熏烟对肺组织AQP1表达与定位的影响

目的探讨水通道蛋白1(Aquaporin1,AQP1)在慢性阻塞性肺病(Chronic obstruc-tive pulmonary disease,COPD)和熏烟诱导的COPD小鼠模型中的表达变化。方法选取SPF级昆明小鼠30只,4周龄,采用随机数字表法分为空白对照组、熏烟3个月组和熏烟6个月组,各10只。熏烟组小鼠构建熏烟诱导的COPD小鼠模型,空白对照组小鼠不进行任何处理。免疫组织化学法和蛋白印迹法分别测定各组小鼠肺组织中的AQP1蛋白表达量。体外使用尼古丁刺激人非小细胞肺癌细胞系A549,分为对照组(PBS)、3μmol/L尼古丁组(3μmol/L)和5μmol/L尼古丁组(5μmol/L),测定各组A549细胞中的AQP1蛋白表达量。用“limma”函数对COPD数据进行差异表达基因分析;对AQP1表达量与差异表达基因进行Pearson相关性分析;用GeneMANIA平台对相关性强的基因进行富集分析。结果免疫组织化学结果显示,对照组小鼠肺组织中AQP1主要分布于肺组织毛细血管内皮细胞和红细胞内,在Ⅱ型肺泡上皮细胞的顶膜也有少量分布。HE染色结果显示,对照组小鼠肺泡及肺间质无炎症细胞浸润,呼吸道通畅;熏烟3个月组小鼠肺组织可见肺大泡形成,小气道及血管周围可见炎性细胞浸润,并伴有黏性分泌物堆积;熏烟6个月组小鼠肺组织可见大量肺大泡,血管周围有大量炎性细胞聚集。蛋白印迹法检测结果显示,熏烟3个月组和6个月组小鼠肺组织中AQP1蛋白表达量较对照组分别减少约40%和60%(P<0.01)。体外使用尼古丁刺激结果显示,与对照组比较,3μmol/L尼古丁组AQP1蛋白表达量升高(P<0.05);5μmol/L尼古丁组AQP1蛋白表达量更高(P<0.01)。生物信息学分析结果显示,数据集GSE103174中,与正常肺组织比较,COPD患者肺组织中AQP1显著降低(P=0.00013);差异表达基因分析发现,与正常组比较,COPD患者有62个基因表达上调和56个基因表达下调;Pearson相关性分析发现,表皮调节素(EREG)、前列腺素G/H合酶2(PTGS2)、双调蛋白(AR-EG)等基因与AQP1相关性系数(R2)>0.5;富集分析结果显示,EREG、白介素-6(IL-6)、AREG参与上皮细胞增殖过程,细胞色素P450家族1亚家族B成员1(CYP1B1)、白介素-1β(IL-1β)、IL-6、PTGS2参与血管内皮生长因子的产生。结论COPD患者与熏烟诱导COPD小鼠模型的肺组织AQP1蛋白表达降低,这可能与尼古丁刺激肺泡上皮细胞导致AQP1增高无关。

免疫组织化学的原理和应用

通过利用抗体和抗原的特异性结合的原理,通过化学反应,使组织内的特定物质可视化,借助显微镜(包括荧光显微镜、激光显微镜,光学显微镜、电子显微镜)对其进行定位、定性及定量的研究方法称为免疫组织化学法(Immunohistochemistry,免疫组化)。基本原理是通过特殊标记(荧光素、酶、金属、同位素)的抗体为中介在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。免疫组化是广义的名称,免疫电镜可称呼为免疫细胞化学(Imnmocytochemisny)。首先哈弗大学的细菌学教授coons开发了荧光抗体法,虽然应用的是简单的直接法,但开创了免疫组化的新的开端。1960年由日本人中根提出了酶免疫抗体法(Immunoperoxidase method),接着又开发了PAP法,ABC法等间接法。近年来由于荧光显微镜,激光共焦显微镜的出现,在研究领域使用荧光色素的方法也开始普遍引用。另外在临床病理诊断中酶免疫组化的使用率较高,针对目的的不同,使用的免疫组化的方法也各异。为了下面我针对免疫组化实验过程中的固定,抗体,染色的机制浅谈一下自己的经验。

新医科背景下组织学与胚胎学教学中学生思维培养模式的探讨

2020年《国务院办公厅关于加快医学教育创新发展的指导意见》(国办发[2020]34号)指出以“新医科”为抓手,分类培养研究型、复合型和应用型人才,以新的内涵强化医学培养,加强知识扎实的学术、本领过硬的技术、方法科学的艺术教育[1]。医学生的培养注重知识更新、交叉融合,也要注重适应变化能力和创新能力的塑造。在多学科和跨学科的交叉融合下,培养医学生临床思维是“新医科”人才培养体系的重要组成部分。在现行的医学教育中,先进行为期2.5年的基础医学教育,之后进行临床理论及技能培训。

水通道蛋白1、3在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义

目的探讨膀胱尿路上皮癌中水通道蛋白1、3(AQP1、AQP3)的表达与分布,及其与组织学分级和病理分期之间的关系及临床意义。方法采用免疫组化S-P法、蛋白免疫印迹(Western-blot)法对60例膀胱尿路上皮癌组织及30例正常膀胱组织中AQP1及AQP3的表达进行检测,并分析与其不同组织学分级、不同病理分期和有无淋巴结转移的关系。结果 AQP1在膀胱尿路上皮癌组织及正常膀胱组织中主要表达在微血管的内皮细胞的细胞膜及细胞质中,AQP3主要表达在膀胱尿路上皮癌的癌细胞的胞膜及胞质中。免疫组织化学S-P法和Western blot法检测的结果基本一致。正常膀胱组织与不同分级的膀胱尿路上皮癌组织中AQP1及AQP3的蛋白表达量分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01);正常膀胱组织与不同病理分期的膀胱尿路上皮癌组织中AQP1及AQP3的蛋白表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.01);AQP1及AQP3在有淋巴结转移的膀胱癌组织中的表达量分别与无淋巴结转移的膀胱癌组织比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 AQP1和AQP3的表达与膀胱癌的组织学分级及病理分期有关,在膀胱癌形成及发展过程中起重要作用,对预测膀胱癌的侵袭性、分期及临床诊疗有指导意义。

大鼠膝关节挛缩模型的建立与技术要点

目的建立大鼠膝关节挛缩模型,为进一步研究关节挛缩的发病机制及其治疗方案奠定实验基础。方法取36只健康雄性Wistar大鼠,按照随机数字表法将其分为三组:正常组,模型对照组和假手术组,每组12只。正常组不进行造模手术,模型对照组通过麻醉备皮后分别从大鼠的股骨与胫骨植入克氏针,确定角度后进行外固定将大鼠的左后肢膝关节制动3周建立关节挛缩动物模型,假手术组同模型对照组进行同样的造模手术但不进行最后的固定。3周后拔除两组大鼠的克氏针及外固定,拍摄X线片,测量各组大鼠的关节活动度(ROM)并抽取关节液检测关节液中转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。结果模型对照组中有1只大鼠造模侧肢体制动时间未达到3周,外固定中途脱落,1只大鼠X线显示股骨骨折,剩余10只大鼠符合造模后观察指标,造模成功率为83.33%。与正常组和假手术组比较,模型对照组关节活动受限程度及TGF-β1均有明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功建立了大鼠膝关节挛缩模型,且造模成功率高,稳定可靠,可为今后关节挛缩的相关研究奠定较好的动物模型平台。