广西反季节稻田小龙虾综合种养技术要点

小龙虾是我国稻渔综合种养主要的水产品种之一,近年来养殖面积持续增长。中国小龙虾产业发展报告(2023)表明,小龙虾整个产业链总产值达4,580亿元,同比增长8.48%,其中,小龙虾养殖业产值960亿元,同比增长16.58%。2022年,全国小龙虾养殖面积2,800万亩,总产量289.07万t,同比分别增长7.69%和9.76%,继续保持较快增长。

广西狂犬病病毒L基因聚合酶活性部位的多态性分析

对广西流行狂犬病病毒的L基因聚合酶活性部位进行克隆和测序，并与国外固定毒株和类狂犬病毒株进行比较分析。结果显示，广西流行毒株之间的核苷酸和推定的氨基酸同源性较高，分别为88、7％～99．8％和96．5％～100％，与国外固定毒株的核苷酸和推定的氨基酸同源性分别为84．8％～87．5％和94．5％～99.0％，与类狂犬病病毒株的核苷酸和推定的氨基酸同源性分别为75．5％～79．2％和93．5％～97．0％；通过比较推定的氨基酸序列发现，第660位为广西Ⅱ群毒株的特异性变异1660V，第771位为广西Ⅰ群毒株的特异性变异S771A，第745位点广西毒株全部为精氨酸，而国外参考毒株为丝氨酸、亮氨酸或组氨酸；4个基序高度保守，基序A保持不变，基序B、C、D只有少数氨基酸发生变异，基序C中的核心序列GDNQ在各毒株中都不变。

狂犬病病毒SYBR-GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

狂犬病病毒为不分节段单链负股的RNA病毒,属弹状病毒科狂犬病病毒属。世界上几乎所有国家都有狂犬病发生,狂犬病病毒能够使所有温血动物发病致死,死亡率高达100%。本研究根据GenBank中的狂犬病病毒M基因序列,选择保守区域设计引物,通过对SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR反应条件进行优化,建立了用于检测狂犬病病毒的SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR方法。结果显示,建立的狂犬病病毒实时荧光定量PCR方法,具有特异性强、灵敏度高、重复性好的优点,是开展狂犬病的临床检测的有力工具。

广西狂犬病分子流行病学的研究

自2000年起从广西各地采集1563份犬脑、4份发病牛脑、1份发病猪脑和1份猫脑组织。通过对这些动物脑组织进行PCR检测及用小白鼠脑内接种试验分离出42株狂犬病毒株，并对N基因3’端455个核苷酸片段进行测序分析。根据核苷酸同源性及遗传进化树分析结果，广西狂犬病流行毒株可分成4个群。Ⅰ群有GX01、GX08、GX09、GX014、GX019、GX091、GX123、GX173、GX174、GX195、GX260、GX443、GX452、GXSIO、GX520、GXBS、GXSL、GXGG、GXLA、GXHX、GXGL、GXNniu、GXWXp共23株，它们的核苷酸同源性在97．6％-100％之间；Ⅱ群有Gx074、Gx219、GX304、GX441、GX442、GX496、GX0510、GXBX、GXBM、CXQZ共10株，它们的核苷酸同源性在98．5％-100％之间；Ⅲ群只有GXN119；Ⅳ群有G）（506、GXS08、GXS09、GX120、GXB03、GXeat、GX201、GX102共8株，它们的核苷酸同源性在99．1％-99．6％之间。进一步氨基酸变异分析得知，与兽用疫苗株E1LA比较，所有42个毒株的第58位氨基酸由P变为S，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ群的34株共同发生了H26Y、C40S、S61N、V95L、G106D和P135S位点的变异，Ⅰ群发生了T90N和E110D、Ⅱ群发生了T42S的群特异性变异。氨基酸分析结果与核苷酸同源性、遗传进化树分析结果一致。各群毒株呈现明显的地域分布特征，Ⅰ群主要分布在桂东地区，Ⅱ群主要分布在桂西地区。Ⅳ群主要分布在桂南地区。

中华鳖、黄沙鳖及黄沙鳖F_1代生长性状比较分析

【目的】比较分析中华鳖、黄沙鳖及黄沙鳖F1代群体的生长性状,以期获得黄沙鳖的性状评价指标,为黄沙鳖优良生长性状的选育提供参考。【方法】中华鳖、黄沙鳖和黄沙鳖F1代种群在相同条件下饲养,养殖1年和2年时分别测量3个鳖群的体重、体长、体宽、裙边长和裙边宽,并进行各性状指标的优劣分析。【结果】中华鳖、黄沙鳖和黄沙鳖F1代种群在相同条件下饲养1年后,3个鳖群的平均体重差异不显著(P>0.05),但在体长、体宽、裙边长和裙边宽指标方面,黄沙鳖F1代极显著优于中华鳖(P<0.01);饲养2年后,黄沙鳖F1代比中华鳖更具生长优势,黄沙鳖F1代与黄沙鳖的生长性状差异不显著(P>0.05),但各项生长指标均有所提高。【结论】对黄沙鳖的后代不断进行筛选,可获得性状优良的黄沙鳖群体。

斜带石斑鱼MyD88基因的原核表达及蛋白纯化

Toll样受体（Toll-like receptor, TLR）是一类重要的模式识别受体,其胞外结构域可识别特定的病原相关分子模式（Pathogen-associated molecular patterns, PAMPs）,胞内的TIR （Toll-like/IL-1 receptor）结构域则参与启动胞内信号转导,诱导细胞产生活性氧中间体（Reactive oxygen intermediate）、活性氮中间体（Reactive nitrogen intermedi-ate）和促炎症因子,在感染早期发挥重要作用[1]。在哺乳动物中,髓样分化因子88（Myeloid differentiation factor 88, MyD88）是TLR信号通路的关键接头分子,其C端TIR域与TLR的TIR相互结合后,通过募集IL-1受体相关激酶（Interleukin-1 receptor-associated kinase, IRAK）IRAK4、IRAK1和IRAK2,激活NF-κB和MAPK,进而诱导IL-1、TNF和IFN等细胞因子表达[2-4]。

广西狂犬病流行病学

狂犬病在全世界范围内流行,据WHO报告,约有90多个国家流行此病,欧美等发达国家狂犬病发病率较低,南美洲的人狂犬病主要由蝙蝠传播,而以亚洲、非洲最为严重.……

“两广二号”家蚕抗病毒基因Bmlipase-1和BmSP-2克隆与原核表达

本研究以优良杂交品种"两广二号"家蚕为试材,克隆了该杂交品种家蚕两个抗家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因:脂肪酶基因Bmlipase-1和丝氨酸蛋白酶基因BmSP-2,测序并分别与不同品种蚕的同源基因序列进行比较。结果显示,"两广二号"家蚕Bmlipase-1基因ORF长度为885bp,编码294个氨基酸,BmSP-2扩增长度为855bp,编码284个氨基酸;它们的核苷酸和推导氨基酸序列同源性皆达92%以上,Bmlipase-1更保守,同源性大于99%";两广二号"家蚕的Bmlipase-1基因脂肪酶活化部位和BmSP-2基因酶催化三联体位点的氨基酸残基与不同品种蚕的完全相同。以上结果说明这两个抗病毒基因在蚕的遗传进化过程中高度保守,提示其可能在机体消化或者免疫防御方面起着重要生理作用。将这两个抗病毒基因在大肠杆菌BL21中进行融合表达,获得的融合Bmlipase-1和BmSP-2蛋白分子量分别为47kD和42kD左右。

小龙虾苗种分级培育关键技术

小龙虾是我国养殖面积最为广泛的甲壳类生物之一,养殖面积和产量持续保持快速增长。中国小龙虾产业发展报告(2022)表明,全国小龙虾产业总产值4,221.95亿元,同比增加22.43.%,其中养殖业产值823.44亿元,同比增长10.03%,成为了赋能乡村振兴、壮大区域经济的重要产业。目前,我国的小龙虾养殖区域从湖北、安徽、湖南、江苏、江西等主产区逐渐扩大到全国范围。非主产区的本地化优质苗种供应不足仍是制约当地小龙虾养殖产业发展的主要瓶颈。本文根据团队前期研究工作和生产实践经验,分别从培育条件、培育前准备和培育方法等方面阐述小龙虾苗种分级培育的技术要求,供参考借鉴。

提高广西拟水龟产卵量的技术措施

分析介绍广西拟水龟亲龟池建设、亲龟选择和放养、投喂、水质调控、日常管理、延长光照、越冬管理等提高广西拟水龟产卵量的技术要点。

晒田环境胁迫下克氏原螯虾卵巢的转录组学分析

【目的】运用转录组测序技术探究不同晒田环境胁迫下克氏原螯虾卵巢的基因表达变化,筛选出与其卵巢发育相关的候选基因及信号通路,为研究晒田胁迫方式促进克氏原螯虾卵巢发育的作用机制提供理论依据。【方法】以雌性克氏原螯虾为研究对象,分别在晒田环境胁迫0 d(CK)、3 d(T1)、7 d(T2)和10 d(T3)时采样,构建卵巢cDNA文库进行转录组测序,对差异表达基因(DEGs)进行GO功能注释及KEGG信号通路富集分析。【结果】共获得86377个Unigenes,在Nr、KOG/COG、Swiss-Prot和KEGG库中成功注释到22712个Unigenes;获得1115个胁迫组(T1、T2和T3)与CK的DEGs。KEGG信号通路富集分析结果表明,DEGs富集的PI3K-Akt信号通路、GnRH信号通路和雌激素信号通路与卵巢发育相关。实时荧光定量PCR验证结果表明,3个DEGs的表达模式与转录组分析结果基本一致,证明转录组数据准确可靠。筛选得到B2M、TUBA1B、MT-CYB、MT-ND1、MT-ND2、MT-ND4、DSX、Pck2、PIM3和serine prote-ase nudel-like等10个与卵巢发育相关的DEGs,并对其表达量进行分析,结果表明各基因在晒田胁迫期间均可调控卵巢发育。【结论】B2M、TUBA1B、MT-CYB、MT-ND1、MT-ND2、MT-ND4、DSX、Pck2、PIM3和serine protease nudel-like等10个DEGs及PI3K-Akt信号通路、GnRH信号通路、雌激素信号通路等3个富集通路在晒田胁迫期间参与卵巢发育调控。

广西流行狂犬病毒糖蛋白基因的遗传性分析

【目的】通过测定广西流行狂犬病毒糖蛋白(G)基因的全序列,了解广西狂犬病的流行趋势和遗传变异规律,为制定广西狂犬病的防控策略提供科学依据。【方法】2000年10月～2007年10月,从广西14个市采集1569份动物脑组织,经RT-PCR检测及小白鼠脑内接种试验分离狂犬病毒,然后对狂犬病毒G基因进行测序分析。【结果】从广西各地共分离获得26株狂犬病毒野毒株,其中犬23份,牛、猪、猫各1份。狂犬病毒G基因核苷酸全长2067bp,开放阅读框1575bp,编码524个氨基酸。根据G基因核苷酸同源性及遗传进化树分析结果,可将广西流行的狂犬病毒株分成3个群,Ⅰ群15株,其核苷酸同源性为97.7%～99.9%;Ⅱ群10株,其核苷酸同源性为98.0%～99.9%;Ⅲ群只有1株。通过氨基酸变异分析,了解了26株野毒株G基因编码蛋白的氨基酸突变位点。【结论】广西存在3个群的狂犬病毒野毒株,且以Ⅰ群和Ⅱ群流行为主,3个群的氨基酸变异均呈现明显的特异性。

不同饵料对克氏原螯虾亲虾繁育性能的影响

开展了鱼肉(YR)、猪肝(ZG)、黄豆(HD)和饲料(SL)四种不同饵料对克氏原螯虾养殖水体、抱卵率及卵巢发育指数的试验研究,比较分析了在YR中添加dl-α-生育酚乙酸酯(0.02%)或亚硒酸钠维生素E(0.02%)对克氏原螯虾抱卵率及抱卵时间影响。试验结果显示:YR、ZG组的氨氮值显著高于HD、SL组,溶解氧显著低于HD、SL组(P<0.05);YR组卵巢发育指数显著高于HD、SL组(P<0.05);YR组抱卵率最高(58.33%),SL组抱卵率最低(11.11%),YR和ZG组的抱卵率显著高于HD和SL组(P<0.05);YR中添加dl-α-生育酚乙酸酯或亚硒酸钠维生素E和对照组相比显著提高抱卵率并且短抱卵时间(P<0.05)。YR添加dl-α-生育酚乙酸酯(0.02%)或亚硒酸钠维生素E(0.02%),能促进克氏原螯虾雌虾的卵巢生殖发育,提高抱卵率,缩短抱卵时间。

黄喉拟水龟白眼病病原菌分离鉴定及药敏试验

【目的】明确黄喉拟水龟白眼病的病原菌及其药敏特性,为该病的防控提供参考依据。【方法】对患白眼病的黄喉拟水龟进行无菌解剖、划线培养、分离筛选,对分离获得的菌株进行培养特征、生理生化特性鉴定、16S r DNA序列分析及同源性比对分析,通过动物致病性试验鉴定致病性,并采用药敏试验检验其耐药性。【结果】从患白眼病黄喉拟水龟稚龟肝脏、肺脏及脾脏中分离获得的优势菌株对小白鼠和黄喉拟水龟均有强的致病性,为兼性厌氧、产酸、产气、发酵型、无运动能力的革兰氏阴性杆菌,其16S r DNA序列(Gen Bank登录号KU855372)与肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)的同源性达99.1%。分离菌株对恩诺沙星、头孢噻吩、头孢噻肟、氧氟沙星等高度敏感,但对链霉素、新霉素、青霉素、卡那霉素、四环素、克林霉素、强力霉素、阿莫西林、复方新诺明等已产生耐药性。【结论】肺炎克雷伯菌是引起黄喉拟水龟白眼病的主要病原菌,生产中可选用恩诺沙星、氧氟沙星等沙星类或头孢噻吩、头孢噻肟等头孢类药物进行防治。

来宾地区雌性克氏原螯虾卵巢发育分析

为探究克氏原螯虾在来宾地区生长繁殖周期,于2019年5—8月,采用石蜡包埋法,对当年4月下旬放入的20 g左右雌虾的卵巢进行切片研究。结果表明,在5月中下旬雌虾卵巢已经开始发育,6月卵巢发育缓慢,7月其发育呈现不同步性,7—8月卵巢发育迅速,8月下旬已经出现大量成熟卵母细胞,9月中旬开始大规模抱卵,来宾地区4月放养的种虾,在9月便可达到性成熟并进行繁殖。

开口饵料对泥鳅苗种存活率的影响及其生长曲线拟合分析

【目的】确定最适生长曲线拟合模型及筛选出最适开口饵料,为泥鳅人工育苗提供科学依据。【方法】分别以丰年虫、轮虫、水蚯蚓、蛋黄、豆浆和鳗鱼料为开口饵料,培育泥鳅苗种20 d后比较其对泥鳅苗种存活率及生长性能的影响,并采用Logistic、Gompertz和Bertalanffy 3种非线性模型对培育20 d泥鳅苗种的体长数据进行生长曲线拟合与回归分析。【结果】以不同开口饵料培育20 d后,泥鳅苗种的存活率排序为：丰年虫组〉轮虫组〉水蚯蚓组〉蛋黄组〉鳗鱼料组〉豆浆组,各处理组间存在显著差异（P〈0.05）。其中,以丰年虫组的存活率最高,为52.7%,豆浆组的最低,仅为10.3%。在生长性能方面,也以丰年虫组泥鳅苗种的生长速率最快,豆浆组的生长速率最慢。Logistic、Gompertz和Bertalanffy模型均能较好地拟合泥鳅苗种的生长曲线,但Logistic模型拟合获得的生长拐点日龄比Gompertz和Bertallanffy模型的拟合结果略晚,且从拟合度（R2）来看,Bertallanffy模型的R2更接近于1.000,即Bertallanffy模型更适合用于拟合泥鳅苗种的生长曲线。【结论】以丰年虫为开口饵料能够显著提高泥鳅苗种培育存活率和生长速度,若兼顾养殖成本,则以轮虫更适合作为泥鳅苗种的开口饵料。Bertallanffy模型更适合用于拟合泥鳅苗种的生长曲线,拟合得出的泥鳅苗种生长拐点在7~10日龄。

凡纳滨对虾WAP基因重组表达及抗病功能分析

【目的】针对凡纳滨对虾白便病的危害现状,克隆其WAP基因并分析其组织表达特性及抗病功能,为凡纳滨对虾抗病药物开发提供参考依据。【方法】设计WAP基因特异性引物,用RT-PCR检测WAP基因在凡纳滨对虾血细胞、眼柄、鳃、肝胰腺、心脏、胃、肌肉、神经、肠、后盲囊和表皮等11种组织的表达分布情况;采用实时荧光定量PCR检测患白便病凡纳滨对虾鳃和肠道组织的WAP基因表达量;重组表达WAP蛋白,使用ELISA分析其与细菌多糖LPS(脂多糖)、PGN(肽聚糖)和LTA(脂磷壁酸)的结合能力。【结果】WAP基因在11个凡纳滨对虾组织均有表达,其中,以在血细胞中的表达量最高,在表皮、眼柄和肝胰腺的表达量表达较低;WAP基因在感染白便病凡纳滨对虾鳃和肠道组织的表达量显著高于健康凡纳滨对虾(P<0.05),分别为健康凡纳滨对虾的5.9258和1.5147倍;WAP融合蛋白与细菌多糖LPS、PGN和LTA具有直接结合作用,细菌多糖的结合能力表现为PGN>LPS>LTA。【结论】WAP基因与凡纳滨对虾抗病免疫功能密切相关,WAP融合蛋白在开发凡纳滨对虾抗白便病药物方面具有潜在应用价值。

卵形鲳鲹组织蛋白酶L基因的克隆及其表达分析

【目的】明确卵形鲳鲹组织蛋白酶L基因(Tro Cat L)的遗传进化规律及其组织表达水平,为研究Cat L生物学功能及其对病原的抗病机理提供理论依据。【方法】应用RT-PCR和RACE技术克隆Tro Cat L基因全长c DNA,采用生物信息学方法对其序列特征进行分析;并以实时荧光定量PCR(q PCR)检测Tro Cat L基因在健康组织中的表达情况及其表达与溶藻弧菌感染的关联性。【结果】Tro Cat L基因全长c DNA为1492 bp(Gen Bank登录号MH036350),包括开放阅读框(ORF)1011 bp、5'端非翻译区(5'-UTR)120 bp和3'端非翻译区(3'-UTR)361 bp。Tro Cat L基因编码336个氨基酸残基,其理论等电点(p I)5.7,预测分子质量37.93 k D,且存在Cat L特有的保守结构域(ERFNIN、GNFD和GCXGG基序)及由139Cys、279His和303Asn组成的半胱氨酸蛋白酶保守活性位点。Tro Cat L氨基酸序列与其他鱼类Cat L氨基酸序列的同源性高达83.9%~95.2%,尤其与鲈形目鰤鱼的亲缘关系最近。Tro Cat L基因m RNA在健康卵形鲳鲹组织中均有表达,以在肝脏中的表达最高,在脑组织中的表达最低。经溶藻弧菌感染后,Tro Cat L基因m RNA在肝脏、脾脏和血液中的表达水平均上调,肝脏和脾脏中的Tro Cat L基因m RNA在攻毒后24 h达峰值,血液中的Tro Cat L基因m RNA在感染后12 h达最高值。【结论】Tro Cat L蛋白结构域及其催化活性位点在遗传进化过程中较保守,通过参与机体的免疫应答反应,在卵形鲳鲹抵御细菌或病毒侵染的过程中扮演重要角色。

广西不同地区克氏原螯虾群体遗传多样性微卫星分析

【目的】了解当前广西克氏原螯虾(Procambarus clarkii)群体的遗传背景,为其人工养殖及种质资源保护提供参考依据。【方法】选取广西5个地区(南宁、大塘、融水、柳州和来宾)的克氏原螯虾群体作为研究对象,利用8对微卫星引物对各克氏原螯虾群体基因组DNA进行PCR检测,然后通过PopGene32和NTSYSpc 2.1等在线软件分析广西克氏原螯虾群体的遗传多样性。【结果】南宁(NN)、大塘(DT)、融水(RS)、柳州(LZ)和来宾(LB)5个克氏原螯虾群体的平均有效等位基因数(Ne)为2.5142~3.0574,平均期望杂合度(He)为0.5708~0.6489,平均多态信息含量(PIC)为0.4899~0.5843,存在中度至高度的遗传多样性,其中南宁群体和大塘群体的遗传多样性略低于融水群体、柳州群体和来宾群体。5个克氏原螯虾群体的平衡偏离指数(D)均为负值,且发生一定程度的Hardy-Weinberg平衡偏离,杂合子缺失现象普遍存在。5个克氏原螯虾群体间的基因流(Nm)为2.3898~6.0284,遗传分化指数(Fst)为0.0398~0.0947,表明各群体间存在广泛的基因交流,仅存在低度至中度的遗传分化;各克氏原螯虾群体间的遗传相似系数和遗传距离分别为0.6861~0.8583和0.1528~0.3768,其中,遗传距离趋势与Fst趋势一致,而遗传相似系数与Nm趋势一致,均表明柳州群体与来宾群体具有高度的相似性,遗传距离较近。UPGMA聚类分析结果也显示,南宁群体和大塘群体聚类为一支,而柳州群体先与来宾群体聚类再与融水群体聚类成另一支。【结论】广西不同地区克氏原螯虾群体具有一定的遗传多样性,但其杂合子缺失现象普遍存在,应通过适当引种及加强不同地区群体间的遗传交流,保护好克氏原螯虾的优良种质资源。

黄喉拟水龟肺气肿病病原菌的分离鉴定及其药敏特性分析

【目的】明确黄喉拟水龟肺气肿病的病原菌及其药敏特性,为该病的临床诊断与治疗提供科学依据。【方法】通过微生物常规分离、人工感染试验、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析等方法分离鉴定黄喉拟水龟肺气肿病的病原菌,测定该病原菌对黄喉拟水龟的半致死剂量(LD50),并采用K-B药敏纸片扩散法测定其药敏特性。【结果】从患肺气肿病黄喉拟水龟的肺脏组织中分离获得一株优势菌株(命名为GXNN1),其生理生化特性与肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)完全一致;经腹腔人工注射感染,黄喉拟水龟表现出与自然发病相同的症状,腹腔内有少量血水,肠壁充血,肺脏充血膨胀;菌株GXNN1对黄喉拟水龟的LD50为0.63×103CFU/g。菌株GXNN1与肺炎克雷伯氏菌的16S rDNA序列同源性为99.4%～99.9%,从基于16S rDNA序列同源性构建的系统发育进化树也发现,菌株GXNN1与肺炎克雷伯氏菌聚为一支。综合其形态特征、生理生化特性、人工感染试验及16S rDNA序列分析结果,可确定黄喉拟水龟肺气肿病的致病菌(菌株GXNN1)为肺炎克雷伯氏菌。药敏试验结果表明,菌株GXNN1对先锋必和舒普深敏感,对氨苄青霉素、氯霉素、多西环素、庆大霉素、诺氟沙星、阿莫西林等15种药物已产生耐药性(不敏感)。【结论】肺炎克雷伯氏菌是引起黄喉拟水龟肺气肿病的主要病原菌,LD50为0.63×103CFU/g,生产中可使用舒普深和先锋必等药物进行治疗。