蜜蜂幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因的原核表达及多克隆抗体的制备

克隆蜜蜂幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因PLMP,构建其原核表达载体后进行重组蛋白的表达及纯化,接种公兔制备多克隆抗体,以期为研究幼虫芽胞杆菌快速检测方法奠定基础。用PCR方法扩增幼虫芽胞杆菌PLMP基因,扩增产物克隆至表达载体pGEX-4T-1并转化至E.coliBL21(DE3)感受态中。经不同的诱导时间、IPTG浓度诱导表达PLMP重组蛋白,经SDS-PAGE电泳切胶回收纯化目的蛋白。用目的蛋白对公兔进行4次免疫后,采集血清制备多抗。PCR扩增得到1 242bp的PLMP基因片段;构建原核表达载体pGEX-4T-1-PLMP,经终浓度0.8mmol/L IPTG、37℃诱导表达5h得到分子质量为70ku目的蛋白;用目的蛋白免疫公兔得到的多抗经间接ELISA检测效价达到1∶12 800,Western blot检测出现条带,证明所制备的多抗能够用于PLMP抗原的检测。研究结果构建了表达幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因PLMP的原核载体,获得了PLMP蛋白,制备了兔抗PLMP多克隆抗体,为建立幼虫芽胞杆菌快速检测方法奠定了基础。

影响种公牛精液品质的因素分析

【目的】优良的种公牛对牛群的遗传改良起着极其重要的作用,为提高种公牛精液的利用率、精液产量和质量,对影响种公牛的精液品质的因素进行分析。【方法】对可能影响种公牛精液品质的3个因素—品种、季节、年龄进行最小二乘分析,并进行多重比较。【结果】品种对种公牛精液品质有极显著影响(P<0.01),荷斯坦种公牛和利木赞种公牛精液品质较好,夏洛来种公牛与西门塔尔种公牛之间无显著差异;季节对种公牛精液品质有极显著影响(P<0.01),春季种公牛精液品质较好;年龄对公牛精液品质有极显著影响(P<0.01)。小于3岁的种公牛精液品质不高,3~10岁的种公牛精液品质较好。【结论】为提高种公牛精液品质提供理论依据,并为饲养管理和冻精生产提供依据。