清肺通络合剂对气阴两虚兼痰热型社区获得性肺炎患者肠道菌群多样性的影响

目的 探讨中药清肺通络合剂(QFTLM)对气阴两虚兼痰热型社区获得性肺炎(CAP)患者肠道菌群多样性的影响。方法 采用前瞻性临床对照研究方法,根据患者采用的治疗方法不同,将23例气阴两虚兼痰热型CAP患者分为两组:予抗菌药物治疗组10例,予抗菌药物联合QFTLM治疗组13例。收集治疗前后患者粪便样本46份,利用PacBio测序平台进行16S rRNA测序,分析两组患者治疗前后样本中肠道菌群的组成、多样性和显著性差异物种。结果 (1)两组治疗前后肠道菌群的组成:在门水平为厚壁菌门、变形杆菌门、拟杆菌门、疣微菌门和放线菌门;在纲水平为梭菌纲、革兰阴性菌纲、芽孢杆菌纲、丹毒丝菌纲、拟杆菌纲、γ-变形杆菌纲、疣微菌纲和放线菌纲;在目水平为拟杆菌目、梭菌目、单胞菌目、肠杆菌目、乳杆菌目、丹毒丝菌目和颤螺菌目;在科水平为拟杆菌科、乳球菌科、肠杆菌科、韦荣球菌科、艾克曼菌科、毛螺菌科、喜热菌科、链球菌科、丹毒丝菌科和肠球菌科;在属水平为拟杆菌属、粪杆菌属、埃希氏菌属、罕见小球菌属、巨单胞菌属、艾克曼菌属、梭菌属、链球菌属和肠球菌属。(2)两组治疗前后梭菌纲的相对丰度抗菌药物组治疗前后为(0.48±0.24)比(0.17±0.14)(P<0.01);抗菌药物联合QFTLM组治疗前后为(0.42±0.20)比(0.17±0.15)(P<0.05)。(3)两组治疗后α多样性较治疗前显著减少:抗菌药物组治疗前后Ace指数为(96.40±9.56)比(63.33±7.56)(P<0.05),PD_whole_tree指数为(6.43±0.56)比(4.63±0.55)(P<0.05);抗菌药物联合QFTLM组治疗前后Shannon指数为(3.82±0.27)比(2.79±0.40)(P<0.05)。两组治疗前后β多样性差异不显著,主坐标分析显示第一主成分贡献率为30.74%。(4)两组显著性差异物种分析结果显示:抗菌药物组治疗前为厚壁菌门、梭菌纲、梭菌目和瘤胃球菌属,治疗后为链球菌科、链球菌属和唾液链球菌种;抗菌药物联合QFTLM组治疗前为梭菌纲、梭菌目、瘤胃球菌科和毛螺菌科,治疗后为肠球菌科、肠球菌属、鸟肠球菌种和多形拟杆菌种。结论 气阴两虚兼痰热型CAP患者经抗菌药物治疗,肠道菌群α多样性明显减少,显著性差异物种发生改变。QFTLM无法完全改变肠道菌群α多样性减少,但可以增加肠球菌和多形拟杆菌的相对丰度,改变显著性差异物种。

番茄红素对帕金森模型小鼠氧化应激损伤及神经行为的影响

目的:探究番茄红素对鱼藤酮诱导帕金森小鼠氧化应激损伤及神经行为的影响及可能机制。方法:成年雄性C57BL/6小鼠40只,随机分为空白对照、鱼藤酮、番茄红素、番茄红素+鱼藤酮4组。实验处理5周后,化学比色法检测脑组织中MDA含量及SOD、GSH-Px和CAT活力判定氧化应激损伤水平;水迷路分析小鼠神经行为改变;免疫组化分析TH、α-SYN和LC3-B阳性表达变化。结果:与空白对照比较,帕金森小鼠黑质及纹状体MDA含量显著增加,SOD、GSH-Px和CAT酶活力显著下降(P<0.05);而番茄红素干预后,黑质及纹状体MDA含量显著下降,SOD、GSH-Px和CAT酶活力显著增加(P<0.05)。水迷路分析结果发现,帕金森小鼠平均逃逸时间和靶象限活动时间显著高于空白对照组(P<0.05);而番茄红素干预后,小鼠平均逃逸时间和靶象限活动时间显著下降(P<0.05)。免疫组化结果发现,番茄红素干预后帕金森小鼠黑质及纹状体TH免疫阳性神经元数显著增加(P<0.05),α-SYN免疫阳性细胞表达显著下降(P<0.05),LC3-B免疫抗原明显下调(P<0.05)。结论:番茄红素能有效降低氧化应激损伤及中脑黑质、纹状体多巴胺DA能神经元的自噬活性,对帕金森PD模型小鼠DA能神经元具有一定的保护作用。

社区全科医师糖尿病三级预防知识知晓率调查

目的了解湖州市社区全科医师糖尿病三级预防知识的知晓率。方法随机抽取湖州市16家社区卫生服务中心的社区全科医师进行糖尿病三级预防知识问卷调查,对调查结果进行统计分析。结果被调查的社区全科医师糖尿病三级预防知识总体知晓率为47.4%,第一级预防知识知晓率为34.7%;第二级预防知识知晓率为46.8%;第三级预防知识知晓率为52.3%。其中饮食干预和并发症筛查知晓率较低,分别为19.1%和17.7%,糖尿病诊断和胰岛素治疗知晓率较高,分别为52.7%和58.7%。不同年龄、工作年限、学历和职称的社区全科医师糖尿病三级预防知识知晓率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论湖州市社区全科医师糖尿病三级预防知识知晓率普遍较低,需要加强对不同层次社区全科医师糖尿病三级预防知识的系统培训。

松树皮提取物对帕金森模型小鼠行为损伤及氧化应激的作用

目的探讨松树皮提取物对鱼藤酮诱导的帕金森模型小鼠行为损伤及氧化应激的保护作用及可能机制。方法成年雄性C57BL/6小鼠40只,随机分为空白对照组(对照组),鱼藤酮处理组,松树皮提取物干预组,松树皮提取物+鱼藤酮处理组4组。实验处理5 w后,水迷宫实验分析小鼠的行为改变;化学比色法检测脑组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)酶活力判定氧化应激损伤水平;免疫组化分析鼠酪氨酸羟化酶(TH)、α-突触核蛋白(α-SYN)和兔自噬微管相关蛋白(LC3-B)阳性表达变化。结果水迷宫试验分析结果显示,帕金森模型小鼠平均逃逸时间和靶象限活动时间显著高于对照组(P<0.05);而松树皮提取物干预后,小鼠平均逃逸时间和靶象限活动时间显著下降(P<0.05)。与对照组比较,帕金森模型小鼠黑质及纹状体MDA含量显著增加,SOD、GSH-Px和CAT酶活力显著下降(P﹤0.05);而松树皮提取物干预后,黑质及纹状体MDA含量显著下降,SOD、GSH-Px和CAT酶活力显著增加(P﹤0.05)。免疫组化结果显示,松树皮提取物干预后的帕金森模型小鼠黑质TH免疫阳性神经元数显著增加(P﹤0.05),α-SYN免疫阳性细胞表达显著下降(P﹤0.05),LC3-B免疫抗原明显下调(P﹤0.05)。结论松树皮提取物能有效降低帕金森模型小鼠的氧化应激损伤及中脑黑质、纹状体多巴胺(DA)能神经元的自噬活性,对帕金森病(PD)模型小鼠DA能神经元具有一定的保护作用。

高脂饮食对自身免疫性肝炎肝损伤与焦亡的研究

目的探讨高脂饮食（high-fat diet, HFD）对小鼠自身免疫性肝炎（autoimmune hepatits, AIH）肝脏损伤的影响。方法50只C57BL/6雄性小鼠选取6只为S-100制备组，剩余小鼠用随机数字法随机分成标准饮食组（standard chow, SC）、HFD组、AIH＋SC组及AIH＋HFD组，喂饲1周后进行AIH造模，4周后处死小鼠，收集小鼠肝脏、脾脏、血清，进行HE染色观察肝组织病理学改变；检测小鼠血清中ALT和AST变化；蛋白质印迹法和实时PCR法检检测肝组织中Nod样受体蛋白3（NLR pyrin domain containing 3, NLRP3）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（cysteinyl aspartate specific proteinase, Caspase-1）的表达；ELISA试剂盒检测血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌量；流式细胞仪分析脾脏中Th17细胞的数量。各组间均数比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），每两组间比较方差齐性采用SNK-q检验，方差不齐采用非参数检验。结果HFD组肝组织可见少许脂肪空泡形成，AIH＋SC组可见血管周围炎性反应，AIH＋HFD组可见炎性反应加重，出现少许空泡样脂肪变性。与SC组小鼠相比，AIH＋SC组和HFD组小鼠的血清ALT和AST水平有所增加，AIH＋HFD组上升最为明显，各组均数相比差异均具有统计学意义（F值分别为57.12和37.58，P均〈0.05）。SC组外周血中Th17占CD4＋T细胞的比例为（2.98±0.90）%，HFD组为（6.89±0.99）%，AIH＋SC组为（6.47±1.08）%，AIH＋HFD组为（9.96±0.83）%，各组之间比较及两两比较差异有统计学意义（F＝54.05，P〈0.05）。SC组各血清细胞因子浓度分别为IL-1β [（7.62±2.81） ng/L]、IL-6 [（106.54±53.08） ng/L]、TNF-α [（107.26±36.20） ng/L]；HFD组分别为IL-1β [（25.06±7.09） ng/L]、IL-6 [（220.11±47.41） ng/L]、TNF-α [（273.77±33.62） ng/L]；AIH＋SC组分别为IL-1β [（17.49±5.68） ng/L]、IL-6[（260.73±50.29） ng/L]、TNF-α [（250.49±81.63） ng/L]；AIH＋HFD分别为IL-1β [（52.04±10.22） ng/L]、IL-6 [ （785.93±70.91） ng/L]、TNF-α [（913.97±64.57） ng/L]，各组之间差异均有统计学意义（F值分别为44.66、242.15、233.49，均P〈0.05）。HFD组和SC组相比、AIH＋HFD组与AIH＋SC组相比，NLRP3、Caspase-1表达明显上升，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论HFD促进AIH，可能是通过促炎因子分泌、促进Th17细胞活化和促进炎症小体NLRP3激活进而促进细胞焦亡。

头孢噻肟联合左氧氟沙星治疗对社区获得性肺炎患者肠道菌群的影响

目的探讨头孢噻肟联合左氧氟沙星治疗社区获得性肺炎(CAP)对患者肠道菌群结构和多样性的影响。方法选择2018年10月至12月浙江省立同德医院感染科收治的CAP住院患者6例,予头孢噻肟注射液2.0 g(1次/8 h)联合左氧氟沙星注射液0.5 g(1次/d)静脉给药治疗,留取患者抗菌药物治疗前和经7 d治疗后粪便样本共12份,采用自身配对设计研究,对治疗前后的粪便样本进行16S核糖体RNA(16S rRNA)测序分析。结果⑴治疗前和治疗后患者肠道菌群的组成结构:在门水平:厚壁菌门59.2%vs 40.8%,变形菌门18.6%vs 35.5%,拟杆菌门14.8%vs 20.8%,放线菌门5.6%vs 1.2%;在科水平:瘤胃菌科34.5%vs 13.0%、毛螺菌科15.9%vs 9.7%、韦荣球菌科1.8%vs 3.3%、乳杆菌科0.3%vs 8.0%、肠球菌科0.02%vs 5.2%、链球菌科2.9%vs 1.1%、肠杆菌科16.4%vs 34.6%、拟杆菌科13.3%vs 16.8%、紫单胞菌科0.3%vs 3.4%、红蝽杆菌科4.4%vs 0.5%。治疗前后患者肠道菌群的组成结构比较差异无统计学意义(P>0.05)。⑵治疗前和治疗后患者肠道菌群的多样性:OTU值(150.5±59.0)vs(93.2±34.1),t=2.72,P=0.04;Chao1指数(169.25±49.61)vs(117.92±35.06),t=3.22,P=0.02;shannon指数(3.61±0.83)vs(2.31±0.73),t=4.54,P=0.01;simpson指数(0.80±0.10)vs(0.61±0.20),t=2.76,P=0.04。治疗前后患者肠道菌群的多样性比较差异均有统计学意义(P<0.05)。⑶脱硫弧菌为治疗前和治疗后组间差异有统计学意义的菌群,LDA值=2.03,P=0.02。结论头孢噻肟联合左氧氟沙星治疗一周对CAP患者肠道菌群的多样性有显著影响,治疗后肠道菌群的多样性明显减少,脱硫弧菌是治疗前和治疗后差异有统计学意义的菌种。

丁酸钠对自身免疫性肝炎辅助性T淋巴细胞17及肝脏Toll样受体4信号通路的影响

目的了解丁酸钠对小鼠自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis, AIH）Th17的调节作用及对肝脏Toll样受体（Toll-like receptors, TLR）4炎症通路的影响。 方法将50只6周龄雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为对照组、AIH组、丁酸钠组和高纤维组，每组10只，余10只小鼠用于提取肝脏特异性抗原S-100。诱导AIH模型建立后，丁酸钠组予500 mg/（kg·d）丁酸钠灌胃治疗，高纤维组予订制高纤维饲料喂养，持续3周后处死。观察各组小鼠肝脏病理变化，血清ALT、AST、IL-17A和TNF-α水平，脾脏Th17比例、肝脏TLR4、髓样分化因子（myeloid differentiation factor, MyD）88表达情况。对各样本均数进行正态性检验和方差齐性分析，各样本均数比较采用单因素方差分析。结果丁酸钠组及高纤维组小鼠肝脏炎症细胞浸润及细胞坏死明显比AIH组减轻。对照组、AIH组、丁酸钠组及高纤维组ALT分别为（24.833±2.229）、（88.333±9.543）、（27.167±3.189）和（29.833±6.113） U/L，AST分别为（97.000±14.953）、（285.000±35.434）、（139.500±38.976）和（127.167±28.687） U/L，各组间差异均有统计学意义（F值分别为156.491、44.118，均P〈0.01）。丁酸钠组和高纤维组小鼠脾脏Th17比例及其转录因子维甲酸相关孤儿受体γt明显低于AIH组，差异均有统计学意义（F值分别为21.780和68.283，均P〈0.05）；AIH组小鼠肝脏TLR4和MyD88蛋白表达明显高于对照组，丁酸钠组及高纤维组表达则被抑制，差异均有统计学意义（F值分别为26.235、28.293，均P〈0.01）；与AIH组相比，丁酸钠组及高纤维组肝脏和外周血中IL-17和TNF-α表达均降低。结论丁酸钠对自身免疫性肝炎进行免疫调节，改善肝脏炎性反应。

骨髓间充质干细胞源性外泌体对酒精性肝损伤的保护作用

目的探讨骨髓间充质干细胞源性外泌体(mesenchymal stem cells derived exosomes,MSC-exosomes)对酒精性肝损伤的保护作用。方法将18只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠分成对照组、模型组和外泌体组,每组6只。模型组和外泌体组小鼠Lieber-DeCarli饲料饲养4周并在第26、27和28天分别进行乙醇灌胃构建酒精性肝损伤模型,而对照组小鼠给予等热量的葡聚糖麦芽糖。外泌体组小鼠分别在实验第14和26天尾静脉注射MSC-exosomes进行治疗。实验后,检测各组小鼠ALT和AST水平,观察肝组织病理改变,蛋白质印迹法检测核因子相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf-2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、CD63、CD81、TSG101和细胞色素C蛋白质表达情况,实时定量PCR分别检测Nrf-2、HO-1、IL-10和IL-17的mRNA变化,试剂盒分别检测血清IL-10、IL-17水平和肝组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)氧化应激指标,流式细胞仪分析肝脏Treg和Th17数量。各组之间比较采用单因素方差分析。结果MSC-exosomes表达阳性标志物CD63、CD81和TSG101,但不表达阴性标志物细胞色素C。模型组小鼠血清ALT和AST分别为(87.3±25.1)U/L和(223.2±43.5)U/L,外泌体组小鼠血清ALT和AST分别为(47.7±12.0)U/L和(128.2±33.6)U/L ,两组比较差异均有统计学意义(F值分别为12.818和12.226,均P<0.05)。与对照组相比,模型组小鼠肝脏SOD活性和GSH水平明显降低,MDA水平明显升高;而外泌体组的SOD活性和GSH水平明显高于模型组,MDA水平明显低于模型组,比较差异均有统计学意义(F值分别为4.245、24.074和36.675,均P<0.05)。与对照组相比,模型组小鼠肝内Nrf-2和HO-1蛋白表达显著降低,而经MSC-exosomes治疗后表达明显升高,比较差异均有统计学意义(F值分别为33.623和14.960,均P<0.05);各组间Nrf-2及HO-1 mRNA表达趋势与蛋白质表达趋势相同(F值分别为20.784和276.336,均P<0.05)。正常组Treg/Th17比值为4.3±0.9、模型组为0.4±0.2、外泌体组为3.4±0.5,各组间比较差异有统计学意义(F=64.227,P<0.05)。与对照组相比,模型组小鼠血清IL-17蛋白水平和肝内IL-17基因表达明显升高,而MSC-exosomes治疗后血清IL-17蛋白水平和肝内IL-17基因表达显著降低,比较差异均有统计学意义(F值分别为15.581和40.095,均P<0.05)。模型组小鼠血清IL-10蛋白水平和肝内IL-10基因表达明显降低,而MSC-exosomes治疗后血清IL-10蛋白水平和肝内IL-10基因表达显著升高,比较差异均有统计学意义(F值分别为98.268和153.743,均P<0.05)。结论MSC-exosomes可能通过激活Nrf-2/HO-1抗氧化通路及调节肝脏Treg/Th17比例,从而改善酒精诱导的肝脏损伤。

曲古抑菌素A对s-100诱导的小鼠自身免疫性肝炎的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂——曲古抑菌素A（trichostatin A，TSA）对s-100诱导的小鼠自身免疫性肝炎的影响。 方法将26只6周龄C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和TSA组，每组6只，另外8只小鼠用于提取肝组织s-100蛋白。模型组和TSA组小鼠腹腔注射s-100和完全弗氏佐剂，建立小鼠自身免疫性肝炎模型，第21天，TSA组小鼠连续7 d腹腔注射TSA 2 mg/（kg·d），对照组和模型组小鼠腹腔注射等量含1%二甲基亚砜的0.9%氯化钠溶液。检测各组小鼠血清ALT和AST水平，观察肝组织病理学。蛋白质免疫法检测肝组织内核因子-κB和乙酰化组蛋白H3；实时定量PCR检测肝组织内核因子-κB、HDAC3、TLR4及TNF-α mRNA水平；ELISA法检测血清TNF-α。各组间比较采用t检验。 结果对照组、模型组和TSA组小鼠血清ALT分别为（122.00±45.29）、（459.33±167.58）和（217.33±49.25） U/L，对照组、TSA组与模型组比较，差异均有统计学意义（t值分别为4.76、3.41，均P〈0.05）；AST分别为（127.83±18.55）、（389.67±87.14）和（249.50±71.72） U/L，与模型组比较，差异均有统计学意义（t值分别为7.20、3.04，均P〈0.05）。TSA减轻了s-100诱导的肝组织病理炎症；模型组小鼠肝组织中核因子-κB蛋白、核因子-κB mRNA、TNF-α mRNA、HDAC3 mRNA和TLR4 mRNA的相对表达量分别为2.43±0.42、9.51±0.36、10.53±0.74、2.90±0.22和4.50±0.73，较对照组1.28±0.49、1.28±0.49、1.06±0.14、1.72±0.73和1.01±0.31明显升高（t值分别为4.68、37.14、30.69、4.33和10.85，均P〈0.05），TSA组核因子-κB蛋白、核因子-κB mRNA、TNF-α mRNA、HDAC3 mRNA及TLR4 mRNA相对表达量分别为1.30±0.36、1.30±0.36、2.38±0.36、2.13±0.32和2.40±0.51，也明显低于模型组（t值分别为4.58、30.62、24.12、2.81、5.81，均P〈0.05）。对照组、模型组和TSA组小鼠血清TNF-α分别为（122.37±68.12）、（1 361.44±207.13）和（691.64±162.12） ng/L，与模型组比较，差异均有统计学意义（t值分别为13.92、6.24，均P〈0.05）。模型组乙酰化组蛋白H3蛋白相对表达量为1.10±0.08，高于对照组的0.96±0.17（t＝2.27，P〈0.05），TSA组为1.30±0.04较模型组表达更高（t＝－0.30，P〈0.05）。 结论TSA可能通过增强组蛋白乙酰化、抑制核因子-κB通路及炎性因子，缓解自身免疫性肝炎。