LINC00052靶向miR-145发挥对TNF-α诱导人关节软骨细胞损伤的保护作用

目的明确长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LINC00052在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)诱导人关节软骨细胞损伤中的作用,并阐明其对miR-145的调控机制。方法利用0、10及30 ng/mL TNF-α诱导建立人C-20/A4关节软骨细胞损伤模型。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测LINC00052与miR-145的表达及二者的相关性。通过特异性短发夹RNA干扰C-20/A4细胞中LINC00052的表达,采用四唑盐比色法[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]检测细胞增殖能力。采用蛋白质印迹检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3,CASP3)、cleaved CASP3、Bcl-2相关X(Bcl-2 associated X,BAX)蛋白的表达水平。采用酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎症因子白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6及IL-13的浓度。采用双荧光素酶报告基因实验分析LINC00052对miR-145的直接调控作用。采用拯救实验验证LINC00052靶向miR-145在TNF-α诱导C-20/A4细胞损伤中的作用。采用t检验与方差分析进行统计比较。结果LINC00052在0、10及30 ng/mL TNF-α诱导C-20/A4细胞中的表达水平呈上调趋势,而miR-145呈下调趋势,二者表达水平呈负相关(P<0.05)。干扰LINC00052降低TNF-α诱导C-20/A4细胞增殖能力,增加CASP3、cleaved CASP3及BAX的蛋白表达水平,并提高IL-1β、IL-6及IL-13的浓度(P<0.05)。miR-145是LINC00052的直接靶基因,干扰LINC00052上调C-20/A4细胞中miR-145的表达水平(P<0.05)。干扰miR-145部分逆转LINC00052抑制对TNF-α诱导C-20/A4细胞增殖、凋亡及炎症反应的影响(P<0.05)。结论LINC00052靶向miR-145发挥对TNF-α诱导人关节软骨细胞损伤的保护作用,其机制可能与促进增殖并抑制凋亡与炎症反应有关。

微小RNA-125a-5p负性调控基质金属蛋白酶11对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的检测微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)在骨肉瘤细胞及正常成骨细胞(NHOst)中的表达特征,并探讨其通过负性调控基质金属蛋白酶11(MMP-11)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用荧光定量PCR分析骨肉瘤细胞及正常成骨细胞中miR-125a-5p的表达情况。体外转染miR-125a-5p模拟物(mimics)至骨肉瘤细胞系(HOS和Saos-2),并观察其对细胞增殖及凋亡的影响。通过双荧光素酶报告基因试验及Western blot验证miR-125a-5p对MMP-11的负性调控作用。结果 miR-125a-5p在HOS和Saos-2细胞中的表达均显著低于NHOst细胞( P <0.05)。HOS和Saos-2细胞中转染miR-125a-5p mimics可显著升高细胞内源性miR-125a-5p表达水平( P <0.05)。过表达miR-125a-5p抑制HOS和Saos-2细胞的增殖,并促进细胞凋亡( P < 0.05)。miR-125a-5p与MMP-11 信使RNA(mRNA)3′-非编码区(3′-UTR)存在互补结合位点,其通过与MMP-11结合而抑制骨肉瘤细胞中MMP-11蛋白的表达( P <0.05)。结论 miR-125a-5p在骨肉瘤细胞中呈现低表达,过表达miR-125a-5p可通过负性调控MMP-11抑制骨肉瘤细胞的增殖,并促进细胞凋亡,提示miR-125a-5p可作为骨肉瘤新的分子治疗靶点。

miR-194-3p靶向调控MMP-11抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究miR-194-3p对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:实验设置空白对照组(control)、miR-194-3p-mimics组(转染miR-194-3p-mimics)、miR-194-3p-inhibitor组(转染miR-194-3p-inhibitor)、siRNA-MMP-11组(转染siRNA-MMP-11)、ovRNA-MMP-11组(转染ovRNA-MMP-11)、miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11组(转染miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11),均以脂质体法转染至人成骨肉瘤细胞Saos-2;MTT法检测细胞增殖率;Transwell实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白印迹实验(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶11(MMP-11)蛋白表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-194-3p的表达水平。结果:MTT法检测结果显示:miR-194-3p-mimics组、siRNA-MMP-11组、miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11组会降低细胞增殖,并与空白对照组和ovRNA-MMP-11组相比有统计学差异(P<0.05)。细胞划痕实验检测结果显示:miR-194-3p-mimics组、siRNA-MMP-11组、miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11组细胞愈合率明显低于ovRNA-MMP-11组(P <0.05)。细胞侵袭实验检测结果显示:siRNA-MMP-11组、miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11组降低细胞侵袭能力,并与空白对照组和ovRNA-MMP-11组相比有统计学差异(P <0.05)。qRT-PCR检测结果显示:miR-194-3p-mimics组中miR-194-3p的表达水平与空白对照组、miR-194-3p-inhibitor组、siRNA-MMP-11组、ovRNA-MMP-11组、miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11组相比均有统计学差异(P <0.05)。结论:miR-194-3p在人成骨肉瘤细胞中高表达,并可抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向调控MMP-11所参与的上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)信号通道有关,miR-194-3p将来可能为骨肉瘤的预防和治疗提供新靶点。

老年髋部骨折围手术期处理与手术治疗研究进展

老年髋部骨折多建议手术治疗。围手术期可进行神经阻滞实现镇痛,术中麻醉方式包括全身麻醉和椎管内麻醉,应根据患者自身情况选择合适的麻醉方式。通常建议老年髋部骨折应尽早手术,但应结合老年患者身体状况灵活把握手术时机。老年髋部骨折应根据骨折具体情况选择术式,股骨颈骨折通常采用切开或闭合复位内固定,全髋或半髋关节置换术;股骨转子间骨折的治疗主要为内固定,可使用动力髋螺钉或髓内钉;股骨转子下骨折可选择髓内固定、髓外固定和外固定。老年髋部骨折术后护理与手术同样重要,建议患者早期下床活动,康复过程可能持续数月。该文对老年髋部骨折围手术期处理与手术治疗的研究进展作一综述。

大剂量氨甲环酸降低脊柱结核患者围手术期出血风险

目的探讨预防性应用大剂量氨甲环酸能否有效减少脊柱结核围手术期出血及相关不良事件。方法选择本院2016年1月-2018年12月行一期经椎间孔入路病灶切除椎间植骨融合内固定术治疗的腰椎结核患者90例,随机分为小剂量氨甲环酸治疗组(小剂量组)、大剂量氨甲环酸治疗组(大剂量组)和对照组,每组30例。所有患者全身抗结核治疗2~3周后行一期经椎间孔入路病灶切除椎间植骨融合内固定治疗。小剂量组静脉泵注含1 mg/kg氨甲环酸的生理盐水50 mL,大剂量组泵注含15 mg/kg氨甲环酸的生理盐水50 mL,对照组泵注等量生理盐水,均于术前30 min开始泵注。记录手术时间,术中和术后出血时间、出血量、输血量,手术前后凝血功能,术后引流量、血红蛋白量及红细胞比容,住院时间、术后恢复时间及其他不良事件。结果3组患者手术时间、术中及术后出血时间、术后出血量及输血量、手术前后凝血功能、住院时间、术后恢复时间差异均无统计学意义(P>0.05)。大剂量组术中出血量及输血量和术后引流量均较小剂量组和对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05),小剂量组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。大剂量组术后血红蛋白水平、术后红细胞比容均高于小剂量组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05),小剂量组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。所有患者围手术期均未发生手术部位感染、血管和神经损伤及静脉血栓等严重并发症。所有患者术后随访8~12个月,椎间植骨均获得骨性融合,未发生假关节形成,内固定物断裂、松动、脱落等情况。所有患者结核症状消失,病灶全部愈合,无复发。结论术前预防性应用大剂量氨甲环酸可降低脊柱结核患者围手术期出血风险,且不增加不良事件发生风险。

一期人工关节置换治疗晚期活动性膝关节结核

目的探讨一期病灶清除人工关节置换术治疗晚期活动性膝关节结核的可行性及疗效。方法回顾性分析2009年3月至2019年3月在我院骨科中心行一期人工膝关节置换术治疗晚期活动性膝关节结核的15例病人的临床资料,其中男5例(6膝),女10例(10膝),平均年龄为53.9岁(26~77岁),入院时均有膝关节疼痛,膝关节不同程度出现畸形、活动受限,4例出现膝关节强直。术中均采用骨水泥型膝关节假体。收集15例病人入院后首次、术前、术后1周、术后1个月、术后6个月、末次随访时的C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR),术前和末次随访时的美国特种外科医院(Hospital for Special Surgery,HSS)膝关节评分和膝关节活动度(range of motion,ROM),以及假体稳定性、结核复发情况。结果所有病人获得12~88个月随访,术后规律抗结核治疗12~18个月。12例术后病理检查见典型的结核性肉芽肿,3例抗酸染色阳性。随访期间1例复发,进行病灶清除术后治愈。ESR和CRP均在术后6个月内基本恢复正常,不同时间的数值整体比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。末次随访时,所有病人未见结核复发,X线检查未见假体松动,膝关节HSS评分由术前的(43.4±9.4)分增加至(82.7±7.5)分,ROM由49.3°±31.3°增加至86.0°±32.5°,手术前后的数值比较,差异均有统计学意义(t=-13.231,P<0.001;t=-5.500,P<0.001)。结论在手术前后规律抗结核治疗、术中彻底病灶清除的前提下,一期人工关节置换治疗晚期活动性膝关节结核可以控制感染,解除疼痛,重建膝关节功能,复发率较低,远期疗效仍需进一步观察研究。

miR-145对TNF-α诱导人关节软骨细胞增殖、凋亡及炎症反应的影响

目的明确miR-145在肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导人关节软骨细胞增殖、凋亡及炎症反应中的作用。方法利用0、5、10、15及30 ng/ml TNF-α诱导人C-20/A4和CH8关节软骨细胞48 h,提取总RNA并反转录,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-145的表达水平。瞬时转染miR-145模拟物(mimics)至30 ng/ml TNF-α诱导的人C-20/A4和CH8细胞,分别采用噻唑蓝比色法[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]、蛋白质印迹及酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)观察细胞增殖、凋亡及炎症因子浓度的变化。结果随着TNF-α诱导浓度的提高,C-20/A4和CH8细胞中白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6及IL-13的浓度呈剂量依赖性升高(P<0.05),而miR-145的表达水平呈剂量依赖性降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-145 mimics显著提高C-20/A4和CH8细胞中miR-145的表达水平(P<0.05)。与对照组相比较,miR-145 mimics显著降低C-20/A4和CH8细胞增殖能力,并增加胱天蛋白酶3(caspase 3,CASP3)、cleaved CASP3、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,BAX)的表达水平及IL-1β、IL-6及IL-13的浓度(P<0.05)。结论miR-145在TNF-α诱导的人关节软骨细胞中呈剂量依赖性下调。体外过表达miR-145抑制TNF-α诱导的人关节软骨细胞增殖,促进凋亡及炎症反应。

基质金属蛋白酶-11对骨肉瘤细胞上皮-间质转化的调控作用

目的观察基质金属蛋白酶-11(matrix metalloproteinase-11,MMP-11)对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、转移的影响,探讨其对骨肉瘤细胞上皮-间质转化的调控作用。方法对数生长期Saos-2细胞随机分为空白对照组(正常培养)、siRNA-MMP-11组(转染siRNA-MMP-11)、ovRNA-MMP-11组(转染ovRNA-MMP-11)。转染48 h采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞MMP-11 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测细胞E-cadherin、N-cadherin、MMP-11蛋白相对表达量,采用Transwell小室实验检测侵袭细胞数,采用划痕实验检测迁移细胞数;采用MTT法检测转染后培养72 h时3组细胞增殖率。结果转染48 h,ovRNA-MMP-11组MMP-11 mRNA和蛋白相对表达量(1.511±0.082、1.688±0.115)均高于空白对照组(1.339±0.211、1.024±0.066)、siRNA-MMP-11组(1.147±0.382、0.382±0.068)(P<0.05),空白对照组均高于siRNA-MMP-11组(P<0.05);ovRNA-MMP-11组迁移细胞数、侵袭细胞数[(35.528±9.241)、(352.807±63.715)个]均多于siRNA-MMP-11组[(21.330±1.627)、(174.265±50.242)个]、空白对照组[(12.330±0.577)、(335.421±140.261)个](P<0.05),siRNA-MMP-11组迁移细胞数多于空白对照组(P<0.05),侵袭细胞数少于空白对照组(P<0.05);ovRNA-MMP-11组细胞E-cadherin蛋白相对表达量(0.557±0.236)低于空白对照组(0.653±0.202)、siRNA-MMP-11组(0.905±0.324)(P<0.05),空白对照组低于siRNA-MMP-11组(P<0.05);3组细胞N-cadherin蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。转染后培养72 h,ovRNA-MMP-11组细胞增殖率[(84.1±11.3)%]高于空白对照组[(76.3±7.3)%]、siRNA-MMP-11组[(57.0±7.1)%](P<0.05),空白对照组高于siRNA-MMP-11组(P<0.05)。结论MMP-11通过抑制E-cadherin表达而参与调控骨肉瘤细胞上皮-间质转化,促进骨肉瘤细胞增殖、侵袭和转移。

空心螺钉捆绑带结合半髋关节置换治疗高龄粗隆间骨折的近期疗效

目的探讨空心螺钉捆绑带结合半髋关节置换治疗高龄股骨转子间骨折的近期疗效.方法回顾性分析2015年8月至2017年8月新疆自治区人民医院收治的采用后外侧手术入路,股骨双动头置换结合空心螺钉及捆绑带重建股骨大粗隆的方法,治疗股骨粗隆间骨折尤其是股骨外侧壁破坏较为严重的高龄患者.术后第1天、第1、3、6个月及1年复查C反应蛋白、红细胞沉降率、血常规以及X线片,观察术后X线片是否达到骨性愈合,捆绑带及空心螺钉是否松动,股骨柄假体有无松动及下沉,使用Harris髋关节评分(HHS)评价患者髋关节功能,利用直立行走试验(TUG)评估关节活动.结果15例患者术后1年的X线片均可见大转子骨折实现了骨性愈合,空心螺钉及捆绑带未见松动,骨水泥长柄稳定,未见明显松动及下沉,C反应蛋白、红细胞沉降率、血常规均正常,伤口局部无红肿,无感染征象.Harris评分:末次随访的HHS评分为(76±17)分.末次随访TUG为(17±9)s.术后2例患者出现大粗隆外侧活动后出现轻度疼痛,休息可缓解.末次随访,臀中肌外展肌力达到5级的共5例,4级共4例,3级的共3例.残留轻度跛行的3例,均为臀中肌外展肌力3级(2例)者.1例对手术疗效较不满意,跛行(1例),其余14例表示非常满意或比较满意.所有患者均于术后3 d内下地行走.结论采用股骨双动头置换,结合空心螺钉及捆绑带重建股骨大粗隆的方法,治疗高龄股骨转子间骨折,可获得早期初始稳定性,帮助患者早日下床活动,近期疗效较好,显著提高了患者的生活质量.