云南重楼的皂苷类化学成分研究

目的 研究云南重楼根状茎中的皂苷类化学成分。方法 利用硅胶柱色谱、硅胶C-18柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及半制备高效液相色谱等技术,从云南重楼根茎70%乙醇提取物的水饱和正丁醇萃取物中,纯化得到单体成分。通过NMR、MS等波谱分析和酸水解等化学方法对其进行结构鉴定。结果 共分离得到6个皂苷类化合物,分别鉴定为parisyunnanosideⅠ(1)、paristenoside B(2)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3β,16α,26-三羟基-(23R,25R)-16,23-环胆甾烷醇-5,17(20)-二烯-22-酮-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-17,22-二羟基-(25R)-呋甾-5-烯-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、parisyunnanoside A(5)和26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3β,26-二羟基-(25R)-胆甾-5,17(20)-二烯-16,22-二酮-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)。结论 化合物3、4和6为首次从云南重楼中发现。

重楼皂苷Ⅵ对脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制

目的探讨重楼皂苷Ⅵ(PPⅥ)对脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法以人脑胶质瘤LN229细胞为对象,采用MTT法检测不同浓度PPⅥ[0(对照组)、1、2、4、8、16、32、64μmol/L]作用不同时间(24、48、72 h)后的细胞存活率,采用克隆形成实验检测不同浓度PPⅥ[0(对照组)、2、4、8μmol/L]作用14 d后的细胞克隆数和克隆形成率,采用流式细胞术和Western blot法分别检测不同浓度PPⅥ[0(对照组)、4、8μmol/L]作用24 h后的细胞凋亡率和凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、切割的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)]、Fas/Fas配体(FasL)死亡受体通路相关蛋白、蛋白激酶B(又称Akt)/糖原合成激酶3β(GSK-3β)通路相关蛋白的表达情况。结果与对照组比较,PPⅥ各浓度组细胞的存活率、克隆数和克隆形成率、Bcl-2蛋白的表达水平和Akt、GSK-3β蛋白的磷酸化水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);细胞凋亡率,Bax、cleaved caspase-3蛋白和Fas、FasL、cleaved caspase-8蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论PPⅥ可抑制人胶质瘤LN229细胞的增殖并诱导其凋亡,这种作用可能与激活Fas/FasL死亡受体通路和抑制Akt/GSK-3β通路有关。

甘青铁线莲的黄酮苷类成分研究

目的研究甘青铁线莲Clematis tangutica全草的黄酮类成分。方法甘青铁线莲全草经乙醇提取,依次用石油醚、水饱和正丁醇萃取,对正丁醇部位采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱及半制备型HPLC等方法进行分离,根据理化性质和波谱分析鉴定化合物的结构。结果分离并鉴定了6个黄酮苷类化合物,分别为芹菜素-7-O-β-D-(-6''-p-香豆酰基)-吡喃葡萄糖苷(1)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、异荭草素(3)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷(4)、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)和芹黄春(6)。结论化合物1为首次从铁线莲属中获得,所有化合物均为首次从该种植物中获得。

太白产红毛七生物碱成分的研究

目的对太白产红毛七中的生物碱类化学成分进行研究,为其开发利用提供依据。方法利用正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、反向硅胶(RP-C18)柱色谱、半制备型高效液相色谱等分离方法从红毛七中得到单体化合物,依据理化性质及波谱数据进行结构鉴定。结果分离得到5个生物碱类化合物,分别为臭豆碱(1)、(-)-epibaptifoline(2)、穿叶赝靛碱(3)、epimediphine(4)和(+)-reticuline(5)。结论 5个化合物均为首次从该种植物中分离得到,其中化合物4和5为首次从该属植物中分离得到。

宽叶重楼化学成分研究

目的对重楼属植物宽叶重楼根茎的化学成分进行研究,为扩大重楼属植物的药用资源提供科学依据。方法采用硅胶柱层析,Sephadex LH-20及RP-C18等分离技术进行纯化单体化合物,根据理化性质及波谱数据鉴定其结构。结果从宽叶重楼根茎乙醇提取物的正丁醇部分中分离得到了7个化合物,分别为β-谷甾醇(1)、胡萝卜苷(2)、2-苯乙基-β-D-葡萄糖苷(3)、没食子酸(4)、芦丁(5)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(6)、重楼皂苷Ⅶ(7)。结论 7个化合物均为首次从该种植物中分离得到,其中化合物3、4为首次从该属植物中分离得到。

金线重楼的皂苷成分研究

目的研究金线重楼根茎中的化学成分,寻找中药重楼的药用资源。方法采用70%乙醇提取,利用正相硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、制备高效液相色谱等分离方法从根茎中得到单体化合物,根据其理化性质及现代波谱技术鉴定其结构。结果从金线重楼根茎的正丁醇提取物中分离得到5个单体化合物,分别鉴定为：竹节参苷Ⅳa甲酯（1）、3-O-（6＇-butyl ester）-β-D-glucuropyranosyloleanolic acid-28-O-β-D-glucopyranoside（2）、pregna-5,16-diene-3β-ol-20-one 3-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-[α-L-rhamnopyranosyl-（1→4）]-α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-β-D-glucopyranoside（3）、重楼皂苷Ⅵ（4）、25（R）pennogenin-3-O-α-L-arabinofuranosyl-（1→4）-[α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）]-β-Dglucopyranoside（5）。结论化合物1~3为首次从该植物中分离,其糖苷配基部分也是首次从该植物中发现。

交让木的生物碱成分研究

目的研究交让木中的生物碱成分。方法样品用95%的乙醇进行提取,所得浸膏用酸-碱处理方法处理后得到总生物碱,之后经正相硅胶、Sephadex LH-20、反向硅胶(RP-18)、高效制备液相等多种色谱方法分离得到生物碱单体,根据其理化性质及波谱学数据鉴定其化学结构。结果分离得到4个虎皮楠生物碱,经鉴定分别为daphniyunnine B(1)、daphmacrodin A(2)、macropodumine B(3)、daphnicyclidin L(4)。结论化合物daphniyunnine B(1)为首次从该植物中分离得到。

重楼皂苷Ⅰ对胶质瘤细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨重楼皂苷Ⅰ对胶质瘤U373和U251细胞的增殖活力和迁移能力的影响。方法 采用重楼皂苷Ⅰ不同浓度分别作用于胶质瘤U373和U251细胞24小时后,使用细胞活力检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖;以不同剂量重楼皂苷Ⅰ(0、3、6μM)处理细胞24小时后收集细胞,使用流式细胞术检测细胞凋亡;细胞划痕实验用不同剂量的重楼皂苷I(0、1.5、3μM)处理细胞24小时后,观察划痕愈合程度;Transwell小室检测给药重楼皂苷I后胶质瘤U373和U251细胞迁移能力;蛋白免疫印迹法(Western blot, WB)检测重楼皂苷I对胶质瘤U373和U251细胞凋亡和迁移相关蛋白表达。结果 CCK-8结果表明重楼皂苷Ⅰ呈剂量依赖性抑制胶质瘤U373和U251细胞增殖,半抑制浓度(50%inhibitory concentration, IC50)值分别为3.47和2.52μM;流式细胞术表明重楼皂苷Ⅰ诱导胶质瘤细胞凋亡;细胞划痕观察到加药后划痕创口愈合程度小于对照组;Transwell实验观察到药物处理24小时后,迁移的细胞数量明显减少;Western blot结果表明重楼皂苷Ⅰ上调切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、细胞色素C(Cytochrome-C,Cyt-C)和上皮钙黏素(E-cadherin, E-cad)的表达,下调转化生长因子-β受体1(transforming growth factor beta receptor 1,TGF-β R1)和白细胞抑制因子2(drosophila mothers against decapentaplegic 2,Smad2)的表达。结论 重楼皂苷I可抑制胶质瘤U373和U251细胞的增殖和迁移,促进其凋亡。

宁夏枸杞子乙酸乙酯部分的化学成分研究

目的对宁夏枸杞中的化学成分进行研究。方法样品用85%的乙醇进行提取,所得浸膏用水分散后,经石油醚-乙酸乙酯系统进行萃取,将所得的乙酸乙酯层经正相硅胶、Sephadex LH-20、反向硅胶(RP-18)、高效制备液相等多种色谱方法分离得到单体化合物,根据其理化性质及波谱学数据鉴定其化学结构。结果分离得到8个单体化合物,分别被鉴定为烟酰胺(nicotinamide,1)、顺式对羟基肉桂酸(Z-p-hydroxy-cinnamic acid,2)、反式对羟基肉桂酸(E-p-hydroxy-cinnamic acid,3)、东莨菪素(scopoletin,4)、异莨菪亭(isoscopoletin,5)、槲皮素(quercetin,6)、artamenone(7)、2-furylcarbinol-(5'-11)-1,3-cyclopentadiene[5,4-c]-1H-cinnoline(8)。结论化合物7、8为首次从该植物中分离得到,也首次从该属植物中分离得到。

重楼皂苷H诱导耐替莫唑胺胶质瘤SHG44R细胞凋亡和焦亡的作用研究

目的研究重楼皂苷H诱导耐替莫唑胺胶质瘤SHG44R细胞程序性死亡的途径和初步分子机制。方法CCK-8法检测给药后细胞活力影响,透射电子显微镜(TEM)检测给药后细胞形态及细胞器变化,流式细胞术检测给药后细胞凋亡率,Western blot法检测凋亡和焦亡的相关蛋白表达,RT-qPCR检测焦亡相关mRNA表达水平。结果CCK-8法检测结果表明重楼皂苷H呈时间剂量依赖性地抑制SHG44R增殖;TEM观察到给药后细胞膜破裂、胞质出现囊泡,提示具有细胞凋亡和焦亡的表征;流式细胞术检测结果表明重楼皂苷H剂量依赖性地介导细胞凋亡;Western blot法检测结果表明Bax、Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-1、Cleaved-N-terminal-GSDMD、IL-1β、IL-18和NLRP3蛋白上调,Bcl-2蛋白下调;RT-qPCR结果表明,与正常组相比,给药后caspase-1、caspase-11、GSDMD、IL-1β、IL-18和NLRP3的mRNA表达水平显著上升。结论重楼皂苷H诱导耐替莫唑胺胶质瘤SHG44R细胞凋亡与焦亡。

北重楼根的化学成分研究

目的研究北重楼(Paris verticillata)根中的化学成分。方法利用正相硅胶柱色谱、中低压制备色谱仪、反相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、制备高效液相色谱等分离方法从北重楼根部70%乙醇提取液的正丁醇萃取物中分离得到单体化合物,根据其理化性质及现代波谱技术鉴定其结构。结果从北重楼中分离得到2个甾体皂苷和4个甾酮类化合物,分别鉴定为:偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、重楼皂苷Ⅶ(2)、2-去氧甲壳甾酮(3)、5-hydroxyabutastorone(4)、2-deoxyintegristerone A(5)、integristerone A(6)。结论化合物4~6为首次从重楼属植物中分离。

美花铁线莲地上部分的皂苷类成分研究

目的研究美花铁线莲地上部分的皂苷类化学成分。方法将干燥的样品用70%乙醇回流提取,所得浸膏分步萃取得到总皂苷,再利用正相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、反相硅胶柱色谱、制备高效液相色谱等方法分离得到单体化合物,根据其理化性质与波谱数据鉴定化学结构。结果分离得到5个单体皂苷,分别鉴定为clematiganoside A(1)、huzhangoside D(2)、huzhangoside B(3)、cauloside G(4)和loniceroside C(5)。结论所有化合物均为首次从该种植物中分离得到,其中皂苷5是从本属植物中首次发现。

重楼皂苷Ⅶ对替莫唑胺耐药胶质瘤细胞增殖、迁移及周期阻滞的影响

目的考察重楼皂苷Ⅶ对耐药胶质瘤的作用机制。方法采用划痕和Transwell小室检测细胞迁移,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞检测细胞周期,Western blot检测蛋白表达。结果重楼皂苷Ⅶ呈剂量依赖性抑制替莫唑胺耐药胶质瘤细胞增殖和迁移,涉及下调迁移相关蛋白N-cadherin,β-catenin,TGF-β受体1和smad2。耐药胶质瘤细胞具有天然G_(1)期阻滞现象,重楼皂苷Ⅶ可上调cyclin D1下调P21和P27影响其周期阻滞。结论重楼皂苷Ⅶ具有抗替莫唑胺耐药胶质瘤的作用和进一步开发的前景。

PKCε信号通路介导甘青铁线莲活性成分APG抗心肌缺血再灌注损伤的机制研究

目的研究不同浓度甘青铁线莲活性成分APG对H9C2大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的机制。方法体外培养H9C2大鼠心肌细胞,经2μM/L和4μM/L的APG预处理24 h后,建立缺氧复氧损伤模型(I/R)(缺氧45 min,复氧3 h)。采用CCK-8法检测细胞活力,检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)的释放量、丙二醛(MDA)的释放量和细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活力;采用Western Blot法检测细胞内蛋白激酶Cε(PKCε)、Caspase-3、Bax和Bcl-2表达情况,使用特异性PKCε抑制剂CHE观察PKCε信号通路在此过程中的作用。结果 I/R处理可抑制H9C2细胞活性,细胞培养基中LDH、MDA含量升高,SOD活力降低(与Control组比较,P<0.05)。抑制PKCε表达,上调Caspase-3表达,下调Bcl-2/Bax比例(与Control组比较,P<0.05)。2μM/L和4μM/L的APG预处理均可发挥细胞保护作用,降低LDH与MDA释放量,提高SOD活力(与I/R组比较,P<0.05)。此外,APG处理对抗了I/R损伤引起的PKCε表达下调,抑制Caspase-3表达,提高了Bcl-2/Bax比例(与I/R组比较,P<0.05)。CHE处理后细胞活力下降,Caspase-3表达上调,Bcl-2/Bax比例下降,凋亡增加(与APG+I/R组比较,P<0.05)。结论甘青铁线莲中活性成分APG可减轻心肌缺血再灌注损伤,其机制可能是激活PKCε相关信号通路,最终抑制心肌细胞凋亡。

中华疣海星化学成分的研究

目的研究中华疣海星的化学成分。方法样品用75%乙醇提取,所得浸膏经石油醚和正丁醇依次萃取,正丁醇萃取物经硅胶柱色谱、RP-C_(18)柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和半制备高效液相色谱等分离方法得到单体化合物,根据波谱特征和理化性质鉴定化合物的结构。结果分离鉴定了5个单体化合物,分别为asterubine(1)、cholest-3β,6α,8β,15β,24α-pentol(2)、3β,4β,6α,8β,15β,24α-hexahydroxy-cholestan-22-en(3)、pentacerasteroside A(4)和asteronyl pentaglycoside sulfate(5)。结论所有化合物均是首次从该动物中分离得到。

重楼皂苷抗胶质瘤作用机制的研究进展

中药重楼具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊的功效,临床常用于抗炎、抗菌、抗病毒及抗肿瘤等。重楼的主要药效成分为甾体皂苷类化合物,总称为重楼皂苷。重楼皂苷具有多种药理活性,特别是其抗肿瘤作用已引起了广泛的关注。近年来,关于其抗胶质瘤活性和作用机制的研究也越来越多。目前报道的具有抗胶质瘤活性的重楼皂苷包括重楼皂苷I(D)、II、III(薯蓣皂苷)、VI、VII和H等,它们可显著诱导胶质瘤细胞程序性死亡。其作用机制主要涉及以下几个方面:通过线粒体通路和死亡受体通路诱导胶质瘤细胞凋亡、通过释放促炎因子诱导胶质瘤细胞焦亡、通过复合物途径诱导胶质瘤细胞坏死;诱导胶质瘤细胞周期阻滞主要通过调节细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶的表达水平;诱导胶质瘤细胞自噬主要通过调节与自噬有关的细胞因子如微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、自噬相关基因Beclin-1和泛素结合蛋白P62,从而调控AKT-mTORC1信号通路;以及通过调节上皮间质转化过程中的相关蛋白抑制胶质瘤细胞迁移侵袭。通过这些作用机制,重楼皂苷抑制胶质瘤细胞增殖从而发挥抗胶质瘤作用,同时重楼皂苷和化疗药物如替莫唑胺等联合使用可以逆转胶质瘤细胞耐药性从而增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。本文对重楼皂苷抗胶质瘤的作用机制进行综述,为其作为抗胶质瘤药物的深入研发提供参考。

中华疣海星中化学成分的分离和鉴定

目的 对采自中国南海海域的中华疣海星的乙醇提取物的正丁醇萃取部位的化学成分进行分离和结构鉴定,为开发利用中华疣海星奠定基础。方法 用75%的乙醇对中华疣海星进行回流提取得浸膏,然后将浸膏均匀分散于水中,用石油醚和水饱和正丁醇依次萃取,运用正相硅胶、C18反相硅胶、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和半制备高效液相等分离技术,对正丁醇萃取部位的化学成分进行分离,通过综合分析化合物的一维核磁、二维核磁和质谱等波谱数据,对分离到得化合物得结构进行鉴定。结果 分离得到4个化合物,分别鉴定为(24R, 22E)-胆甾-22-烯-3β,6α,15β,24-四醇(1)、(24R, 22E)-胆甾-22-烯-3β,6α, 8β,15β,24-五醇(2)、(25S)-胆甾-3β,6α,15β,16β,26-五醇(3)、(25S)-胆甾-3β,6α,8β,15β,16β,26-六醇(4)。结论 所有化合物均为首次从疣海星属动物中分离得到。

海星皂苷CN-3激活NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路诱导胶质瘤细胞焦亡的作用

目的 研究海星皂苷面包海星3(Culcita novaeguineae-3,CN-3)诱导胶质瘤U251和LN229细胞焦亡的作用。方法 将胶质瘤U251和LN229细胞分别设置为空白对照组及CN-3低、高剂量组(3μM、6μM)。(1)细胞增殖测定(cell counting kit-8,CCK-8)法检测面包海星3(CN-3)抑制胶质瘤U251和LN229细胞增殖的给药剂量,分析CN-3对胶质瘤细胞的抑制率。(2)通过透射电镜比较空白对照组及CN-3低剂量组(3μM),观察CN-3诱导胶质瘤细胞膜形态学改变。(3)流式细胞术检测各组胶质瘤细胞焦亡细胞(Annexin V+/PI+表示焦亡细胞)比例、早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-表示早期凋亡细胞)比例。(4)蛋白免疫印迹法(Western blot, WB)检测各组中CN-3诱导胶质瘤U251与LN229细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3, NLRP3)、剪切型胱天蛋白酶-1(Cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Cleaved Caspase-1)、剪切型gasdermin D蛋白N端(Cleaved N-terminal-gasdermin D, Cleaved N-terminal-GSDMD)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果 CN-3呈剂量依赖性抑制U251和LN229细胞增殖;给药后胶质瘤细胞形态改变,局部出现气泡状凸起,细胞膜失去完整性,出现多个孔隙;流式检测表明CN-3可诱导胶质瘤细胞焦亡;与空白对照组相比,CN-3上调胶质瘤U251和LN229细胞内NLRP3、Cleaved Caspase-1、Cleaved N-terminal-GSDMD、IL-1β的表达。结论 CN-3通过激活NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路诱导胶质瘤U251和LN229细胞焦亡。

反萼银莲花根茎中化学成分的研究

目的对反萼银莲花根茎中的化学成分进行研究。方法样品用75%的乙醇加热回流提取,所得浸膏用水分散,依次用石油醚和水饱和正丁醇进行萃取,将所得正丁醇层样品根据其不同性质使用不同分离手段,如硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及半制备高效液相等,分离得到单体化合物,根据其波谱学特征数据及理化性质鉴定其化学结构。结果分离得到5个单体化合物,分别为3-O-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸(1)、3-O-β-D-吡喃木糖-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖-齐墩果酸(2)、anhuienoside E(3)、hederasaponin B(4)、hederacolchiside E(5)。结论5个化合物均为首次从该植物中分离得到。

巴山重楼的皂苷类化学成分研究

目的研究巴山重楼根茎的皂苷类化学成分。方法利用正相硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和半制备高效液相色谱等方法,从巴山重楼根茎70%乙醇提取物的正丁醇萃取部位分离化合物,通过MS、^(1)H-NMR、^(13)C-NMR、2D-NMR和化学手段等鉴定其结构。结果分离得到7个单体化合物,分别鉴定为:lycianthoside A(1)、methylprotodioscin(2)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、borassoside E(4)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3β,26-二羟基-22-甲氧基-(25R)-5α-呋甾-6-酮-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、allimacroside E(6)和(25R)-螺甾-5-烯-3β,7α-二醇-3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)。结论化合物1~7均为首次从巴山重楼中分离得到。