汽车侵权责任探究

随着自动驾驶技术的发展,自动驾驶汽车已经逐渐进入人们的日常生活。相较于传统汽车,自动驾驶汽车有其优越性,但也给现行法律带来了挑战。根据责任主体不同,现有关于自动驾驶汽车侵权责任的学说可分为汽车使用人责任说、汽车生产者责任说、社会主体责任说三类,但无论哪类都不足以单独形成一个完善的自动驾驶汽车侵权责任体系。我国立法应当取各学说之精华,对自动驾驶汽车侵权责任区分适用产品责任和交通事故责任的规则,并引入强制责任保险制度,如此才能构建完善可行的自动驾驶汽车侵权责任体系。

MACS法和EasySep法分选人外周血调节性T细胞的效果比较

目的:比较MACS法与EasySep法两种分选人外周血调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)效果的差异,探索一种更高效分选Tregs的方法。方法:采集健康成年人的外周血,用Ficoll密度梯度离心法分离出人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC),将PBMC均分为两组:MACS法分选组和EasySep法分选组,分别选用基于分离柱的人CD4^+CD25^+调节性T细胞MACSTM分选试剂盒和EasySepTM人CD4^+CD25high T细胞分选试剂盒两种分选方法分离得到Tregs,并对其数量、存活率、细胞形态和纯度等进行比较。结果:MACS法分选组的Tregs细胞数为:(2.19±0.21)×10^6个,EasySep法分选组的细胞数为:(1.73±0.12)×10^6个,明显低于MACS法分选组(t=4.551,P<0.05);MACS法分选组细胞存活率为:(94.37±4.15)%,EasySep法分选组细胞存活率为(91.98±1.23)%,明显低于MACS法分选组(t=3.073,P<0.05);MACS法分选组细胞培养后部分细胞形态不规则,为杆状或椭圆状,而EasySep法分选组细胞形态保持完好,无变形;MACS法分选组的CD4^+CD25^+Treg比例为:(96.52±1.42)%,EasySep法分选组为:(85.67±10.58)%,明显低于MACS法分选组(t=2.489,P<0.05);MACS法分选组CD4^+CD25^+CD127low/-Tregs的比例为:(67.85±1.11)%,EasySep法分选组为:(63.08±1.11)%,明显低于MACS法分选组(t=7.448,P<0.05)。结论:两种方法各有优势,但基于分离柱的MACS法得到的Tregs数量多,纯度高,且具有功能性的Tregs比例高,是一种更为高效的分选人外周血调节性T细胞的方法。

吉兰-巴雷综合征发病机制的研究进展

吉兰-巴雷综合征是一种自身免疫性多发性神经根神经病,是目前世界范围内引起急性迟缓性瘫痪的常见疾病,其确切的病因未明,本病具有自限性,但部分患者会遗留较严重的后遗症。本研究对吉兰-巴雷综合征的病因及发病机制进行综述,以期为临床治疗提供依据。

CCCP对人外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞线粒体自噬的影响探讨

目的:探讨不同浓度羰基氰化物间氯苯腙(carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone,CCCP)对人外周血调节性T细胞(regulatory T cell,Tregs)线粒体自噬的影响及作用机制。方法:采集健康成年人的外周血,用Ficoll密度梯度离心法分离出人外周血单个核细胞,选用基于分离柱的人CD4+CD25+调节性T细胞分选试剂盒分离得到Tregs,对Tregs鉴定后分组,分别用浓度为2.5μmol/L(C组)、5.0μmol/L(D组)、10.0μmol/L(E组)、20.0μmol/L(F组)、40.0μmol/L(G组)的CCCP作用24 h,流式细胞仪检测各组Tregs的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体膜电位,荧光显微镜观察各组Tregs线粒体和溶酶体的共定位情况,流式细胞仪检测各组Tregs的线粒体质量。结果:磁珠分选得到的CD4+CD25+Treg细胞经抗体标记后鉴定,纯度在(93. 36±1. 87)%之间;随着CCCP作用浓度逐渐变大,ROS的水平逐渐升高,线粒体膜电位逐渐降低(P<0.05);从线粒体和溶酶体融合情况看:当CCCP的作用浓度在5～10μmol/L时,橙色(黄色)荧光水平最强,随着CCCP浓度继续升高,橙色(黄色)荧光水平下降(P<0.05);线粒体质量随着CCCP作用浓度的增加而下降,组间比较发现,C、D、E组之间无明显差异,与E组相比,F和G组线粒体质量明显下降,P<0.05。结论:随着CCCP作用浓度(0～10μmol/L)的逐渐变大,Treg细胞内的ROS水平升高,线粒体膜电位降低,促进线粒体自噬,线粒体质量保持动态平衡;当ROS堆积,线粒体膜电位明显下降时,线粒体自噬被抑制,线粒体质量受损。