鞣花酸对马兜铃酸I所致肾小管上皮细胞毒性的保护作用

探究了鞣花酸(ellagic acid,EA)对马兜铃酸I(aristolochic acids I,AAI)诱导的HK-2人肾小管上皮细胞毒性的保护作用和潜在机制.用噻唑蓝(MTT)比色法,乳酸脱氢酶(LDH)活性检测法评价了细胞活力;用Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞分析法(FITC-Annexin V/PI双染)检测了细胞凋亡;用免疫印迹和实时荧光定量PCR检测了细胞内NF-κB和NLRP3通路相关因子的表达水平.结果显示:EA显著改善了AAI所致的HK-2细胞活力下降与凋亡增加的现象.进一步研究表明,AAI通过激活NF-κB上调HK-2细胞内NLRP3炎症小体组分编码基因的转录.EA则能明显阻断AAI对NF-κB/NLRP3通路的激活作用.综上所述,EA能明显缓解AAI诱导的HK-2细胞的毒性,其作用机制可能与阻断AAI对细胞内NF-κB/NLRP3级联的激活作用紧密相关.

竹节参皂苷成分对对乙酰氨基酚诱导急性肝损伤的保护作用

目的:观察竹节参总皂苷提取物(PJST)对对乙酰氨基酚(APAP)诱导急性肝损伤的预防保护作用.方法:构建APAP诱导HepG2细胞损伤的体外模型,采用MTT法评价PJST对APAP诱导HepG2细胞死亡的预保护作用,并观察细胞形态变化,采用Hoechst 33258荧光染色法研究PJST对细胞凋亡形态的影响.取40只昆明种小鼠构建体内模型,小鼠随机分为空白组、模型组和PJST低、高剂量组(50、100 mg·kg^(−1)),腹腔单次注射APAP溶液(400 mg·kg^(−1))以构建肝损伤模型.给药造模结束后,处死小鼠并收集血清及肝脏组织.采取生化试剂盒检测血清中ALT、AST和LDH水平,ELISA法检测肝脏组织TNF-α、IL^(-1)β和IL-6水平,HE染色法观察肝脏组织显微结构变化情况,免疫组化法检测肝组织Bax和Bcl-2蛋白的表达差异,免疫印迹检测肝组织Bax、Bcl-2、P-NF-κB p65和核内NF-κB p65的蛋白表达水平.结果:PJST可以有效干预APAP诱导的HepG2细胞凋亡;体内实验中PJST组小鼠血清ALT、AST和LDH水平均显著低于模型组,且肝脏显微结构变化也较模型组有所恢复.进一步研究结果显示:PJST可以显著改善由APAP诱导的肝脏细胞凋亡,Bax和Bcl-2蛋白表达的异常,NF-κF p65的异常磷酸化和入核,以及抑制肝脏内炎症因子TNF-α、IL^(-1)β和IL-6的过量产生与释放.结论:PJST可以明显缓解APAP诱导的急性肝损伤,其机制可能与抑制肝细胞凋亡和炎症反应有关.

维吾尔药复方待比地力对顺铂所致小鼠肾损伤的保护作用

目的:观察维吾尔药复方待比地力(DBD)对顺铂所致小鼠肾损伤的影响.方法:昆明小鼠40只随机分为正常组、肾损伤模型组、DBD低和高剂量干预组共4组.检测小鼠血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)含量以及肾脏MDA、GSH、SOD和CAT、TNF-α、IL-1β和IL-6水平;观察肾脏显微结构;并检测肾内NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)和IL-1β的蛋白表达水平.结果:DBD能显著下调肾损伤小鼠血清中BUN和Cr的含量并改善顺铂诱导的肾脏显微结构变化.与肾损伤模型组比较,DBD组小鼠肾内MDA水平明显降低,GSH、SOD和CAT水平则明显增加.顺铂诱导了NLRP3、ASC和caspase-1蛋白的表达并上调肾内炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量.DBD剂量依赖性地改善了小鼠肾损伤.结论:DBD能明显缓解顺铂诱导的小鼠肾损伤,其机制可能与通过抑制肾内NLRP3炎症小体各组分的表达来减轻顺铂诱导的肾脏炎症反应有关.

熊胆粉通过调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路产生对急性酒精性肝损伤小鼠的肝保护作用

目的观察研究熊胆粉(Pulvis Fellis Ursi,PFU)对急性酒精性肝损伤小鼠的肝保护作用及其可能的机理。方法取昆明种小鼠50只,随机分为正常组、模型组、PFU低、中、高剂量组(剂量分别为150、300、600 mg·kg^(-1),溶于生理盐水),每组10只。正常组和模型组小鼠每天灌胃生理盐水(10 mL·kg^(-1)),PFU组每天灌胃相应剂量溶液,连续8天。末次给药结束后,模型组以灌胃的方法给予50%乙醇溶液(10 mL·kg^(-1)),每12 h一次,共6次,末次给予50%乙醇溶液4 h后,处死小鼠并收集血清及肝脏组织。分别用生化试剂盒检测血清中ALT、AST、TG、TC和肝脏组织中GSH、T-SOD和MDA水平;用酶联免疫法检测肝脏组织TNF-α、IL-1β和IL-6水平;用HE染色法观察肝脏组织显微结构变化情况;用免疫印迹法检测肝组织总Keap1的表达和肝组织核内Nrf2的表达,用免疫印迹和免疫组化法分别检测肝组织总HO-1和GCLC蛋白的表达。结果PFU能显著下调乙醇所致肝损伤小鼠血清中ALT、AST、TG和TC的异常升高,并改善乙醇诱导的肝脏显微结构变化。与肝损伤模型组比较,PFU组小鼠肝组织内MDA水平明显降低,GSH和T-SOD水平则明显增加。进一步研究表明,乙醇能诱导小鼠肝脏内炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的上调,PFU可以剂量依赖性地缓解了上述病变。并且PFU预处理组下调了Nrf2的抑制因子Keap1的表达,从而促进了Nrf2蛋白的入核并上调了乙醇抑制的下游蛋白HO-1和GCLC的表达,从而发挥肝保护的作用。结论熊胆粉对小鼠急性酒精性肝损伤有一定的预保护作用,其机制可能与调控肝脏内Keap1/Nrf2/ARE信号通路,恢复并上调由乙醇所破坏的肝脏氧化平衡有关。

鞣花酸对马兜铃酸Ⅰ诱导小鼠急性肾损伤的保护作用

目的:研究鞣花酸(ellagic acid,EA)对马兜铃酸I(aristolochic acids I,AAI)诱导的急性肾损伤的保护作用。方法:40只昆明小鼠(雌雄各半)随机分为健康组、模型组(10 mg/kg m_(b) AAI)、EA低剂量组(10 mg/kg m_(b) AAI+10 mg/kg m_(b) EA)和EA高剂量组(10 mg/kg m_(b) AAI+30 mg/kg m_(b) EA),EA不同剂量组小鼠每天灌胃不同剂量的EA,从第7天开始,腹腔注射AAI建立急性肾损伤模型,然后灌胃给予不同剂量的EA,12 d后处死小鼠;检测肾脏指数、尿蛋白、尿素氮和肌酐水平等肾功能指标;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)和Masson染色检测肾脏组织病理学变化;检测肾脏内氧化应激指标(包括还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平),检测小鼠体内炎症因子水平;通过免疫印迹和定量聚合酶链式反应检测肾脏中核因子(nuclear factor,NF)-κB和NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)通路相关因子的表达。结果:与模型组相比,EA能显著改善肾损伤模型小鼠的各项肾功能指标以及肾脏组织病理学变化,恢复肾组织中氧化应激指标到接近正常水平;此外,与模型组相比,在EA的作用下小鼠血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素(interleukin,IL)-1β水平下降,肾脏中TNF-α和IL-1β编码基因的转录水平亦有明显下降;进一步研究发现,与模型组相比,EA能显著下调小鼠肾脏内NF-κB抑制蛋白(inhibitor of NF-κB,IκB)α和NF-κB p65蛋白的磷酸化水平(P<0.05,P<0.01),抑制NLRP3炎性小体各组分(包括NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-1和IL-1β的转录和翻译。结论:EA对AAI诱导的小鼠急性肾损伤具有保护作用,其机制可能与通过干预NF-κB/NLRP3通路阻断AAI所致的肾脏内炎症反应紧密相关。