延龄草皂苷对脑缺血大鼠梗死灶周围皮层少突胶质细胞GSK-3/β-catenin/CRMP2信号表达的影响

目的观察延龄草皂苷(TSTT)对脑缺血大鼠梗死灶周围皮层少突胶质细胞GSK-3/β-catenin/CRMP2信号表达的影响,探讨其改善脑缺血损伤的作用机制。方法采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、TSTT 65 mg/kg组、TSTT 33 mg/kg组和金纳多组,各给药组灌胃相应药物,连续15 d。HE染色观察脑组织病理变化,LFB染色观察脑组织神经纤维损伤,免疫荧光染色检测梗死灶周围皮层2′,3′-环核苷酸-3′-磷酸二酯酶(CNPase)、蛋白聚糖(NG2)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达,实时荧光定量PCR检测梗死灶周围皮层GSK-3、β-catenin、脑衰蛋白反应调节蛋白-2(CRMP2)基因表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠患侧脑组织明显坏死,神经细胞大量死亡,胞体皱缩,单位面积神经细胞数量显著减少(P<0.01),神经纤维丢失、排列混乱,髓鞘中有大量空泡,神经纤维相对积分光密度显著减少(P<0.01);与模型组比较,TSTT 65、33 mg/kg组大鼠神经细胞形态有所改善,单位面积神经细胞数量显著增加(P<0.05,P<0.01),神经纤维排列较有序,髓鞘中空泡较少,神经纤维相对积分光密度显著增加(P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠梗死灶周围皮层CNPase阳性表达显著降低,NG2阳性表达显著升高(P<0.01),NG2/GSK-3β、NG2/β-catenin、CNPase/GSK-3β、CNPase/β-catenin阳性细胞显著增加(P<0.01);与模型组比较,TSTT 65、33 mg/kg组大鼠梗死灶周围皮层CNPase、NG2表达显著升高,CNPase/GSK-3β、NG2/GSK-3β阳性细胞显著减少,CNPase/β-catenin、NG2/β-catenin阳性细胞显著增加(P<0.05,P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠梗死灶周围皮层GSK-3αmRNA表达显著升高(P<0.05),β-catenin、CRMP2 mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,TSTT 65 mg/kg组大鼠梗死灶周围皮层GSK-3α、GSK-3βmRNA表达显著降低,β-catenin和CRMP2 mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论TSTT可减轻脑缺血大鼠脑组织损伤,保护少突胶质细胞,促进少突胶质前体细胞存活,其机制可能与下调GSK-3表达,上调β-catenin、CRMP2表达有关。

痰火方调节M1型小胶质细胞活化及减轻脑缺血大鼠脑组织损伤作用的研究

目的观察痰火方调节M1型小胶质细胞活化及减轻脑缺血大鼠脑组织损伤的作用及机制。方法将雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、痰火方高剂量组(3.68 g/kg)、痰火方中剂量组(1.84 g/kg)、痰火方低剂量组(0.92 g/kg)及金纳多组(0.06 g/kg)。除假手术组外,其余各组采用大脑中动脉线栓法建立脑缺血大鼠模型。采用平衡木行走实验评价大鼠运动平衡能力,磁共振成像(MRI)T2 mapping检测脑缺血大鼠脑组织损伤,快蓝染色(LFB)检测神经纤维损伤,HE染色检测神经细胞损伤情况,采用免疫荧光技术检测小胶质细胞标志物离子钙结合衔接分子1(Iba-1)及CD16/Iba-1阳性细胞数。结果与模型组比较,痰火方高剂量组、金纳多组大鼠缺血24、48、72 h平衡木行走能力评分提高(P<0.05或P<0.01),痰火方低、中剂量组大鼠缺血72 h平衡木行走能力评分提高(P<0.01);痰火方高剂量组、金纳多组大鼠梗死灶周围皮层、纹状体脑区T2值降低(P<0.05或P<0.01),痰火方低、中剂量组大鼠梗死灶周围纹状体T2值降低(P<0.05);痰火方高、低剂量组及金纳多组大鼠梗死灶周围皮层、纹状体及外囊LFB积分光密度增加(P<0.01),痰火方中剂量组大鼠梗死灶周围纹状体的LFB积分光密度增加(P<0.01);痰火方低、中、高剂量组大鼠梗死灶周围纹状体病理损伤程度降低,细胞密度增加(P<0.05或P<0.01),金纳多组大鼠梗死灶周围皮层、纹状体细胞密度增加(P<0.01或P<0.05);痰火方高、中剂量组及金纳多组大鼠梗死灶周围皮层、纹状体Iba-1及CD16/Iba-1阳性细胞数减少(P<0.01),痰火方低剂量组大鼠梗死灶周围皮层、纹状体CD16/Iba-1阳性细胞数减少(P<0.01),痰火方低剂量组大鼠梗死灶周围纹状体Iba-1阳性细胞数减少(P<0.01)。结论痰火方可改善脑缺血大鼠神经功能缺损症状,减轻缺血梗死灶周围脑区神经病理学损伤,抑制M1型小胶质细胞活化。

甘草色泽与有效成分含量的相关性研究

为探讨甘草色泽与其质量评价的相关性,该研究以精密色差仪和视觉分析仪测定甘草根皮和断面颜色,以HPLC测定甘草药材中6种黄酮类和2种皂苷类成分的含量,采用偏最小二乘回归法对两类数据进行相关分析。结果发现,野生和栽培甘草根皮颜色不存在显著差异,断面颜色存在显著或极显著差异(P<0.05,P<0.01);野生甘草的甘草苷、异甘草苷、异甘草素含量与甘草酸铵、甘草次酸含量显著或极显著高于栽培甘草;相关性结果表明,甘草根皮和断面的颜色均与有效成分含量具有显著或极显著相关性。该研究为传统以甘草色泽评价其质量提供了科学依据,为完善中药材质量评价体系提供新的参考。

黄连解毒汤有效部位抑制NogoA/NgR表达对脑缺血大鼠白质损伤的影响

目的观察黄连解毒汤有效部位对脑缺血大鼠白质损伤的影响,探讨黄连解毒汤有效部位对轴突修复抑制信号勿动蛋白A(NogoA)和勿动蛋白受体(Nogo receptor,NgR)的调控作用。方法将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、总生物碱组、总黄酮组、总环烯醚萜组。除假手术组外,其余各组大鼠采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型。造模后2 h灌胃给药,总生物碱组大鼠灌胃44 mg/kg总生物碱;总黄酮组大鼠灌胃50 mg/kg总黄酮;总环烯醚萜组大鼠灌胃80 mg/kg总环烯醚萜,假手术组、模型组灌胃等体积的生理盐水,1次/d,连续给药7 d。采用HE染色观察大鼠白质病理形态学改变,采用罗克沙尔坚牢蓝(Luxol fast blue,LFB)染色观察大鼠髓鞘的病理形态学改变,采用免疫组织化学染色法检测大脑内囊和外囊区域淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)、NogoA、NgR表达,采用实时荧光定量PCR技术检测缺血梗死灶周围组织NogoA、NgR基因表达。结果与模型组比较,总生物碱组、总黄酮组、总环烯醚萜组大鼠内囊和外囊区域病理损伤评分降低(P<0.05或P<0.01),LFB染色积分光密度值增高(P<0.01),APP、NogoA表达降低(P<0.01);总生物碱组和总环烯醚萜组大鼠内囊和外囊NgR表达降低(P<0.01或P<0.05),总黄酮组大鼠内囊NgR表达降低(P<0.01);总生物碱组、总黄酮组和总环烯醚萜组大鼠梗死灶周围组织NogoA[(1.20±0.17)、(1.55±0.30)、(1.19±0.38)比(2.22±0.58)]和NgR[(1.98±0.55)、(1.48±0.31)、(1.58±0.27)比(3.36±0.41)]基因表达降低(P<0.01)。结论黄连解毒汤有效部位可减轻脑缺血大鼠白质损伤,其作用机制可能与抑制NogoA/NgR表达有关。

补阳还五汤促进脑缺血大鼠脑组织微结构重塑的作用

目的研究补阳还五汤改善脑缺血大鼠脑血流灌注、促进轴突生长及微结构重塑的药理作用及机制。方法线栓法制备右侧大脑中动脉栓塞脑缺血大鼠模型。将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组(16.1 g/kg),连续灌胃15 d后取材并检测指标。T2加权成像检测脑梗死体积;动脉自旋标记检测损伤脑区的血流灌注;弥散张量成像检测损伤脑区的超微结构。HE染色观察损伤脑区的病理损伤;免疫荧光染色法检测淀粉样前体蛋白(APP)、神经轴突生长抑制因子(NogoA)和神经轴突生长抑制因子受体(NgR)的蛋白表达,RT-PCR法检测生长相关蛋白-43(GAP-43)、NogoA和NgR的基因水平,以评价脑缺血大鼠轴突的生长及损伤情况。结果MRI结果显示,与模型组比较,补阳还五汤组大鼠的脑梗死体积减小(P<0.05),梗死核心及周围皮层的血流灌注增加(P<0.05),梗死灶周围皮层的超微结构改善。HE染色结果显示,补阳还五汤组大鼠较模型组皮层正常形态神经细胞数量增加,异常形态神经细胞数量减少(P<0.01或P<0.05),水肿程度减轻,神经纤维致密性提高。免疫荧光染色结果显示,补阳还五汤组大鼠较模型组梗死灶周围皮层及内囊APP、NogoA蛋白的阳性表达降低(P<0.05或P<0.01),内囊NgR蛋白阳性表达降低(P<0.05)。RT-PCR结果显示,补阳还五汤可下调梗死灶周围皮层NogoA、NgR基因表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论补阳还五汤能够有效减小脑缺血大鼠的梗死体积,改善脑血流灌注和脑组织微结构,减轻神经细胞损伤,促进轴突生长及微结构重塑。

痰火方改善脑缺血大鼠脑灌注及保护神经胶质细胞的作用

目的观察痰火方改善脑缺血大鼠脑灌注,保护神经胶质细胞的作用及机制。方法采用大脑中动脉线栓法建立脑缺血大鼠模型。按照随机数字表法将雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、痰火方高剂量组(3.68 g/kg)、痰火方中剂量组(1.84 g/kg)、痰火方低剂量组(0.92 g/kg)及金纳多组(0.06 g/kg)。采用神经功能缺损评分评价神经功能缺损症状,磁共振T2加权成像(T2WI)检测脑缺血大鼠梗死体积,三维时间飞跃(3D-TOF)磁共振血管成像(MRA)观察大鼠颅内血管信号,动脉自旋标记(ASL)分析损伤脑区血流灌注的变化,神经元特异性核蛋白(NeuN)、少突胶质细胞标志蛋白2′3′-环核苷酸3′-磷酸二酯酶(CNPase)免疫荧光染色分别检测神经元、少突胶质细胞损伤。结果与模型组比较,痰火方高剂量组大鼠脑缺血24、48、72 h神经功能缺损评分降低(P<0.05,P<0.01),痰火方中、低剂量组及金纳多组大鼠脑缺血48、72 h神经功能缺损评分降低(P<0.05)。与模型组比较,痰火方高剂量组大鼠梗死体积缩小(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠右前动脉、右前交通动脉相对血管信号降低(P<0.01)。与模型组比较,痰火方高、中、低剂量组及金纳多组大鼠右前交通动脉相对血管信号增强(P<0.01)。与模型组比较,金纳多组大鼠梗死灶区相对脑血流量(rCBF)增高(P<0.05),痰火方各剂量组及金纳多组大鼠梗死灶边缘区rCBF增高(P<0.01)。免疫荧光染色结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠梗死灶周围皮层NeuN、CNPase阳性表达降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,痰火方高剂量组及金纳多组大鼠梗死灶周围皮层NeuN、CNPase阳性表达升高(P<0.05,P<0.01),痰火方中剂量组大鼠梗死灶周围皮层CNPase阳性表达升高(P<0.05)。结论痰火方可改善脑缺血大鼠神经功能缺损症状,缩小梗死体积,改善脑灌注,减轻神经元、少突胶质细胞损伤。

痰火方对脑缺血大鼠Caspase-3、GFAP蛋白表达及血管新生的影响

目的观察痰火方对脑缺血模型大鼠Caspase-3、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达及血管新生的影响。方法将大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、痰火方低剂量组、痰火方中剂量组、痰火方高剂量组、金纳多组。除假手术组外, 其余各组采用线栓法建立大鼠中动脉栓塞模型。造模2 h后, 痰火方低、中、高剂量组分别灌胃0.92、1.84、3.68 g/kg痰火方干浸膏粉溶液, 金纳多组灌胃金纳多60 mg/kg, 每24 h给药1次, 连续给药3 d。假手术组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水。采用四肢对称性评分评价肢体功能症状, 采用免疫荧光染色法检测梗死灶周围组织GFAP、Caspase-3蛋白表达, 评价大鼠星形胶质细胞活化、神经细胞凋亡情况, 采用免疫荧光双标法检测血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)/硫酸软骨素蛋白多糖2(NG2)蛋白表达, 观察各组大鼠血管新生情况。结果与模型组比较, 术后48、72 h, 痰火方高剂量组大鼠四肢对称运动评分提高(P<0.01或P<0.05), 梗死灶周围皮层、纹状体Caspase-3阳性细胞数[皮层:(765.0±122.4)比(1 131.0±392.9)、纹状体:(895.9±389.8)比(1 401.9±453.1)]减少(P<0.05或P<0.01), CD31+/NG2+阳性细胞数[皮层:(1 355.0±257.9)比(825.4±308.1);纹状体:(1 290.9±400.9)比(675.2±259.7)]增多(P<0.01);梗死周围皮层GFAP阳性积分光密度[(4 210.00±1 226.38)比(7 935.78±2 001.98)]降低(P<0.01)。结论痰火方可减轻脑缺血大鼠肢体功能症状, 抑制星形胶质细胞活化, 下调Caspase-3表达, 促进血管新生。

补阳还五汤干预脑缺血大鼠视束损伤的作用及关键药理途径的生物信息学分析

目的 观察补阳还五汤干预脑缺血大鼠视束损伤的作用,并探讨补阳还五汤干预脑缺血视束损伤的有效成分、核心靶点及调控机制。方法 采用线栓法制备右侧大脑中动脉栓塞致脑缺血的大鼠模型。将24只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组(16.1 g/kg),每组各8只,连续灌胃30 d。采用横向弛豫时间定量成像(T2 mapping)检测视束损伤,弥散张量成像(DTI)结合弥散张量纤维束成像(DTT)分析视束微结构的改变。采用TCMSP、PubMed和中国知网数据库获取补阳还五汤有效成分及对应靶点,基于GeneCards、OMIM、DisGeNET、DrugBank数据库筛选缺血性视束神经损伤相关靶点,导入Cytoscape软件绘制活性成分-治疗靶点网络,运用STRING数据库构建蛋白互作网络(PPI),并进行蛋白簇聚类分析,基于Metascape数据库对核心蛋白簇进行KEGG通路分析。结果 T2 mapping显示,与假手术组相比,模型组大鼠视束区域rT2值升高(P<0.01);与模型组相比,补阳还五汤组大鼠视束区域rT2值降低(P<0.01)。DTI结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠及补阳还五汤组大鼠视束区域rFA值降低(P<0.01),rAD、rRD值增高(P<0.01);与模型组比较,补阳还五汤组大鼠视束区域rFA值升高(P<0.01),rAD、rRD值降低(P<0.01)。DTT结果显示,与假手术组比较,模型组与补阳还五汤组大鼠视束区域神经纤维的相对平均纤维束长度和密度均降低(P<0.05,P<0.01);与模型组相比较,补阳还五汤组大鼠视束区域神经纤维相对平均纤维束长度和密度均增加(P<0.05,P<0.01)。从补阳还五汤中筛选到与缺血性视束损伤相关的56个活性成分和400个潜在有效靶点,主要活性成分为黄芪甲苷Ⅳ、芍药苷和阿魏酸等,PPI核心基因为AKT1、TNF、TP53、CASP3、JUN等,PPI核心蛋白簇通过KEGG通路功能富集得到9条相关信号通路,在神经元、星型胶质细胞、小胶质细胞、少突胶质细胞中调控多种生物过程和分子功能,主要涉及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路、Toll样受体信号通路等,涉及细胞凋亡、能量代谢及炎性因子激活等重要生理生物过程。结论 补阳还五汤可减轻脑缺血大鼠视束神经损伤,促进视束超微结构损伤后的重塑,其干预缺血性视束损伤的作用可能是通过调控PI3K-Akt、丝裂原活化蛋白激酶、肿瘤坏死因子等多条信号通路影响神经元及胶质细胞功能来实现的。

三七“独入血分见知音”功用浅析

三七来源于五加科人参属植物三七的根和根茎,具有散瘀止血、消肿止痛、补虚强壮等功效。清代朱东樵谓三七"独入血分见知音",高度概括了三七的作用集中于血分,主要发挥止血、活血、补血三重作用,临床广泛应用于出血、瘀血、血虚等病证。三七的有效成分主要包括三七总皂苷、黄酮、挥发油、氨基酸等等,现代研究具有制止出血,降血脂、抗血栓、保护心脑血管及血液系统等多种药理作用。本文通过查阅本草及现代研究相关文献,阐释三七"独入血分见知音"的功用及现代研究进展,以期为三七的临床应用提供借鉴。