库尔勒香梨多糖基于抑制焦亡关键蛋白NLRP3、GSDMD的表达发挥抗炎作用

目的:筛选库尔勒香梨多糖抑制焦亡的活性组分及初步探索抑制细胞焦亡分子机制。方法:库尔勒香梨脱脂后从中提取分离获得库尔勒香梨粗多糖(Pyrus sinkiangensis Yu polysaccharide,PSP)、中性多糖(Pyrus sinkiangensis Yu neutral polysaccharide,PSN)、酸性多糖(Pyrus sinkiangensis Yu acid polysaccharide,PSA);脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)及三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)刺激RAW264.7细胞,建立焦亡模型后进行PSP、PSA、PSN干预,检测细胞存活率、白介素-1β(IL-1β)及白介素-18(IL-18)的mRNA表达量、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)及消皮素D(GasderminD,GSDMD)蛋白的表达水平。结果:PSP、PSN、PSA的总多糖含量分别为7.70%、8.39%、13.49%;模型组与对照组相比,细胞的增殖率降低到14.2%(P<0.001),IL-1β、IL-18的mRNA表达量,NLRP3、GSDMD蛋白表达量明显增加(P<0.01);1000μg/mL PSP、PSN、PSA组与模型组相比,细胞存活率明显增加(P<0.01),其中PSN、PSA组可明显降低IL-1β、IL-18的mRNA表达水平,抑制NLRP3、GSDMD蛋白的表达(P<0.01)。结论:库尔勒香梨多糖可以抑制细胞焦亡有关基因IL-1β、IL-18及蛋白NLRP3、GSDMD的表达,从而抑制细胞焦亡发挥抗炎作用。

芜菁多糖除蛋白及抑制RAW264.7巨噬细胞焦亡作用研究

目的 考察芜菁多糖两种方法除蛋白效果,并探讨其对RAW264.7巨噬细胞焦亡的抑制作用。方法 采用AB-8大孔吸附树脂法、Savage法去除蛋白,苯酚-硫酸法测定多糖含量,采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)及三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)建立细胞焦亡模型,细胞毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)检测芜菁多糖对RAW264.7细胞增殖率的影响,免疫印迹实验(Western-Blot,WB)检测消皮素D (gasdermin D,GSDMD)相对表达量,酶联免疫吸附测定法检测白细胞介素-18 (interleukin18,IL-18)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-6水平。结果 AB-8大孔吸附树脂除蛋白,多糖保留率为85.9%,蛋白去除率为91.0%;Savage法多糖保留率为77.6%,蛋白去除率为72.8%,精密度、稳定性、重复性和加样回收率的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于2.0%。与模型组相比,芜菁多糖各剂量能显著下调GSDMD的表达(P<0.05),减少LPS/ATP诱导的RAW264.7细胞炎性因子IL-18、IL-1β、TNF-α、IL-6的释放(P<0.05)。结论 AB-8大孔吸附树脂法较Savage法,蛋白去除率及多糖保留率更高;芜菁多糖对LPS/ATP诱导的RAW264.7细胞焦亡具有抑制作用,能在一定程度上减轻细胞损伤,这可能与其抑制LPS/ATP诱导焦亡过程中的炎性反应和调控GSDMD蛋白的表达有关。

响应面法优化妇科消糜栓的提取工艺

目的 通过响应面法优化传统制剂妇科消糜栓的提取工艺。方法 在单因素实验的基础上,以药材粉碎粒度、料液比、浸泡时间和提取时间为自变量,以浸膏得率和盐酸小檗碱、没食子酸含量为因变量,用Box-Behnken法设计不同水平实验,用Design-Expert 8.0.6.1软件建立二次回归模型,优化提取工艺。结果 最佳提取工艺:粉碎度为中粉、料液比为1∶19、浸泡时间为12 h、提取时间为2 h,此时妇科消糜栓中有效成分没食子酸含量为9.92%、浸膏得率为39.35%、盐酸小檗碱含量为10.98%、综合评分为25.98%。结论 响应面法优化所得提取工艺参数稳定可行,可在实际生产中应用。

芜菁酸性多糖结构及对脂多糖诱导肺损伤小鼠的保护作用

目的:研究芜菁酸性多糖(Brassica rapa L.acidic polysachharide-1,BRAP-1)的结构及其对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠肺损伤的影响及其机制。方法:采用苯酚硫酸法、间羟基联苯法、考马斯亮蓝法、高效凝胶渗透色谱、傅里叶变换红外光谱、气相色谱-质谱法对BRAP-1化学组成、分子质量、结构及单糖组成进行分析。动物实验正常组、模型组小鼠灌胃0.5 mL/d生理盐水,BRAP-1低、中、高剂量组分别灌胃50、100、200 mg/(kg mb·d),持续10 d,采用LPS气管滴注法建立肺损伤模型,检测相关指标,包括肺湿质量/干质量比值、肺泡灌洗液蛋白质量浓度、总细胞数,并进行苏木精-伊红染色;采用酶联免疫吸附测试法测定各组小鼠血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-10、干扰素γ水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测肺组织中肿瘤坏死因子受体、Toll样受体4、核转录因子-κB p65(nuclear factor kappa B p65,NF-κB p65)、IL-1β、NOD样受体3(NOD-like receptor 3,NLRP3)基因m RNA表达水平。结果:与模型组相比,BRAP-1对肺损伤小鼠肺组织水肿、肺泡浸润、蛋白渗出、细胞因子过度释放等病理学改变有缓解作用;并显著降低NF-κB/NLRP3通路关键基因mRNA表达水平。结论:BRAP-1对LPS诱导的小鼠肺损伤具有显著保护作用,其机制可能是调节NF-κB/NLRP3信号通路。

响应面法优化核桃分心木中多糖的提取工艺

目的优化核桃分心木中多糖的提取工艺。方法采用超声提取法对核桃分心木中多糖进行提取,以多糖含量为考察指标,在单因素实验的基础上,研究超声提取温度、超声提取时间、料液比对核桃分心木多糖含量的影响,并采用响应面法优化核桃分心木多糖含量的提取工艺。结果核桃分心木中提取多糖的最佳工艺参数为:超声提取温度为60℃、超声提取时间为40min、料液比为1:15(m/V)。采用此条件此方法提取核桃分心木中多糖,含量为17.42%,相对标准偏差为0.273%。结论采用响应面优化法得到的提取条件参数准确可靠,具有实际应用价值。