脱氢卡维丁对CCl_(4)诱导的肝纤维化大鼠的改善作用

目的探讨脱氢卡维丁对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_(4))诱导的肝纤维化大鼠的改善作用及可能机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、水飞蓟宾组(30 mg/kg)、脱氢卡维丁组(50 mg/kg),每组6只。除正常组外,其他各组采用30%CCl_(4)橄榄油溶液(1 mL/kg)腹腔注射复制肝纤维化模型,每周2次,连续14周。各给药组于造模第13、14周每天按设定剂量灌胃相应药物进行干预。正常组与模型组大鼠灌胃等体积的生理盐水。末次给药12 h后,测定各组大鼠肝脾指数;采用HE染色与Masson染色观察肝组织病理学变化,比色法检测大鼠血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量;采用ELISA检测血清透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前胶原蛋白(typeⅢprocollagen,PCⅢ)及Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ,ColⅣ)的表达水平;Western blot法检测肝组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠肝脾指数显著增加(P<0.001),肝组织纤维化进展明显,胶原容积分数明显增加(P<0.001),血清中ALT、AST、MDA、LN、HA、PCⅢ和ColⅣ水平显著升高(P<0.001),SOD明显下降(P<0.001);肝组织TGF-β1、α-SMA及N-cadherin蛋白表达水平明显上升(P<0.001),E-cadherin蛋白表达明显下降(P<0.001)。与模型组比较,脱氢卡维丁组大鼠肝脾指数明显降低(P<0.001),肝组织病理学损伤和纤维增生有效改善,胶原容积分数明显下降(P<0.001),血清ALT、AST、MDA含量显著降低(P<0.001),血清SOD的表达水平明显升高(P<0.001),LN、HA、PCⅢ、ColⅣ的表达明显下调(P<0.05,P<0.001),肝组织TGF-β1、α-SMA和N-cadherin蛋白表达显著下降(P<0.001),而E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.001)。结论脱氢卡维丁对肝纤维化大鼠具有良好的改善作用,其机制可能与调节氧化应激反应、下调N-cadherin、α-SMA、TGF-β1蛋白表达及上调E-cadherin蛋白表达有关。

白花蛇舌草多糖调节CXCL12/CXCR4轴对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨白花蛇舌草多糖(Hedyotis diffusa Willd.Polysaccharide,HDP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及对CXCL12/CXCR4轴的调控机制。方法将乳腺癌细胞分为对照组,CXCL12/CXCR4抑制剂组(AMD 3100组),HDP低、中、高剂量组(HDP-L组、HDP-M组、HDP-H组),HDP高剂量+CXCL12组(HDP-H+CXCL12组);通过CCK-8检测细胞增殖情况;划痕实验、Transwell实验分别测定细胞的迁移和侵袭能力;Western blot分析细胞中上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、CXCL12、CXCR4蛋白的表达;建立BALB/c-nu雌性裸鼠MDA-MB-231异种移植瘤模型并观察各组肿瘤生长情况,采用HE染色观察裸鼠移植瘤细胞的形态学特征。结果与对照组相比,AMD 3100组和HDP各剂量组细胞增殖活性、迁移和侵袭数以及Vimentin、CXCL12、CXCR4蛋白表达显著抑制(P<0.05,P<0.01),而E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与HDP-H组相比,HDP-H+CXCL12组细胞的增殖活力、迁移和侵袭数以及Vimentin、CXCL12、CXCR4蛋白表达水平明显升高(P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平被显著抑制(P<0.01)。此外,动物实验表明,与模型组相比,AMD 3100组和HDP各剂量组的肿瘤重量明显降低(P<0.05,P<0.01);与HDP-H组相比,HDP-H+CXCL12组裸鼠肿瘤重量明显增加(P<0.01);HE染色显示,AMD 3100组和HDP各干预组肿瘤组织坏死与凋亡细胞增多。结论HDP可以通过抑制CXCL12/CXCR4轴进而抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭。

壮药白花蛇舌草水提物对MDA-MB-231乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制及免疫调节作用研究

目的观察白花蛇舌草水提物对MDA-MB-231乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制及免疫调节作用,并探讨其作用机制。方法取6只正常BALB/c-nu雌性裸鼠作为正常组;取30只BALB/c-nu雌性裸鼠复制MDA-MB-231乳腺癌移植瘤模型,将造模成功裸鼠随机分为模型组、环磷酰胺组及白花蛇舌草水提物低、高剂量组,每组6只。环磷酰胺组给予环磷酰胺25 mg/kg腹腔注射,每7 d注射1次;白花蛇舌草水提物低、高剂量组分别按照1500 mg/(kg·d)、6000 mg/(kg·d)灌胃白花蛇舌草水提物溶液,正常组和模型组灌胃等体积灭菌注射用水,均1次/d。各组均连续干预21 d,监测裸鼠活动状况,每间隔2 d测量1次肿瘤大小。干预结束后,测量体重、瘤重与脾重,计算脾脏指数、抑瘤率;HE染色观察移植瘤的病理学形态;脾淋巴细胞增殖试验评价脾脏中T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖能力;血液分析仪测定外周血中白细胞数目和淋巴细胞占比;ELISA法检测血清中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot法测定模型组和白花蛇舌草水提物低、高剂量组裸鼠肿瘤组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路蛋白及凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸蛋白酶-7(Caspase-7)、半胱天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)]表达情况。结果与正常组比较,模型组裸鼠脾脏指数、外周血中白细胞数量均明显升高(P均<0.05),脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖能力指数、外周血淋巴细胞占比及血清中IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平均明显降低(P均<0.05);肿瘤组织中肿瘤细胞密集丰富排列无序,肿瘤细胞异型性明显。与模型组比较,白花蛇舌草水提物高、低剂量组裸鼠脾脏指数、脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖能力指数、外周血淋巴细胞占比及血清中IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平均明显升高(P均<0.05),瘤重、外周血中白细胞数量均明显降低(P均<0.05);肿瘤组织中肿瘤细胞数目大量减少,细胞凋亡,组织结构破损;肿瘤组织中p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、mTOR、Bcl-2蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),Bax、Caspase-7、Caspase-9蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。环磷酰胺组裸鼠脾脏指数、瘤重、脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖能力指数、外周血白细胞数量和淋巴细胞占比均明显低于模型组(P均<0.05);肿瘤组织中肿瘤细胞数量明显减少。结论白花蛇舌草水提物可显著抑制MDA-MB-231乳腺癌裸鼠移植瘤生长,诱导乳腺癌细胞发生凋亡,增强移植瘤裸鼠免疫功能,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR通路激活,下调凋亡相关蛋白表达、上调促凋亡蛋白表达相关。

基于TLR4/NLRP3信号通路探讨偏瘫口服液对缺血性脑卒中大鼠的改善作用

目的探讨偏瘫口服液对缺血性脑卒中模型大鼠的改善作用及机制。方法将40只大鼠随机分为假手术组、模型组、银杏叶片组(阳性对照,5.76 mg/kg)和偏瘫口服液低、高剂量组(1.5、6.0 g/kg)。除假手术组外,其余各组均采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。造模成功后,各组大鼠分别连续给予相应药物治疗5 d。实验期间,监测大鼠活动并进行神经功能评分;末次给药后,分析脏器指数;采用ELISA法检测脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;试剂盒法测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽(GSH)水平;以苏木素-伊红(HE)染色法比较缺血区脑组织病理学特征;通过Western blot法测定大鼠脑组织中凋亡相关蛋白及TLR4/NLRP3信号通路相关蛋白的表达水平。结果相较于假手术组,模型组大鼠神经功能评分、脑指数、脾指数以及脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA含量均显著升高(P<0.01),而脑组织SOD、GSH水平均显著降低(P<0.01);脑组织出现结构松弛、大量排列不规则空洞、细胞核固缩等典型病变。与模型组比较,偏瘫口服液高剂量组和银杏叶片组大鼠神经功能缺损评分、脑指数、脾指数,以及脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA水平均显著下降(P<0.05),而脑组织SOD、GSH含量均明显上升(P<0.01),脑组织病理明显改善。与假手术组相比,模型组脑组织中Bax、TLR4、p-NF-κB、NF-κB与NLRP3蛋白表达均显著上调(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型组相比,偏瘫口服液低、高剂量组可有效地逆转上述脑组织损伤的蛋白表达趋势。结论偏瘫口服液对缺血性脑卒中模型大鼠具有良好的治疗作用,其机制可能与调节TLR4/NLRP3信号通路、抑制神经炎症反应和氧化应激相关。

岩黄连总生物碱对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的改善作用研究

目的研究岩黄连总生物碱对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的肝纤维化大鼠的保护作用及机制。方法通过向SD大鼠腹腔给予30%CCl4橄榄油溶液(0.1 mL/100 g)诱导复制肝纤维化模型,2次/周,连续12周。将肝纤维化大鼠随机分为模型组,岩黄连总生物碱低、中、高剂量(25、50、100 mg/kg)组及联苯双酯(30 mg/kg)组,另设正常组大鼠,各组均为8只。各给药组于造模第11周按设定剂量灌胃相应药物(1.0 mL/100 g)干预,1次/d,连续2周。正常组与模型组大鼠每天灌胃等体积的生理盐水。末次给药24 h后,收集大鼠血清、肝脏及脾脏组织,测定大鼠肝脾指数;采用HE染色和Masson染色观察肝组织病理学变化。比色法检测各组血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总蛋白(total protein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)与谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)的含量;通过ELISA检测血清透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层粘连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前胶原(typeⅢprocollagen,PCⅢ)及Ⅳ型胶原(collagenⅣ,Ⅳ-C)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠反应迟钝,肝脾指数增大(P<0.01),肝组织呈现明显纤维化,血清ALT、AST、MDA、LN、HA、PCⅢ和Ⅳ-C水平显著升高(P<0.01),血清TP、ALB、SOD及GSH-Px水平显著下降(P<0.01);血清中TGF-β1、IL-1β、IL-8及IL-6蛋白表达水平显著上调(P<0.01)。与模型组比较,岩黄连总生物碱中、高剂量组均能明显改善大鼠状态和肝脾指数(P<0.05,P<0.01),有效调节大鼠肝组织病理学损伤和纤维增生;显著降低大鼠血清ALT、AST、MDA含量(P<0.01),明显提高血清TP、ALB、SOD及GSH-Px的表达水平(P<0.05,P<0.01);并能明显下调LN、HA、PCⅢ、Ⅳ-C、TGF-β1、IL-1β、IL-8及IL-6蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论岩黄连总生物碱具有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与抗氧化、抑制炎症因子表达相关。

D290树脂从石煤酸浸液中吸附钒的工艺

本文主要研究 D2 90树脂从石煤酸浸液中回收钒的工程过程 ,并在树脂选型、树脂上柱条件、洗脱液的组成等方面进行了详细实验。采用酸浸—离子交换新工艺后 ,可在减化流程、降低消耗的同时使回收率提高 15

理中汤急性毒性和亚慢性毒性实验研究

目的:研究理中汤的急性毒性和亚慢性毒性,并对其安全性进行评价,为理中汤的临床用药提供理论依据。方法:急性毒性试验采用最大给药量法,以180.0 g/(kg·d)的剂量分3次小鼠灌胃理中汤水提液,连续观察14 d内的毒性反应。亚慢性毒性试验,设高、中、低3个剂量组(6.0、12.0、24.0 g/kg),SD大鼠分别按相应剂量每天灌胃1次,对照组给予蒸馏水,连续灌胃90 d。实验结束大鼠经麻醉后采血测血液学和血生化指标,采集实体器官称重,计算脏器系数,并进行组织病理学检查。结果:急性毒性试验结果表明,昆明小鼠在最大给药量180.0 g/(kg·d)下未表现出任何毒性反应,解剖也未发现明显可见的病理变化。亚慢性毒性试验结果显示,各剂量组SD大鼠的体重、血常规指标、血清生化指标和脏器系数与对照组相比均未发生显著变化(P>0.05);经剖检和组织病理学检查,发现高剂量组和对照组SD大鼠的肝脏、肺脏及肾脏等器官组织均未出现与受试药物相关的病理改变。结论:在本实验条件下,理中汤无急性毒性作用,长期用药也未发生亚慢性毒性反应,具有可靠的安全性,可在临床上推广应用。

广西中华眼镜蛇的蛇毒蛋白natrin对过氧化氢损伤乳大鼠原代心肌细胞钙超载及相关基因表达的影响

目的观察广西中华眼镜蛇（Naja naja atra）的蛇毒蛋白（natrin）对SD大鼠原代心肌细胞钙超载的影响,并探讨natrin对心肌的保护作用及对心肌钙、钾离子通道影响的可能作用机制。方法分别用natrin 5,25和125 mg·L^-1预处理原代SD乳大鼠心肌细胞24 h后,再以H2O20.3 mmol·L^-1诱导损伤,以Fluo-3为Ca^2＋荧光探针,应用激光共聚焦显微镜动态检测细胞内游离钙离子浓度变化;另外用natrin 5,25和125 mg·L^-1及维拉帕米（Ver）5 nmol·L^-1预处理24 h后,再以H2O20.3 mmol·L^-1诱导损伤15 min,FQPCR法检测心肌细胞钙离子通道Cav1.2,Calm,Ry R2和钾离子通道Kir6.2的m RNA表达情况。结果激光共聚焦显微镜检测结果发现,与正常对照组比较,H2O2作用3-15 min心肌细胞内钙荧光平均峰值增强49.37%（P〈0.01）;而给予natrin 5,25,125 mg·L^-1预处理24 h组该平均峰值分别增强27.52%,12.71%和5.15%,显著低于H2O2组（P〈0.01）。PCR结果表明,H2O2损伤组其心肌细胞Cav1.2,Calm,Ry R2及Kir6.2的m RNA表达分别为正常对照组的1.78倍,1.26倍,4.34倍和0.79倍（P〈0.01）;而给予natrin及维拉帕米干预组,细胞Cav1.2,Calm和Ry R2的m RNA表达较H2O2损伤组均显著降低（P〈0.01）,而Kir6.2的m RNA表达较H2O2损伤组显著升高（P〈0.05）。结论广西中华眼镜蛇natrin可明显减轻H2O2所致的心肌细胞钙超载,对心肌细胞过氧化损伤有良好的保护作用,其作用机制可能与降低H2O2损伤的心肌细胞的Cav1.2,Calm和Ry R2的m RNA表达及增加Kir6.2的m RNA表达有关。

岩黄连总碱诱导肝星状细胞凋亡和自噬的电镜实验研究

为了研究岩黄连总碱诱导肝星状细胞凋亡和自噬的作用,本文通过体外培养HSC-T6细胞,应用MTT法检测不同浓度(0.20、0.25、0.30g·L^(-1))脱氢卡维丁组、巴马汀组和小檗碱组的细胞增殖抑制率,应用透射电子显微镜观察各组HSC-T6细胞的超微结构改变,结果发现:3组不同药物诱导的HSC-T6细胞抑制率均呈浓度依赖性;经不同浓度3组药物处理24h后的HSC-T6细胞均呈典型的细胞凋亡超微结构改变,并出现不同程度的自噬现象。可见,脱氢卡维丁、巴马汀和小檗碱能诱导HSC-T6细胞凋亡,也能诱导细胞自噬。这3种成分可能为岩黄连总碱中抗肝纤维化的有效成分。

玉郎伞多糖对S_(180)荷瘤小鼠氧化应激、免疫调节及血管生成的影响

目的探讨玉郎伞多糖(Yulangsan polysaccharides,YLSPS)对S_(180)荷瘤小鼠的体内抗肿瘤作用及其机制。方法以昆明小鼠建立S_(180)皮下移植瘤模型,随机分为模型组、环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX 20 mg·kg^(-1)·d^(-1))组、YLSPS低,中,高剂量(150、300、600 mg·kg^(-1)·d^(-1))组,连续给药8 d后处死小鼠,检测小鼠瘤体质量、抑瘤率及其脏器指数;通过HE染色观察小鼠移植瘤细胞的形态学特征;测定血清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物(glutathione peroxidase,GSH-PX)活性,丙二醛(malondialdehyde,MDA)及过氧化氢酶(catalase,CAT)的含量;采用ELISA法测定小鼠血清中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的含量;免疫组织化学法检测药物对微血管密度(microvascular density,MVD)表达的影响。结果与模型组比较,YLSPS(300、600 mg·kg^(-1)·d^(-1))可显著抑制S_(180)荷瘤小鼠的肿瘤生长,提高小鼠脾脏指数和胸腺指数(P<0.05或P<0.001);移植瘤HE染色表明,相较于模型组,经YLSPS干预后肿瘤细胞异型性降低,病理性核分裂减少,可见散在及融合成片状的坏死灶;血清生化指标显示YLSPS(300、600 mg·kg^(-1)·d^(-1))能够明显升高血清GSH-Px、CAT和SOD水平,降低血清MDA及VEGF水平(P<0.05或P<0.001);ELISA法与免疫组织化学法表明YLSPS(300、600 mg·kg^(-1)·d^(-1))可显著抑制VEGF、MVD的表达(P<0.05或P<0.001)。结论YLSPS可抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,其机制可能与增强小鼠免疫功能、抗氧化作用及抑制S_(180)肿瘤组织中VEGF与MVD的表达有关。

气相色谱法测定医用聚乳酸薄膜中三氯甲烷残留量

目的:建立医用聚乳酸薄膜中三氯甲烷残留量的测定方法。方法:采用直接进样色谱法进行测定,使用RESTEK RTX毛细管色谱柱,检测器:电子捕获检测器(ECD),检测器温度:270℃,柱温:85℃,维持3 min;分流进样方式,分流比:10∶1;进样口温度:200℃;载气:高纯氮气,流速:1.0 ml/min;进样量:1μl。结果:三氯甲烷在25~2 000 ng/ml范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9);检测限为1.50 ng/ml,定量限为4.62 ng/ml;平均回收率为98.35%,RSD=1.98%。结论:本实验方法灵敏、准确,可作为医用聚乳酸薄膜中三氯甲烷残留量的检测方法。

卧式水轮发电机组烧瓦原因及处理措施

中小型卧式水轮发电机组的径向推力轴承的烧瓦现象,是机组试机和运行中常见的事故,尤其对于高转速轴承,一旦出现烧瓦,也许要经过多次处理和试运转,克服烧瓦的成功率仍然不高。实践证明:控制轴承温升的有效措施之一是增加流过轴瓦的润滑油油量,并使其具有一定的压力。结构上是在大推力头外圆上设计数块刮油板,则当推力头旋转时便增加了润滑油油量和压力,克服了轴瓦的过热和烧瓦。增加轴承润滑油油量并使其具有一定的压力,即使是轴承的热平衡的某个因子达不到设计要求,也能有效地防止轴承的过热和烧瓦。

济生肾气汤加三七、鳖甲对CCl4诱导肝纤维化大鼠模型的干预作用及机制

目的:探讨济生肾气汤加三七、鳖甲对四氯化碳(CCl;)诱导的肝纤维化大鼠模型的干预作用及具体机制。方法:将SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药治疗(低、中、高剂量)组,模型组与中药治疗组采用腹腔注射40%CCl4橄榄油溶液,每周2次,持续8周的方法复制肝纤维化大鼠模型。造模成功后,各给药组分别灌胃相应药物,对照组及模型组予等体积蒸馏水灌胃,每天1次,治疗4周。末次灌胃结束后,对肝组织切片进行HE染色和Masson染色观察肝组织病理形态学,检测肝功能指标(ALT、AST);ELISA法测定转化生长因子β(TGF-β)、血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)、壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;RT-PCR法测定Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白(Col-Ⅰ、Col-Ⅲ)及TGF-βmRNA的表达水平。结果:HE和Masson染色显示模型组大鼠大量肝细胞炎症坏死,肝组织胶原纤维广泛增生,纤维间隔相互连接,假小叶形成,而中药各剂量治疗组大鼠的肝脏炎症及肝纤维化程度均较模型组减轻;与模型组比较,中药治疗组ALT、AST、TGF-β、Ang-Ⅱ、CHI3L1、IL-1、IL-6、TNF-α水平均下降,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、TGF-βmRNA表达均减少,其中以中药中、高剂量组效果最为明显(P<0.01)。结论:济生肾气汤加三七、鳖甲对CCL4诱导的大鼠肝纤维化具有明显的改善作用,其作用机制可能与下调血管紧张素转换酶(ACE)-血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)-血管紧张素Ⅱ受体1(AT1R)信号通路相关基因表达,降低相关细胞因子水平、促进细胞外基质降解方面等有关。

基于SDF-1/CXCR4轴观察济生肾气汤对肝硬化大鼠BMSCs归巢的影响

目的探讨济生肾气汤通过基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)/CXC族趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)轴对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)归巢效率的影响,分析其联合BMSCs移植治疗肝硬化的机制。方法以40%四氯化碳橄榄油溶液腹腔注射联合复合因素建立SD大鼠肝硬化模型,将30只造模成功的大鼠随机分为模型组、BMSCs移植组(BMSCs组)、BMSCs移植联合济生肾气汤组(联合组),每组10只,另以10只正常大鼠设为正常组,共4组。BMSCs组与联合组造模后行尾静脉注射移植荧光标记的BMSCs,联合组同时予济生肾气汤灌胃,正常组及模型组不予处理。用药4周后,观察各组大鼠肝功能指标及肝组织病理改变,荧光显微镜下观察各组大鼠肝组织内BMSCs归巢情况,并且通过ELISA法检测各组大鼠血清干细胞因子(stem cell factor,SCF)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,GCSF)及促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)水平变化,免疫组化法检测SDF-1、CXCR4蛋白表达情况。结果光镜下见模型组大鼠肝纤维化明显,大量炎症细胞浸润,而BMSCs组和联合组纤维化程度及炎症活动度均较模型组不同程度改善。与正常组比较,模型组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、γ-谷氨酰胺转肽酶均明显升高,白蛋白明显降低(P<0.05),与模型组比较,BMSCs组与联合组较模型组均有不同程度改善(P<0.05)。BMSCs归巢情况比较,同倍数视野下联合组可见归巢BMSCs数量多于BMSCs组(P<0.05)。与模型组比较,BMSCs组、联合组大鼠血清SCF、HGF、GCSF及EPO表达均不同程度升高,联合组表达高于BMSCs组(P<0.05)。免疫组化结果显示,BMSCs组与联合组大鼠肝组织SDF-1、CXCR4蛋白表达较模型组上调,联合组表达水平高于BMSCs组(P<0.05)。结论济生肾气汤可激活SDF-1/CXCR4生物轴,上调相关蛋白及其上游调控因子表达,促进BMSCs向受损伤肝组织归巢,改善肝硬化大鼠肝功能及肝硬化程度。

基于网络药理学探讨白花蛇舌草抗肝纤维化作用机制及实验验证

目的基于网络药理学方法研究白花蛇舌草抗肝纤维化的作用机制。方法检索TCMSP与Uniprot数据库,筛选白花蛇舌草有效成分及靶基因。通过GeneCards及OMIM数据库筛选肝纤维化的疾病靶基因,使用Cytoscape 3.8.2软件构建“疾病-成分-靶点”网络。通过STRING数据库构建PPI网络,借助Cytoscape 3.8.2软件筛选核心靶点,并对核心靶点进行GO功能富集和KEGG通路富集分析。对分析结果进行实验验证。腹腔注射40%四氯化碳橄榄油溶液制备肝纤维化大鼠模型,将造模成功大鼠按随机数字表法分为模型组及白花蛇舌草组,每组10只。另以10只健康大鼠为空白对照组。白花蛇舌草组灌胃白花蛇舌草水提液2.7 g/kg,空白对照组及模型组灌胃等体积的蒸馏水,1次/d,连续4周。观察各组大鼠肝组织病理学变化及血清GPT、GOT、Alb水平;ELISA法检测外周血IL-6、IL-1β、TGF-β1水平;采用Western blot法检测PI3K、Akt、HIF-1α、VEGF蛋白表达。结果获得白花蛇舌草治疗肝纤维化的有效成分5个,有效靶点118个。度值较高的有效成分为豆甾醇、β-谷甾醇、槲皮素等;度值较高的作用靶点为VEGF、EGFR、HIF-1α、IL-6。PPI网络中核心基因为HIF-1α、IL-6等;GO功能富集分析显示,可能影响RNA转录、蛋白结合等过程;KEGG通路富集分析显示,显著富集的通路为癌症通路、乙型肝炎通路、PI3K/Akt、HIF-1通路等。动物实验结果显示,与模型组比较,白花蛇舌草组肝脏组织病理学明显改善,白花蛇舌草组大鼠血清GPT、GOT、IL-6、IL-1β、TGF-β1水平降低(P<0.01),Alb水平升高(P<0.01),肝组织中PI3K、Akt、HIF-1α、VEGF蛋白表达降低(P<0.01)。结论白花蛇舌草可通过作用VEGF、EGFR、HIF-1α与IL-6靶点,调控PI3K/Akt、HIF-1通路等发挥抗肝纤维化作用,并具有抗炎、抗血管新生、抗肿瘤等生物学功能。

基于^1H-NMR的当归四逆汤抗凝血作用的代谢组学研究

采用1H-NMR代谢组学技术研究当归四逆汤抗凝血作用机制以及对小鼠血浆内源性代谢产物的影响。当归四逆汤灌胃给药1周后,观察当归四逆汤对小鼠凝血酶时间的影响,并采用1H-NMR技术分析小鼠血浆代谢指纹图谱,采用主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares-discrimination analysis,OPLS-DA),研究给药组与正常组之间的代谢物组差异,筛选与抗凝血作用相关的潜在生物标志物。连续当归四逆汤灌胃给药1周后,能显著延长小鼠凝血酶时间(P<0.05)。代谢组学结果显示空白组和复方组能明显区分,与空白组比较,复方组内源性代谢产物肉碱、苯丙氨酸和异丁酸显著上调(P<0.01),赖氨酸、组氨酸和胆固醇显著下调(P<0.05)。肉碱、苯丙氨酸、组氨酸和胆固醇为当归四逆汤抗凝过程中潜在代谢标志物,当归四逆汤可能通过调节脂质代谢、能量代谢和氨基酸代谢影响血小板聚集功能和组织因子、纤维蛋白酶的表达来发挥抗凝作用。

基于组效关系的壮药岩黄连抑制HSC-T6细胞增殖活性成分辨识研究

目的建立岩黄连提取物的化学成分与其抑制大鼠肝星状细胞(HSC-T6)作用的组效关系模型,寻找与药效显著相关的活性成分。方法采用正交设计法提取得到9个岩黄连提取物,通过HPLC法对岩黄连提取物进行成分表征,以共有峰的相对峰面积来表征其相对质量分数;MTT法测定岩黄连提取物抑制HSC-T6细胞增殖活性,以抑制率为评价指标;利用SIMCA-P11.5软件的正交投影偏最小二乘法(OPLS)分析,研究共有峰与药效的相关性,根据S-载荷图与变异权重参数(VIP)值辨识显著活性成分;通过MTT法及流式细胞仪验证所筛选成分的活性。采用细胞乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒观察所筛选成分对人正常肝细胞(HL-7702)LDH活性的影响。结果 HPLC法对9个岩黄连提取物进行表征分析结果确定了21个共有峰,其中19、18、13、20、14和16号共有峰(VIP>1)与岩黄连抑制HSC-T6细胞增殖活性显著相关,并鉴定18、19和20号共有峰代表的化合物分别为脱氢卡维丁、巴马汀和小檗碱。MTT结果显示不同质量浓度脱氢卡维丁、巴马汀及小檗碱对HSC-T6细胞增殖具有明显抑制作用;流式细胞术检测结果也与MTT结果一致,脱氢卡维丁、巴马汀及小檗碱(0.10 mg/m L)处理HSC-T6细胞后的凋亡率分别为42.12%、42.22%、36.73%,明显高于对照组的1.69%(P<0.01)。细胞毒性实验发现当脱氢卡维丁终质量浓度低于0.15 mg/m L,巴马汀与小檗碱终质量浓度低于0.10 mg/m L时,对HL-7702细胞不具有明显的细胞毒作用。结论通过组效关系研究首次发现岩黄连提取物中脱氢卡维丁、巴马汀与小檗碱在体外能显著抑制HSC-T6细胞增殖并诱导其凋亡,且在有效质量浓度下不具有明显的细胞毒作用,表明这3种化学成分极有可能是岩黄连抗肝纤维化作用的潜在活性成分且在应用中具备一定的安全性;同时也提示基于组效关系的研究思路可为天然植物药活性成分的辨识提供行之有效的方法。

FTIR结合PLS-DA鉴别不同陈化时间六堡茶熟茶

对不同陈化时间的六堡茶熟茶进行了傅里叶变换红外光谱(FTIR)法分析,考察了不同陈化时间六堡茶熟茶与红外光谱特征的关系,结合偏最小二乘判别分析(PLS-DA)进行鉴别,并找出其化学组分差异。样本在主成分空间中区分为不同的类别,基本实现不同陈化时间六堡茶熟茶的鉴别。载荷因子分析显示,5个不同陈化时间六堡茶熟茶化学组成的差异主要体现在茶多酚、咖啡碱及茶多糖3类物质成分含量的不同。可以反映不同陈化时间六堡茶熟茶主要成分组成的差异并进行快速的鉴别。

基于组效关系的壮药岩黄连提取物抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性成分辨识研究

目的基于高效液相色谱(HPLC)分析方法,结合人肝癌SMMC-7721细胞模型,通过组效关系研究,寻找与药效活性相关的成分。方法通过分析岩黄连正交9个提取物样品,以HPLC对岩黄连提取物进行成分表征,确定了20个共有峰。采用MTT法检测岩黄连提取物抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性,以抑制率为评价指标,将其与HPLC图共有色谱峰的相对峰面积进行正交投影的偏最小二乘法(orthogonal partial least squares,OPLS)分析,根据变异权重系数(variable importance in the projection,VIP)辨识显著活性成分。结果结果表明,岩黄连提取物中11个共有峰与其抑制SMMC-7721细胞活性显著相关,贡献较大的共有峰依次为15>12>20>1>17>10>4>2>5>11>3,其中15号与17号共有峰分别为脱氢卡维丁与巴马汀。经细胞试验验证,发现0.20,0.25,0.30mg·ml-1脱氢卡维丁组细胞增殖抑制率分别为(69.67±1.0)%,(72.47±0.3)%,(73.08±1.1)%,0.20,0.30,0.40mg·ml-1巴马汀组细胞增殖抑制率分别为(36.14±2.8)%,(66.03±0.7)%,(70.66±0.6)%。结论通过组效关系研究发现岩黄连提取物中脱氢卡维丁和巴马汀对肝癌SMMC-7721细胞的增殖具有抑制作用,提示这两个化学物质可能是岩黄连抗肝癌作用的潜在活性成分。

气相色谱法测定输血袋中邻苯二甲酸二乙酯的迁移量

建立了气相色谱法测定输血袋中邻苯二甲酸二乙酯（DEP）迁移量的方法。样品采用液液萃取前处理技术，通过正交试验对样品中DEP萃取条件进行系统优化，气相色谱内标法测定。在0．5～10μg／mL范围内，回归方程线性关系良好（r=0．9991），检出限为0．0023μg／mL，定量限为0．0076μg／mL，平均回收率为90．54％-98．0l％，相对标准偏差为1．0％～2．9％。采用本法测得两批输血袋中DEP迁移量分别为0．0515μg／mL和0．0006μg／mL。