微RNA-30d-5p通过调控ABCB5对胰腺癌进程的影响

目的 探讨微RNA(miR)-30d-5p在胰腺癌(PAAD)中的潜在作用和调控机制。方法 选择2016年12月至2019年1月来新疆维吾尔自治区人民医院接受手术治疗的胰腺癌病人35例,术后即刻获得胰腺肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织,采用实时定量PCR检测miR-30d-5p在胰腺癌组织和细胞中的表达水平。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成、transwell和流式细胞术检测miR-30d-5p对细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。通过萤光素酶测定和蛋白质印迹法评估miR-30d-5p对ABCB5表达的调控作用。进一步构建裸鼠成瘤模型通过肿瘤质量和体积验证miR-30d-5p对肿瘤生长的影响。采用苏木精伊红染色验证肿瘤组织增殖情况。结果 与癌旁组织(1.03±0.17)及正常细胞(0.98±0.18)相比,胰腺癌组织(0.35±0.08)和细胞(0.63±0.08,0.23±0.07,0.48±0.07及0.31±0.05)中miR-30d-5p的表达显著降低(P<0.05);miR-30d-5p的过表达抑制了肿瘤细胞的活力、迁移和侵袭并促进了细胞凋亡且差异有统计学意义(P<0.05);抑制ABCB5的表达能抑制细胞活力、迁移和侵袭性并促进了胰腺癌的细胞凋亡且差异有统计学意义(P<0.05);体内实验证明miR-30d-5p组能够抑制肿瘤生长且差异有统计学意义(P<0.05)。结论MiR-30d-5p通过靶向ABCB5影响胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡,可能是PC病人潜在的预后生物标志物及靶向治疗的靶点依据。

肿瘤相关巨噬细胞外泌体调控KRAS信号通路影响胰腺癌细胞糖酵解功能

目的 探究肿瘤相关巨噬细胞外泌体对胰腺癌细胞糖酵解的影响及机制。方法 THP-1细胞诱导分化为M0型和M2型巨噬细胞,并提取二者分泌的外泌体(M0 exo和M2 exo)。将胰腺癌细胞CAPAN-2和ASPC-1分为PBS组、M0 exo组、M2 exo组、M2 exo+siKRAS组,分别与等体积PBS、10μg/mL M0 exo、10μg/mL M2 exo、转染KRAS siRNA+10μg/mL M2 exo共孵育。透射电镜观察外泌体结构;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;试剂盒检测葡萄糖摄取率和乳酸生成水平;Western blot检测外泌体标志物、KRAS蛋白表达和ERK1/2磷酸化水平。结果 THP-1诱导分化为表达标志蛋白Arg-1和IL-10的M2型巨噬细胞,M0 exo和M2 exo具有双层膜结构,粒径100 nm左右,表达外泌体标志蛋白CD9、CD81、TSG101。与PBS组比较,M2 exo组CAPAN-2和ASPC-1细胞增殖能力、葡萄糖摄取率力、乳酸生成水平显著增加(P<0.05),KRAS表达以及ERK1/2磷酸化水平显著增加(P<0.001)。与M2 exo组比较,M2 exo+siKRAS组CAPAN-2和ASPC-1细胞增殖能力、葡萄糖摄取率以及乳酸生成水平均显著下降(P<0.05)。结论 肿瘤相关巨噬细胞外泌体可通过激活KRAS信号通路促进胰腺癌细胞糖酵解。

微RNA-142-5p与E2F7基因的关系及其影响胰腺癌增殖、侵袭、转移的机制研究

目的探讨微RNA-142-5p(miRNA-142-5p)与E2F7基因的关系及其影响胰腺癌(PC)增殖、侵袭、转移的机制。方法选择2016年12月至2019年1月于新疆维吾尔自治区人民医院接受手术治疗的35例PC患者的癌及癌旁组织,采用实时定量PCR检测并比较PC患者癌及癌旁组织中miR-142-5p的表达情况,比较人PC细胞系(CFPAC-1、SW1990、Capan-1、PANC-1)和正常胰管上皮细胞系(HPDE)中miR-142-5p的表达情况。采用实时定量PCR检测并比较PC患者癌及癌旁组织中E2F7 mRNA的差异,比较Capan-1、PANC-1细胞E2F7 mRNA的差异,采用蛋白质印迹法比较Capan-1、PANC-1细胞中E2F7蛋白的差异。通过Starbase数据库预测miR-142-5p与E2F7基因的结合位点,同时设置转染miR-142-5p模拟物的miR-142-5p mimics组和转染无意义序列的NC组,两组分别共转染E2F7基因野生型(wt)及突变体(mut),采用双萤光素酶实验验证miR-142-5p与E2F7基因的靶向关系。将Capan-1细胞设为NC组、si-E2F7组、E2F7组及miR-142-5p mimics+E2F7组,采用CCK-8、流式细胞仪、划痕实验、Transwell实验观察各组细胞活力、凋亡、迁移、侵袭情况。选取20只雄性BALB/c裸鼠(4~6周龄)用于建立裸鼠异种移植模型,采用随机数字表法将其分为NC裸鼠组、si-E2F7裸鼠组、E2F7裸鼠组及miR-142-5p mimics+E2F7裸鼠组,每组5只。将5×10^(6)个相应处理的PC细胞与100μl的人工基膜混合后皮下注射于裸鼠前腿下方的皮肤,于注射后第30天处死四组动物,比较四组肿瘤体积及重量,采用苏木精-伊红染色观察肿瘤转移能力。结果PC患者癌组织miR-142-5p表达低于癌旁组织,E2F7 mRNA表达高于癌旁组织,CFPAC-1、SW1990、Capan-1、PANC-1细胞miR-142-5p表达低于HPDE细胞(P<0.05)。Capan-1、PANC-1细胞E2F7 mRNA及其蛋白表达高于HPDE细胞(P<0.05)。Starbase数据库分析结果显示,miR-142-5p与E2F7基因的3’非翻译区存在互补。双萤光素酶报告基因结果显示,共转染E2F7-wt后,miR-142-5p mimics组萤光素酶活性低于NC组(P<0.05);共转染E2F7-mut后,miR-142-5p mimics组萤光素酶活性与NC组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。E2F7组E2F7 mRNA及其蛋白表达、细胞活力、划痕愈合面积、相对侵袭细胞数均高于NC组,细胞凋亡率低于NC组(P<0.05)。miR-142-5p mimics+E2F7组E2F7mRNA及其蛋白表达、细胞活力、划痕愈合面积、相对侵袭细胞数均低于E2F7组,细胞凋亡率高于E2F7组(P<0.05)。E2F7裸鼠组肿瘤体积、重量高于NC裸鼠组,miR-142-5p mimics+E2F7裸鼠组肿瘤体积、重量低于E2F7裸鼠组(P<0.05)。苏木精-伊红染色显示,E2F7裸鼠组肿瘤具有较强的转移能力,而miR-142-5p mimics+E2F7裸鼠组肿瘤的转移能力较差。结论miR-142-5p可能通过靶向E2F7基因影响PC细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡。

肠内延伸型胆管支架对胆管狭窄治疗效果及并发症探究

探究良性胆管狭窄治疗中肠内延伸胆管支架的临床应用效果及临床并发症影响。方法 选择2019年11月~2022年8月研究时间段内入院行手术治疗良性胆管狭窄患者120例未研究对象,行回顾性治疗研究,以患者术中放置支架类型分组,对照组(n62)、研究组(n58)。对照组术中置入传统支架,研究组术中置入肠内延伸支架。比较患者术后胆管内支架通畅维持时间、术后住院时间,胆管狭窄缓解率,术后并发症发生率,支架不良预后发生率,术后复发率组间差异。结果 (1)研究组术后胆管内支架通畅时间(132.65±28.95)d高于对照组,且研究组术后6月内复发率(5.17%)、术后支架不良预后发生率(0.00%)均低于对照组,差异显著,P<0.05。(2)两组术后住院时间、术后胆管狭窄缓解率及术后并发症发生率比较无统计学差异,P>0.05。结论 良性胆管狭窄手术治疗中采用肠内延伸型胆管支架可有效延长患者术后胆管通畅时间,降低术后胆管狭窄复发及支架移位、脱位风险,术后康复时间、治疗效果及安全性较传统支架治疗相当,可酌情选择支架类型实施治疗。

circ-MTHFD1L促进胰腺导管腺癌进展的作用机制

目的 探讨circ-MTHFD1L在胰腺导管腺癌(PDAC)进展中的作用,并分析其与miR-217与E2F3的相互调控关系,为PDAC的标志物选择和靶向疗法提供依据。方法 利用Arraystar Human circRNAs微阵列分析法分析20例PDAC组织和癌旁组织中差异表达的circRNAs。通过qRT-PCR检测circ-MTHFD1L在PDAC组织样本和癌旁组织样本中的表达水平。TCGA数据库的数据用于分析PDAC患者的总体生存数据。采用MTT细胞增殖实验、流式细胞术凋亡实验、Transwell迁移侵袭实验研究不同转染组的细胞增殖、凋亡和侵袭。在体内裸鼠的肿瘤形成试验中研究肿瘤发展的速度。此外,采用双荧光素酶报告基因检测和蛋白质印迹检测证明了circ-MTHFD1L与miR-217和E2F3之间的靶向关系。结果 通过微阵列数据分析筛选circ-MTHFD1L在肿瘤组织中的差异最为显著作为进一步研究的目标分子。与癌旁组织相比,circ-MTHFD1L在PDAC组织中的表达水平显著升高(P<0.05)。当circ-MTHFD1L被敲低时,PDAC细胞的增殖、迁移和侵袭能力将被抑制,细胞凋亡率显著升高且差异均具有统计学意义(P<0.05)。同时,在胰腺癌细胞PANC-1中,过表达miR-217或沉默circ-MTHFD1L,E2F3蛋白表达水平降低(P<0.05),而且通过双荧光素酶报告基因实验验证了CIRC-MTHFD1L与miR-217和E2F3之间的靶向关系。结论 Circ-MTHFD1L可通过抑制miR-217表达水平并增强E2F3蛋白表达水平促进PDAC细胞的进展。

维吾尔族高脂血症性重症急性胰腺炎的临床特点及血浆置换治疗效果

目的 探讨新疆维吾尔族高脂血症性重症急性胰腺炎患者的临床特点及血浆置换治疗效果.方法 回顾性收集2007年8月至2012年8月确诊为高脂血症性重症急性胰腺炎的91例患者的临床特点及治疗效果.其中开展血浆置换治疗前仅接受内科治疗的维吾尔族患者（对照组）50例,开展血浆置换后在内科治疗的基础上接受血浆置换治疗的维吾尔族患者41例（治疗组）.收集同期收治的72例汉族高脂血症性重症急性胰腺炎患者的临床资料,并与维吾尔族高脂血症性重症急性胰腺炎患者进行对比分析.分别采用t检验、x2检验、对研究数据进行统计学分析.结果 治疗组及对照组患者性别、年龄、入院时APACHEⅡ评分、体重指数及血脂水平无统计学差异.治疗组41例通过常规内科及血浆置换治疗后32例患者重症急性胰腺炎症状体征明显好转,余患者治疗无效后死亡9例;对照组50例中死亡22例,好转28例,治疗组病死率低于对照组（x2=10.824,P=0.001）.此外治疗组总住院天数为（17 ±16）d,短于对照组的（28±20）d（=2.851,P=0.005）.治疗组血浆置换前血浆甘油三酯和总胆固醇水平分别为（58±39） mmol/L及（24±8）mmol/L,治疗结束后分别降至（10±10）mmol/L及（6±5）mmol/L.血浆置换后患者血浆甘油三酯及总胆固醇水平下降（=8.300,P=0.000;t=13.237,P=0.000）.死亡病例APACHEⅡ评分为18±2,高于未死亡病例的11 ±3（t =0.570,P=0.000）;死亡患者入院至血浆置换的间隔时间为（49±9）h,明显长于未死亡患者[（38 ±8）h,t=3.549,p=0.040];治疗组死亡病例血浆置换前甘油三酯水平为（37±15） mmol/L,低于生存患者[（46±16）mmol/L,t=2.386,P =0.010].对照组血浆甘油三酯及总胆固醇水平亦下降（t=3.484,P=0.001;=4.086,P=0.000）,但下降幅度小于治疗组.我们将治疗组及对照组91例维吾尔族患者与同期72例汉族患者对比,维吾尔族患者平均血浆甘油三酯（t=2.083,P=0.039）及胆固醇水平高于汉族患者（=2.535,P =0.012）,而平均年龄低于汉族人群（t=3.373,P=0.010）.结论 维吾尔族的高脂血症性重症急性胰腺炎患者具有血浆甘油三酯及胆固醇水平高、年龄小的特点.血浆置换方法可更有效治疗高脂血症性重症急性胰腺炎患者,患者预后与APACHEⅡ评分严重程度、血浆甘油三酯水平及入院至血浆置换治疗的间隔时间相关.