布鲁氏菌S-2与S-19株提取的脂多糖在人布鲁氏菌病诊断抗原中的应用

目的使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)提取试剂盒提取布鲁氏菌S-19与S-2菌株中的脂多糖,检测这2种脂多糖的抗原性与诊断价值。方法用工业化生产的布鲁氏菌S-19与S-2菌株菌液用LPS纯化试剂盒通过裂解、纯化、洗涤的方法提取LPS,用提取的LPS进行斑点酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)与布鲁氏菌病阳性、正常阴性、疱疹病、血吸虫病患者血清反应,观察反应结果并判断诊断价值。结果斑点ELISA实验结果显示从S-19与S-2株中提取的LPS与布鲁氏菌病阳性血清能作出反应,反应颜色明显,诊断价值高。结论S-19与S-2菌株中提取的LPS能与布鲁氏菌病阳性血清反应,有较好的诊断价值。

布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a抗原的克隆表达及其抗原性鉴定

目的构建和原核表达布鲁氏菌膜蛋白Omp2a,并进行抗原性鉴定。方法将布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a基因连接到pET-30α原核表达载体上,转化到大肠埃希菌菌株BL21内。重组蛋白rOmp2a经IPTG诱导,亲和层析纯化后用SDS-PAGE凝胶电泳分离,确定目的蛋白的大小和表达丰度。通过Western blot与患者血清反应,确定重组rOmp2a的抗原性及诊断价值。结果成功构建布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a的原核表达系统,测序表明阅读框架正确。用IPTG可诱导高表达Omp2a,SDS-PAGE显示其分子质量单位为38.4 ku,且其表达蛋白以包含体形式存在。Western blot显示rOmp2a能被布鲁氏菌感染患者血清识别,而不与细粒棘球绦虫和单纯疱疹病毒感染者血清反应。结论大肠埃希菌原核表达系统可高效表达不可溶的rOmp2a蛋白,该蛋白具有反应原性,对布鲁氏菌感染患者具有潜在的诊断价值。