四种不同添加物对仿刺参非特异性免疫力和肠道免疫基因Aj-p105、Aj-p50、Aj-rel和Aj-lys mRNA表达的影响

本实验研究了饲料中添加酵母多糖(6.3 g/kg)、马氏副球菌(109cfu/kg)、大黄(25.0 g/kg)和氟苯尼考(15.0 mg/kg)4种添加物对仿刺参[初始体质量(4.68±0.36)g]非特异性免疫力以及肠道组织免疫相关基因Aj-p105、Aj-p50、Aj-rel和Aj-lys mRNA表达的影响。每个处理分别设置5个重复,以投喂未添加上述任何成份的基础饲料组作为空白对照,养殖实验周期为60 d。结果发现,饲料中添加马氏副球菌能显著提高仿刺参体腔细胞的吞噬活性和呼吸爆发活力,而添加酵母多糖可以显著提高仿刺参体腔细胞的吞噬能力,但是添加氟苯尼考显著降低了仿刺参体腔细胞的呼吸爆发活力;而在仿刺参中肠肠道组织中,酵母多糖和马氏副球菌处理组免疫基因Aj-p105和Aj-p50 mRNA的表达均大幅上调,显著高于对照组。其中,酵母多糖添加组增幅分别为43.2%和63.1%,马氏副球菌添加组的增幅分别为49.8%和48.0%。马氏副球菌添加组中免疫基因Aj-lys的表达显著高于对照组,增幅为46.4%;大黄添加组中Aj-p105 mRNA的表达量显著高于对照组,而氟苯尼考添加组中Aj-p50、Aj-rel和Aj-lys的mRNA表达量相对于对照组均显著下降。研究表明,饲料中适当添加酵母多糖和马氏副球菌可有效提高仿刺参非特异性免疫力,而饲料中抗生素氟苯尼考的添加会降低仿刺参非特异性免疫力。

刺参池塘底质微生物群落功能多样性的季节变化

利用BIOLOG技术和冗余分析(Redundancy analysis,RDA)方法对刺参(Apostichopus japonicus)养殖池塘底质环境(底泥、附着基)微生物群落功能多样性的季节变化及其与环境因子的关系进行了研究。结果表明:(1)刺参池塘底泥和附着基微生物对碳源总量和单类碳源的利用均具有显著的季节变化,总体表现为春、夏、秋季节高于冬季,其中,底泥微生物利用比例较高的碳源类型为聚合物、糖类、羧酸和氨基酸,附着基微生物利用比例较高的碳源类型为聚合物、糖类、氨基酸和胺。(2)主成分分析表明,刺参池塘底泥和附着基微生物碳代谢方式均具有显著的季节变化。底泥中,与主成分显著相关的碳源有18种,其中与主成分1显著相关的主要是糖类、羧酸和氨基酸,与主成分2显著相关的主要是聚合物和糖类;附着基中,与主成分显著相关的碳源有22种,其中与主成分1显著相关的主要是聚合物、糖类、羧酸和氨基酸,与主成分2显著相关的是羧酸。(3)刺参池塘底泥和附着基微生物多样性指数Shannon、McIntosh、Simpson和S-E均匀度均存在显著的季节变化,但不同指数之间的变化有较大差异。(4)RDA分析表明,TP、NO3-N和PO4-P是影响底泥微生物功能多样性季节变化的主要因素,SOM、NO3-N和TN是影响附着基微生物功能多样性季节变化的主要因素。结论认为,刺参池塘底泥和附着基微生物功能多样性具有显著的不同的季节变化,这些变化与环境因子具有很好的相关性。

泼洒和投喂芽孢杆菌对刺参生长以及消化和免疫相关酶活性的影响

通过拌饵投喂和水体泼洒2种使用方式,研究了不同浓度的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus,编号BC-01)对刺参(Apostichopus japonicus)幼参的生长、肠道消化酶和体腔液非特异性免疫相关酶活性的影响。其中,水体泼洒实验组芽孢杆菌使用量分别为106、108和1010cfu·m-3(以活菌量计),拌饵投喂实验组芽孢杆菌添加量分别为107、109和1011cfu·kg-1(以活菌量计),以投喂基础饲料且水体无芽孢杆菌泼洒组为对照组,整个实验持续56d。结果表明:(1)水体泼洒106 cfu·m-3和拌饵投喂109 cfu·kg-1的芽孢杆菌可以显著促进刺参的生长,并显著降低刺参体重变异系数(P<0.05)。(2)泼洒108 cfu·m-3芽孢杆菌实验组的刺参肠道蛋白酶活性以及泼洒106和108 cfu·m-3芽孢杆菌实验组的脂肪酶活性均显著高于对照组(P<0.05)。投喂芽孢杆菌能显著提高刺参肠道蛋白酶活性(P<0.05),投喂107 cfu·kg-1芽孢杆菌的实验组刺参肠道脂肪酶活性和投喂109和1011cfu·kg-1芽孢杆菌的实验组淀粉酶活性均显著高于对照组(P<0.05)。(3)水体泼洒芽孢杆菌则显著提高刺参体腔液LSZ活性(P<0.05),但对SOD活性影响不大(P>0.05)。1010cfu·m-3芽孢杆菌泼洒浓度可以显著增强刺参体腔液AKP和ACP活性(P<0.05)。而投喂109和1011cfu·kg-1芽孢杆菌可以显著提高刺参体腔液过氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)和溶菌酶(LSZ)活性(P<0.05)。可以看出,芽孢杆菌BC-01以饵料添加方式对刺参体腔液免疫酶活性的促进作用优于水体泼洒。综合比较表明,芽孢杆菌BC-01拌饵添加的适宜浓度为109 cfu·kg-1,对刺参的生长、消化功能和非特异性免疫能力均具有显著促进作用。

刺参养殖池塘降解有机污染物常、低温芽孢杆菌的分离筛选

为修复刺参(Apostichopus japonicus)养殖环境,从山东胶南刺参养殖池塘采集水体、底泥和刺参(肠道)样品,利用刺参饵料培养基,分别于常温(28±1)℃和低温(16±1)℃下对样品中的常、低温芽孢杆菌细菌进行分离筛选。共筛选出8株优良细菌(常温菌5株:2株来自底泥,3株来自刺参肠道;低温菌3株:1株来自底泥,2株来自底泥和刺参肠道)。各菌株在有机污染物降解喜好和降解能力方面存在差异,常温菌5d能降解22.20%～49.10%的饵料蛋白、13.93%～68.73%的饵料淀粉和9.98%～42.33%的饵料有机物(COD),低温菌5d能降解29.80%～63.90%的饵料蛋白、40.63%～53.17%的饵料淀粉和16.40%～28.97%的COD。根据菌株形态特征、生理生化特性以及16SrRNA序列分析,8株细菌均归属为芽孢杆菌属(Bacillus),其中7株可初步鉴定到种:4株常温菌,分别为腊状芽孢杆菌(B.cereus)、短小芽孢杆菌(B.pumilus)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)和巨大芽孢杆菌(B.megaterium);3株低温菌,分别为坚强芽孢杆菌(B.firmus)、巨大芽孢杆菌(B.megaterium)和B.baekryungensis。本研究为刺参夏眠和生长季节期间养殖池塘环境的改善修复提供了良好的常、低温菌种资源。

蟹虾贝混养池塘生态系统微生物群落功能多样性研究

应用BIOLOG生态微板研究了三疣梭子蟹不同混养生态系统的细菌群落功能多样性,包括三疣梭子蟹和菲律宾蛤仔分别与中国明对虾、凡纳滨对虾和日本囊对虾混养系统,以三疣梭子蟹单养作为对照。结果表明,不同养殖生态系统细菌群落代谢功能在整个养殖期间表现出动态变化趋势,对底物碳源的利用数量和利用强度也具有较大差异。(1)随着时间的推移,三疣梭子蟹、菲律宾蛤仔和中国明对虾混养系统中水体中细菌群落代谢活性逐渐增强,而三疣梭子蟹、菲律宾蛤仔和日本囊对虾混养系统则逐渐降低。试验后期,中国明对虾和凡纳滨对虾两个混养系统中水体细菌群落代谢活性显著高于三疣梭子蟹单养系统,而凡纳滨对虾和日本囊对虾两个混养系统中底泥细菌群落代谢活性显著高于单养模式,中国明对虾混养系统则显著低于单养系统。(2)不同混养系统水体和底泥细菌群落对碳源种类利用差异随时间分化显著。试验后期,中国明对虾混养系统中水体细菌群落和日本囊对虾混养系统中底泥细菌群落对6类碳源的利用强度总体上均显著高于三疣梭子蟹单养系统(P<0.05)。(3)水体细菌群落功能Shannon指数和Simpson指数在试验后期出现显著差异(P<0.05),McIntosh指数则在整个试验期间均存在显著差异(P<0.05)。其中,中国明对虾和凡纳滨对虾两个混养系统中水体细菌群落3种多样性指数均显著高于三疣梭子蟹单养系统(P<0.05);凡纳滨对虾和日本囊对虾两个混养系统中底泥细菌群落功能McIntosh指数随时间呈显著升高趋势,而三疣梭子蟹单养系统却随时间呈显著下降趋势。试验后期凡纳滨对虾和日本囊对虾两个混养系统中底泥微生物群落多样性指数均显著高于单养模式(P<0.05)。混养凡纳滨对虾可能更有助于对混养生态系统细菌群落的结构与功能的优化。

中华鳖“红脖子病”组织病理观察、病原鉴定及药敏试验

对患"红脖子病"中华鳖(Trionyx Sinensis)的咽喉、肝、肺和肠组织进行石蜡切片观察,发现4种组织皆有不同程度的损伤,其中肝和肺最严重。从病鳖肺、肠和血液中共分离到3株优势菌株,DNA测序鉴定表明,2株为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),1株为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)。利用二倍稀释法检测嗜水气单胞菌对10种抗生素的最小抑菌浓度(MIC),结果表明,盐酸左氧氟沙星、硫酸庆大霉素、强力霉素、氟苯尼考和诺氟沙星对该菌的MIC分别为1.6、1.6、6.4、12.8和12.8μg·mL^(-1),其余5种抗生素抑菌效果不明显。利用牛津杯法对抑菌效果明显的5种抗生素进行体外药敏试验,结果显示,5种抗生素的抑菌敏感度由低到高依次为诺氟沙星、氟苯尼考、强力霉素、盐酸左氧氟沙星和硫酸庆大霉素,浓度依次为128、64、32、16和8μg·mL^(-1)。

翘嘴鳜铜锌超氧化物歧化酶重组蛋白表达、纯化及特性分析

超氧化物歧化酶(SOD)是清除生物体内超氧阴离子自由基的一种重要抗氧化酶。根据翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)Cu/Zn-SOD基因序列(Gen Bank登录号:KJ558392.1)设计表达引物,扩增获得截去信号肽后的一段460 bp的序列,序列经过鉴定后,构建了重组表达质粒p ET-30a+Sc Cu/Zn-SOD,并将该质粒转入到BL21(DE3)中,用IPTG诱导进行表达。经过优化表达条件得到可溶的Sc Cu/Zn-SOD重组蛋白(rScCu/Zn-SOD),纯化重组蛋白后测定rScCu/Zn-SOD的浓度和酶活性。结果发现在20℃和37℃条件下均能够诱导Sc Cu/ZnSOD的表达。37℃时重组蛋白主要以包涵体形式存在。降低诱导温度和补充Cu^(2+)/Zn^(2+)可提高rScCu/Zn-SOD的表达量。在20℃、0.5 mmol/L IPTG条件下,添加0.5 mmol/L CuSO_4和0.1 mmol/L ZnCl_2于培养基中,重组蛋白的表达量明显升高。纯化后的重组蛋白浓度为0.14 mg/m L,酶活力为108.5 U/mg。rScCu/Zn-SOD最适温度为37℃,最适pH为7.0,可耐受5%浓度的SDS蛋白质变性剂。

条纹锯鮨对盐度胁迫的耐受力及淡水胁迫恢复的初步研究

本文研究了条纹锯鮨(Centropristis striata)鱼种对低盐度胁迫的耐受力,以及淡水胁迫后最适恢复时间范围。实验结果表明:规格(20.32±9.67)cm的鱼种在0盐度的半致死时间为(1.63±0.23)h,规格(10.20±0.63)cm的鱼种在0盐度的半致死时间为(0.77±0.23)h。同时,2种规格的条纹锯鮨在盐度10的低盐水环境中可以存活96h以上。驯化可以延长鱼在0盐度下的半致死时间。恢复实验结果表明,规格(20.32±9.67)cm的鱼种淡水胁迫时间不宜超过82min,规格(10.20±0.63)cm的鱼种不宜超过40min。

刺参养殖池塘水体微生物群落功能多样性的季节变化

利用Biolog技术和冗余分析(RDA)方法对刺参养殖池塘水体微生物群落功能多样性的季节变化及其与环境因子间的关系进行研究.结果表明:刺参池塘水体微生物对碳源总量和单类碳源的利用均具有显著的季节变化,总体表现为夏季最高、冬季最低,其利用比例较高的碳源类型为聚合物.主成分分析表明,刺参池塘水体微生物群落碳代谢方式具有显著的季节变化,其中,与主成分1显著相关的碳源主要有10种,分别属于聚合物、糖类、羧酸、氨基酸和胺.刺参池塘水体微生物碳代谢多样性指数Shannon、McIntosh、Simpson和S-E均匀度均存在显著的季节变化,但不同指数之间的变化有较大差异.RDA分析表明,TP、NO3--N、TN和PO43--P是影响刺参池塘水体微生物群落功能多样性季节变化的主要因素.

芽孢杆菌水体泼洒对刺参体内外细菌群落结构的影响

研究了泼洒蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)BC-01对刺参(Apostichopus japonicus)生长的影响,并应用PCR-DGGE技术分析了养殖水体和肠道细菌群落结构的变化。芽孢杆菌的泼洒浓度分别为106、108和1010cfu/m3(分别命名为BC6、BC8和BC10),每7d全量换水1次,以未泼洒芽孢杆菌处理为对照组2(CT2)。另外设置每隔3d全量换水1次的未泼洒芽孢杆菌处理作为对照组1(CT1)。8周的养殖实验表明,BC6处理组刺参的末体重显著高于2个对照组(P<0.05),BC8和BC10处理组刺参的末体重显著高于对照组CT1(P<0.05)。而BC6和BC8处理组的刺参特定生长率均显著高于CT1和CT2处理组(P<0.05)。研究发现,刺参养殖水体中的优势菌群归属于α-变形菌纲(α-Proteobacteria)、γ-变形菌纲(γ-Proteobacteria)、δ-变形菌纲(δ-Proteobacteria)、黄杆菌纲(Flavobacteria)、拟杆菌纲(Bacteroidetes)和疣微菌纲(Verrucomicrobiae),各处理水体中细菌群落结构明显不同,蜡样芽孢杆菌未能在养殖水体中形成优势菌群。刺参肠道内含物中优势菌群归属于α-变形菌纲、γ-变形菌纲、ε-变形菌纲、黄杆菌纲、拟杆菌纲和芽孢杆菌纲,以BC8和BC10处理组之间的相似度最高。芽孢杆菌纲(Bacilli)细菌在3个处理组刺参肠道内含物中成为优势菌群,并在BC6处理组成为第一优势菌群,而相对于CT2对照组,拟杆菌纲细菌相对丰度在3个处理组中显著下降。刺参肠道固定菌群的优势菌群归属于α-变形菌纲、γ-变形菌纲、黄杆菌纲和芽孢杆菌纲,相对于对照组CT1和CT2,3个处理组刺参肠道γ-变形菌纲的相对含量明显下降。相对于对照CT2,BC6和BC8处理组中芽孢杆菌成为第一优势菌群。黄杆菌纲细菌比例随芽孢杆菌添加量的增加而升高。本研究表明,水体中泼洒该芽孢杆菌制剂对水体和刺参肠道菌群结构均具有显著影响,在适宜的泼洒浓度下可以有效提高刺参的生长速度。

不同温度条件下条纹锯鮨耗氧率与窒息点的初步研究

摘要设定8个实验温度梯度(16、18、20、22、24、26、28、30C),利用静水呼吸室法对条纹锯(?)的耗氧率和窒息点进行了测定,结果表明:条纹锯(?)鱼种的耗氧率与窒息点均与温度正相关;耗氧率回归方程为Y=0.0028x^3-0.0366x^2+0.1579x+0.0706(R^2=0.9835),20～28℃条件下其耗氧率稳定在0.3080±0.0212 mg/g/h区间,认为20～28℃为该规格条纹锯鲐最适生长温度范围。窒息点回归方程为Y=0.435x^(0.5824)(R^2=0.9297),22～26℃下其窒息点稳定在0.72～0.75 mg/L之间。