DP_2干预对铝负荷原代培养大鼠海马神经元的作用观察

目的建立麦芽酚铝致原代培养大鼠海马神经元损伤模型,探讨DP2干预对铝负荷原代海马神经元的作用。方法选取孕期18 d左右的SD大鼠,离体培养胎鼠海马神经元,d 7进行NSE免疫组化鉴定,并给予Al(malt)3建立铝负荷致原代培养大鼠海马神经元损伤模型,同时分别给予DP2激动剂DK-PGD2和DP2拮抗剂CAY10471进行干预。继续培养24 h后,检测各组海马神经元MTT值、LDH漏出率和Ca2+荧光强度,HE染色观察神经元病理形态变化。结果海马神经元纯度超过95%。与空白对照组比较,铝负荷模型组MTT值明显降低(P<0.01);LDH漏出率明显升高(P<0.01);Ca2+荧光强度明显增强(P<0.01);神经元细胞数目明显减少,突起萎缩甚至消失,部分细胞核固缩。与铝负荷模型组比较,DP2激动剂DK-PGD2干预组MTT值明显降低(P<0.01、P<0.05);LDH漏出率明显升高(P<0.01);Ca2+荧光强度有增强趋势,但差异无显著性;海马神经细胞几乎全部核固缩、裂解。DP2拮抗剂CAY10471干预组MTT值明显升高(P<0.01);LDH漏出率明显降低(P<0.01);Ca2+荧光强度明显减弱(P<0.01)。海马神经细胞胞体、胞核明显,裂解细胞明显减少。结论 DP2激活表达可增加神经元对铝盐损伤的易感性。

贝前列素钠对慢性铝过负荷大鼠皮层损伤的作用及机制

目的探讨贝前列素钠对慢性铝过负荷大鼠皮层损伤的作用及对PGIS-IP信号通路的影响。方法将75只SD大鼠随机分为5组,即正常对照组、慢性铝过负荷模型组、贝前列素钠低(6μg·kg-1)、中(12μg·kg-1)、高(24μg·kg-1)剂量组。采用葡萄糖酸铝(Al3+200 mg·kg-1·d-1)灌胃大鼠,每周5 d,连续20周,建立慢性铝过负荷损伤模型。贝前列素钠(6、12、24μg·kg-1)组,在每次给予葡萄糖酸铝2 h后,灌胃给予贝前列素钠。20周后,Morris水迷宫测定大鼠空间学习记忆能力;HE染色观察大鼠皮层神经元形态结构变化;生化酶学法测定大鼠皮层SOD活性和MDA含量变化;ELISA法检测大鼠皮层6-k-PGF1α含量;qRT-PCR检测大鼠皮层PGIS、IP mRNA表达情况;Western blot检测大鼠皮层IP蛋白表达情况。结果铝过负荷模型组与正常对照组相比,大鼠的寻台潜伏期延长(P<0.01);皮层神经元出现明显的核固缩;SOD活性降低(P<0.01),MDA含量增加(P<0.05);6-k-PGF1α含量升高(P<0.01);皮层PGIS、IP mRNA表达增高(P<0.01);皮层IP蛋白表达增高(P<0.05)。贝前列素钠组与铝过负荷模型组相比,大鼠的寻台潜伏期明显缩短(P<0.01);皮层神经元损伤明显减轻;SOD活性升高(P<0.01),MDA含量降低(P<0.01);6-k-PGF1α含量下降(P<0.05);皮层PGIS、IP mRNA表达明显降低(P<0.05、P<0.01);皮层IP蛋白表达也明显降低(P<0.05)。结论贝前列素钠对慢性铝过负荷大鼠皮层神经元有明显保护作用,其机制可能涉及PGIS-IP信号通路。

全脑缺血/再灌注大鼠皮层PGI_2和TXA_2时程变化特征

目的观察PGI2、TXA2含量及PGI2/TXA2比值在全脑缺血/再灌注大鼠皮层中的时程变化特征。方法采用夹闭双侧颈总动脉,右侧颈总静脉抽血再回输建立大鼠全脑缺血/再灌注模型。多普勒激光脑血流仪监测大鼠在缺血/再灌注手术过程中的脑血流变化。Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力。HE染色观察大鼠皮层神经元形态结构变化。ELISA测定大鼠皮层中PGI2、TXA2含量。结果大鼠在全脑缺血过程中脑血流降低74.45%。与假手术组比较,全脑缺血/再灌注组大鼠寻台潜伏期明显增加,皮层神经元出现明显核固缩,细胞层次紊乱,神经细胞数目明显减少,并随再灌注时间延长而损伤加重。PGI2、TXA2、PGI2/TXA2比值在再灌注2 h内明显低于假手术组,再灌注6 h时明显升高,PGI2、TXA2峰值在48 h,PGI2/TXA2比值峰值在7 d。结论全脑缺血/再灌注损伤诱导大鼠皮层PGI2和PGI2/TXA2比值明显增加,并具有时间依赖性特征。

贝前列素钠对全脑缺血／再灌注大鼠脑损伤的作用及机制

目的探讨贝前列素钠对全脑缺血/再灌注大鼠脑损伤的保护作用及对PGIS-PGI2-IP信号通路的影响。方法采用夹闭双侧颈总动脉合并低血压的方法建立大鼠全脑缺血/再灌注脑损伤模型,贝前列素钠(50、100μg·kg-1)术前30 min灌胃给药,水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,黄嘌呤氧化酶法、TBA法分别测定大鼠海马中SOD活性、MDA含量变化,ELISA测定大鼠海马PGI2含量,RT-PCR检测大鼠海马COX-2、PGIS与IP mRNA表达情况。结果与假手术组相比,全脑缺血/再灌注大鼠寻台潜伏期,寻台路径明显增加;SOD活性明显降低,MDA含量明显增加;PGI2含量明显增加,COX-2、PGIS、IP mRNA表达明显增加。与模型组相比较,贝前列素钠能明显改善大鼠空间学习记忆能力;升高海马SOD活性,降低MDA含量;明显降低海马PGI2含量,抑制海马COX-2、PGIS及IP mRNA的表达。结论贝前列素钠对全脑缺血/再灌注大鼠脑损伤具有明显的保护作用,其机制可能涉及调控PGIS-PGI2-IP信号通路平衡。

异甘草酸镁对小鼠放射性肺纤维化的改善作用及其机制的初步研究

目的探讨异甘草酸镁(magnesium isoglycyrrhizinate,MgIG)对小鼠放射性肺纤维化的影响及其机制。方法 50只♀C57BL/6小鼠随机分为对照组(Control组)、辐照组(RT组)、异甘草酸镁组(MgIG组)、异甘草酸镁治疗组(RT+MgIG组)和地塞米松治疗组(RT+DXM组),每组10只。除Control组和MgIG组外,其余各组小鼠均给予15Gy^(60)Coγ射线全胸单次照射。各组小鼠于辐照前2 h及辐照后每日给药:MgIG组和RT+MgIG组腹腔注射MgIG(100 mg·kg^(-1));Control组和RT组腹腔注射生理盐水(20 m L·kg^(-1));RT+DXM组腹腔注射DXM(0.5 mg·kg^(-1))。辐照后12周取材,行HE染色及Masson染色观察小鼠肺泡炎和肺纤维程度,免疫组化检测肺组织Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)和转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达。结果 RT组小鼠肺泡炎和肺纤维化程度及CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达较Control组明显增强(P<0.05),而RT+MgIG组与RT+DXM组肺泡炎、肺纤维化程度及蛋白表达相较于RT组明显降低(P<0.05)。结论异甘草酸镁可有效改善小鼠放射性肺纤维化,其机制可能与调控TGF-β信号通路有关。

米索前列醇对APP/PS1转基因小鼠的神经保护作用

目的观察米索前列醇对APP/PS1转基因小鼠海马和皮层损伤的保护作用并探讨其机制。方法实验动物设4组:转基因模型组和药物处理组APP/PS1转基因小鼠各10只,老年对照组为野生型C57小鼠10只,药物处理组给予米索前列醇,另两组给予羧甲基纤维素钠,均在小鼠24周龄时以200μg·kg-1的量开始灌胃给予,连续给药20周,每周连续5 d,每天1次;在指标测试阶段,另取10只8周龄野生型C57小鼠作为青年对照组。采用Morris水迷宫测试空间学习记忆能力,HE染色观察海马和皮层神经元形态变化,生化法检测海马和皮层SOD活性、MDA含量变化,免疫组织化学法检测海马和皮层Aβ表达情况。结果与老年对照组小鼠相比,转基因模型组小鼠寻台潜伏期明显延长,海马和皮层神经元出现明显核固缩,SOD活性明显下降,MDA含量明显增加,Aβ表达明显增多;给予米索前列醇后,APP/PS1转基因小鼠寻台潜伏期明显缩短,海马和皮层神经元核固缩明显减轻,SOD活性明显升高,MDA含量明显降低,Aβ表达明显减少。结论米索前列醇对APP/PS1转基因小鼠海马和皮层的神经损伤有显著保护作用,其机制可能与米索前列醇减轻APP/PS1转基因小鼠脑组织氧化应激有关。

激光多普勒血流仪优化大鼠全脑缺血再灌注模型

目的使用激光多普勒血流仪(LDF)优化大鼠全脑缺血再灌注模型。方法采用夹闭双侧颈总动脉合并低血压的方法建立大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。激光多普勒血流仪监测大鼠手术过程中的脑血流变化。水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力。HE染色观察大鼠脑组织病理学改变。黄嘌呤氧化酶法,TBA法分别测定大鼠皮层海马中SOD活性改变,MDA含量变化。结果 LDF监测组大鼠全部存活,而无LDF监测组大鼠术后有3只死亡。手术组大鼠在缺血过程中脑血流降低70%,夹闭完成后,血流恢复至缺血前的80%。与假手术组大鼠比较,缺血再灌注大鼠寻台潜伏期、寻台路径显著增加,大脑皮层海马神经元出现严重核固缩、细胞丢失、神经元数目减少,细胞层次紊乱,SOD活性降低,MDA含量显著增加。结论 LDF监测能降低全脑缺血再灌注大鼠死亡率,提高造模成功率;此模型可用于脑缺血再灌注损伤的基础实验研究。

异甘草酸镁对小鼠放射性肺纤维化的改善作用及其机制的初步探讨

目的探讨异甘草酸镁(Mg IG)对放射性肺纤维化的作用及其抗纤维化的机制。方法将SPF级雌性C57小鼠随机分为正常对照组、辐照模型组、异甘草酸镁对照组、异甘草酸镁治疗组和地塞米松治疗组,每组10只。除正常对照组和异甘草酸镁对照组,其余各组小鼠均给予单次15 Gy60Coγ射线全肺照射,照射后12周处死小鼠取左肺下叶组织,免疫组化法观察肺组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白及转化生长因子-β(1TGF-β1)信号通路蛋白表达变化。结果各组小鼠肺组织均有Ⅰ型、Ⅲ型胶原及TGF-β1,Psmad2,Psmad3不同程度的表达,模型组明显高于正常对照组,异甘草酸镁治疗组与地塞米松治疗组相较于模型组各蛋白表达均有下降。结论异甘草酸镁可通过抑制小鼠肺组织TGF-β1信号通路改善放射性肺纤维。

COX-2在全脑缺血再灌注大鼠皮层时程表达变化

目的观察COX-2 mRNA与蛋白在全脑缺血再灌注大鼠皮层的时程表达变化特征。方法采用夹闭双侧颈总动脉合并低血压的方法建立大鼠全脑缺血再灌注脑损伤模型;水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力;HE染色观察大鼠皮层神经元形态结构改变;黄嘌呤氧化酶法、TBA法分别测定大鼠皮层中SOD活性和MDA含量变化;RT-PCR及Western blot分别检测大鼠皮层COX-2 mRNA与蛋白表达情况。结果与假手术组比较,缺血再灌注组大鼠寻台潜伏期显著增加,寻台次数显著减少(P<0.05),通过目标象限百分比明显减少(P<0.01);皮层神经元出现严重核固缩,细胞层次紊乱;SOD活性随再灌注时间延长而降低,在7 d时达最低(P<0.01),MDA含量随再灌注时间延长而增加,在7 d时达峰值(P<0.01);COX-2 mRNA及蛋白表达明显增加,mRNA再灌注后48 h达峰值(P<0.05),蛋白再灌注后7 d达峰值(P<0.01),15 d时均仍高于假手术组(P<0.05)。结论全脑缺血再灌注诱导大鼠皮层COX-2表达明显增加,并具有时间依赖性。

铝负荷致慢性脑损伤大鼠皮层前列腺素合酶-前列腺素-前列腺素受体信号通路变化特征

目的观察铝负荷致慢性脑损伤大鼠皮层前列腺素(PGs)合酶-PGs-PGs受体信号通路的变化特征。方法 SD雄性大鼠经灌胃给予葡萄糖酸铝溶液(Al3+200 mg/kg),1次/d,每周持续灌胃5 d,共20 w,建立慢性铝负荷致大鼠脑损伤模型。采用Morris水迷宫、组织病理学、生化酶学指标观察慢性铝负荷大鼠皮层神经元损伤,采用ELISA方法检测皮层组织PGs(PGD2、PGE2、PGF2α、6-keto-PGF1α、TXB2)含量变化,RT-PCR方法测定大鼠皮层PGs合酶(c PGES、m PGES-1、H-PGDS、PGIS、TXAS)和PGs受体(EP1、EP2、EP3、EP4、DP1、FP、TP、IP)mRNA表达,Western印迹方法检测皮层PGs受体(EP2、EP3、DP1、FP、TP、IP)蛋白含量。结果与对照组相比,慢性铝负荷大鼠空间学习记忆能力明显下降,皮层神经元核固缩;皮层组织SOD活性均降低,MDA含量增加;皮层PGE2、PGD2、PGF2α、6-keto-PGF1α、TXB2的含量均显著升高;m PGES-1、PGIS、TXAS、EP2、DP1、IP、EP4 mRNA表达明显升高,EP3、FP、TP mRNA表达明显降低,H-PGDS、c PGES、EP1 mRNA无明显变化;皮层EP2、IP蛋白表达显著升高,而EP3蛋白表达明显降低,DP1、FP、TP蛋白无明显变化。结论铝负荷大鼠的皮层PGs合酶-PGs-PGs受体信号通路平衡失调,其可能参与了铝负荷致大鼠皮层神经损伤机制。

共振瑞利散射法对拟除虫菊酯类农药残留量的检测

为了建立一种快速、灵敏的测定拟除虫菊酯类农药残留的方法，用共振瑞利散射技术对拟除虫菊酯类农药残留量进行了测定。结果表明：在pH8．95的广泛缓冲溶液中，拟除虫菊酯类农药溶液与十二烷基硫酸钠混合，发现拟除虫菊酯类农药可使体系共振瑞利散射强度显著增加，其RRS最大散射峰均位于488nm波长附近；适宜的反应条件为缓冲液PH8．95，用量2．0mL，SDS浓度1．0μg／mL，反应放置时间30min，此条件下测定有良好的线性关系和较高的灵敏度，其检出限（3D）分别为氰戊菊酯（0．069μg／mL）、联苯菊酯（0．076μg／mL）、氯菊酯（0．062μg／mL）、混合菊酯（O．067μg／mL）；对水果蔬菜实际样品中拟除虫菊酯类农药的检测回收率在84．4％～101．5％，结果较为满意。

虾青素通过TGF-β1介导的Smads/ERK通路抑制肺纤维化

目的研究虾青素(astaxanthin,AX)对博莱霉素(bleomycin,BLM)所致SD大鼠肺纤维化的干预作用及机制。方法 SD雄性大鼠32只,体质量(200±20)g,采用随机数字表法分为Sham组(假手术组)、AX组、BLM组和AX+BLM组。经气道注入5 mg/kg的BLM(BLM组和AX+BLM组)或生理盐水(Sham组)后,每天灌服虾青素(2 mg/kg)油溶液(AX组和AX+BLM组)或植物油(BLM组)连续14 d,最后一次给药24 h后取材。检测肺系数,肺组织进行HE染色及Masson染色,显微镜下观察大鼠肺部炎症及纤维化程度;碱水解法检测羟脯氨酸含量;免疫组化法观察肺组织α-SMA蛋白表达情况;酶联免疫夹心法(ELISA)检测血清中TGF-β1水平;Western blot法检测Smad2/3及ERK1/2蛋白。结果与Sham组及AX组相比,BLM组肺损伤严重,有明显的肺纤维化病灶形成;与BLM组比较,AX+BLM组肺炎症程度及纤维化程度明显减轻(P<0.01),肺组织胶原蛋白沉积减少,羟脯氨酸含量明显降低(P<0.01),α-SMA蛋白表达减少,TGF-β1水平也明显降低(P<0.05),同时Smad2/3蛋白及ERK1/2蛋白磷酸化水平明显下降。结论虾青素能明显抑制BLM诱导的肺纤维化,其作用机制可能与降低TGF-β1水平,从而下调Smads/ERK通路有关。

虾青素对博来霉素致大鼠肺纤维化的干预作用及机制

目的探讨虾青素对博莱霉素所致SD大鼠肺纤维化的干预作用。方法将SD大鼠随机分为假手术组、虾青素组、博来霉素组、虾青素+博来霉素组。经气道注入博莱霉素(5 mg·kg-1)或生理盐水后,每天灌服虾青素(2 mg·kg-1)或植物油连续14 d,最后一次给药24 h后取材。计算肺系数,进行HE染色及Masson染色,显微镜下观察大鼠肺部炎症及纤维化程度;酶联免疫夹心法检测血清中TGF-β1水平;免疫组化观察肺间质α-SMA蛋白表达变化;碱水解法检测羟脯氨酸含量;Western蛋白印迹法法检测ERK1/2及Smad2/3蛋白磷酸化水平。结果与假手术组相比,博来霉素组肺损伤严重,有明显的肺纤维化病灶形成;与模型组比较,药物治疗组肺损伤明显减轻,胶原蛋白沉积减少,羟脯氨酸含量也明显降低(P<0.01),α-SMA蛋白表达减少,TGF-β1水平明显降低(P<0.05),同时ERK1/2蛋白及Smad2/3蛋白磷酸化水平明显下降。结论虾青素能明显改善肺纤维化,其作用机制可能与降低TGF-β1水平,抑制ERK1/2蛋白及Smad2/3蛋白磷酸化有关。

研讨式教学在本科生药理教学中的研究与探索

探索本科生药理学教学中研讨式教学的模式,评价其教学实施效果。结合近年来本单位在本科生药理教学中组织实施研讨式教学的实践经验,总结药理研讨式教学的模式,提出具体思考及建议。传统的讲授式教学已无法满足新形势下对高素质应用型医药卫生人才的需求,科学合理地组织实施研讨式教学,利于强化学生对基础知识的理解、提高解决实际问题的能力,弥补课堂教学的不足,激发学生的学习积极性与主动性。研讨式教学可进一步优化,增强师资力量培训;构建多元化教学模式;加强教学条件建设,不断提高研讨课的教学质量。

浅谈第二课堂活动在药理学教学中的实践与思考

药理学作为连接基础与临床、药学与医学间的桥梁学科,在医学教育中占有非常重要的地位。近年来,第二课堂活动在药理学教学中进行了一些有益尝试,对培养医学生的学习兴趣、科研能力、创新意识及合作精神起到关键作用。