浙江省5例输入性疟疾误诊病例的病原学诊断分析

目的对浙江省5例输入性疟疾误诊病例进行病原学诊断和鉴定。方法收集浙江省5例前期误诊为输入性间日疟患者的流行病学资料和血样,进行镜检、快速疟疾诊断试纸条检测和巢氏PCR检测(采用疟原虫属特异性引物和种特异性引物),并将PCR扩增片段测序后,与GenBank中已有的序列进行Blast比对分析。结果 5例患者均为自非洲的归国人员,其中3例归国前有疟疾发病史。镜检结果显示,4份血样为卵形疟原虫感染,1份(病例1)为卵形疟原虫和间日疟原虫混合感染。快速疟疾诊断试纸条检测结果均为疟原虫阴性。巢氏PCR检测结果显示,5份血样的全血DNA均扩增出卵形疟原虫特异性条带(800 bp),其中1份血样(病例1)同时还扩增出间日疟原虫特异性条带(120 bp)。测序序列经Blast比对,5份血样的扩增片段序列与卵形疟原虫SSU RNA部分序列的同源性均为99%,其中1份血样(病例1)的另一扩增片段序列与间日疟原虫SV5 18S rRNA部分序列的同源性为99%。结论 5例输入性疟疾病例,4例为卵形疟原虫感染,1例为卵形疟原虫和间日疟原虫混合感染。

1例人感染巴贝虫的诊断与病原体鉴定

目的对首诊为疟原虫感染的巴贝虫感染者进行确诊及临床诊治情况分析。方法收集患者的临床发病资料,并对患者及其居住环境进行流行病学调查;采集骨髓样和血样,吉氏染色涂片后镜检;并以巴贝虫(Babesia)18s核糖体RNA属和种特异性引物分别扩增患者血样基因组DNA,扩增产物测序后进行BLAST分析。结果该患者反复发热20余天,出现贫血(红细胞2.59×1012和血红蛋白5.5 g/L),CT示肝脾肿大。骨髓涂片和外周血涂片吉氏染色后镜检,发现有疑似恶性疟原虫或巴贝虫感染。经流行病学调查,该患者无外出史,但有输血史和被蜱叮咬史。患者血样经巴贝虫属和种特异性引物扩增,分别出现约400 bp和1 600 bp条带。测序的序列经BLAST分析,与田鼠巴贝虫(Babesia microti)的同源性为99%,登录号分别为JQ609305和JQ609304。结论结合患者的临床发病资料、流行病学史、病原学和分子生物学检测结果,确诊为田鼠巴贝虫感染。

温州首例输入性卵形疟病例的诊断分析

温州首次发现1例输入性卵形疟病例,该患者曾在非洲刚果人民共和国务工2年。回国后3个月余后,出现发热等症状,经外周血涂片镜检和PCR检测诊断为卵形疟。随后给予"氯喹+伯氨喹"8日疗法治疗后,症状好转。

浙江省5例输入性卵形疟原虫wallikeri亚种感染病例的鉴定

目的对浙江省5例镜检阳性、常规巢式PCR检测阴性的输入性疟疾病例进行卵形疟原虫wallikeri亚种(Plasmodium ovale wallikeri)的鉴定与分析。方法收集5例待检病例的流行病学资料和血样,进行镜检、快速疟疾诊断试纸条检测(RDT)和巢式PCR检测(采用疟原虫属特异性引物、种特异性引物和卵形疟原虫wallikeri亚种特异性引物),将PCR扩增片段测序后,与Gen Bank中相关序列进行Blast比对分析。结果 5例疟疾病例均为自非洲归国人员,并有疟疾发病史。镜检结果显示,5例患者均疟原虫阳性。RDT检测结果为泛疟原虫阳性2例,阴性3例。应用常规巢式PCR检测5份血样DNA,4种疟原虫均为阴性。改用卵形疟原虫wallikeri亚种特异性引物进行扩增,结果均为阳性。将5份血样的阳性扩增产物进行测序,所得序列经Blast分析,与Gen Bank中编号为KF219561.1的卵形疟原虫wallikeri亚种clone RSH10 18S核糖体RNA基因的序列一致性均达100%。结论综合镜检和PCR检测结果,证实该5例镜检疟原虫阳性、常规PCR检测阴性的病例均为卵形疟原虫wallikeri亚种感染。

2例粪类圆线虫感染的诊治报告

病例1，女，4l岁，浙江省嘉兴市南湖区人，农民。因腹部不适。于2011年10月6日就诊于嘉兴市南湖区新丰医院．腹部B超结果未见明显异常，未确诊。10月中旬患者自行服用肠虫清，0.4g顿服，症状未见好转。10月22日至嘉兴武警医院就诊，以“上腹痛待查”收治人院．常规检查未发现明显异常，粪检阴性。经数天治疗无明显好转．于10月28日出院。患者出院后腹痛加剧，11月2日赴上海市第一人民医院就诊，以“中上腹痛伴腹泻多天”收治入院。次日血常规示，嗜酸粒细胞27．1％，中性粒细胞37.3％。

2017—2020年浙江省输入性疟疾疫情特征及病例诊断分析

目的分析2017—2020年浙江省输入性疟疾疫情特征和病例诊断情况,为该省输入性疟疾防控提供科学依据。方法从中国疾病预防控制信息系统寄生虫病防治信息管理系统中收集2017—2020年浙江省报告的疟疾病例调查数据,对输入性疟疾疫情和病例时间、地区、人群分布,以及病例初诊和确诊情况进行分析。结果 2017—2020年浙江省累计报告593例疟疾病例,均为境外输入性病例;其中男性532例、女性61例,平均年龄41岁。病例主要来自非洲国家(93.93%),感染虫种包括恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫和混合感染,其中恶性疟病例占比最高(76.73%,455/593)。病例在县级、地市级疾病预防控制(疾控)机构和出入境检验检疫部门初诊为疟疾的正确率最高,均为100%。医疗机构和疾控机构初诊当天即确诊的疟疾患者比例分别为41.48%(207/499)和66.18%(45/68)(χ^(2)=14.779,P <0.001)。2017—2020年浙江省输入性疟疾病例从发病到初诊、从初诊到确诊中位时间(四分位间距)[M(Q_R)]分别为1(2)、1(2)d,重症病例从初诊至确诊时间间隔[2(3)d]显著长于非重症病例[1(2)d](Z=-3.002,P <0.05)。结论浙江省输入性疟疾防治面临严峻挑战,仍需加强消除疟疾后监测工作;同时应提高疟疾流行区归国人员及时就诊意识,并提高医务人员疟疾诊断能力。

浙江省中部及南部地区巴贝虫自然疫源地调查

目的调查浙江省中部及南部地区巴贝虫动物宿主和传播媒介感染情况,对浙江省确诊的1例人感染巴贝虫的18S rRNA基因序列与Gen Bank中巴贝虫序列进行比对,了解巴贝虫亲缘关系和进化特征。方法采集浙江省确诊的病例居住地以及浙江省中部及南部地区的动物宿主抗凝血样和蜱虫,提取DNA,以巴贝虫18S rRNA基因序列引物进行PCR扩增、测序,并对测序序列进行分析比对,确认感染虫种;在GenBank数据库中查询巴贝虫属、种的18S rRNA基因序列信息,以及不同动物宿主、不同地理来源的田鼠巴贝虫种内18S rRNA序列信息,进行BLAST比对分析,并构建系统进化树。结果采集的261份生物样品中有37份扩增出阳性条带,其中动物宿主抗凝血阳性率为14.2%(32/225),蜱阳性率为13.9%(5/36)。对部分阳性样品进行测序,获得有效测序序列20份,经序列比对分析,共发现田鼠巴贝虫(Babesia microti)5份,均来自鼠类血样;此外,在鼠、牛等宿主/媒介体内还分别检测到肉孢子虫属(Sarcocystis sp.)4份、肝簇虫属(Hepatozoon sp.)2份,球虫(Coccidia sp.)1份、东方泰勒虫(Theileria orientalis)阳性5份、水牛泰勒虫(Theileria buffeli)2份和驽巴贝虫(Babesia caballi)1份。浙江省确诊的人巴贝虫序列与Gen Bank中不同宿主、地理来源田鼠巴贝虫18S rRNA序列的同源性为98.1%~99.8%,与日本、中国云南的人源以及福建、浙江杭州、天台、仙居的鼠源田鼠巴贝虫同属一个分支,而我国的CNMM-2株和新疆1647株与美国GI株和德国Jena株的遗传距离较近。结论在浙江省中部及南部地区的啮齿类小型哺乳动物中发现多份田鼠巴贝虫的自然感染。

输入性卵形疟原虫细胞色素b、细胞色素c氧化酶Ⅰ和乳酸脱氢酶基因单核苷酸多态性分析

目的对卵形疟原虫(Plasmodium ovale)curtisi亚种和wallikeri亚种编码的细胞色素b(cytochrome b,Cytb),细胞色素c氧化酶Ⅰ(cytochrome c oxidaseⅠ,CoxⅠ)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因的单核苷酸多态性进行分析。方法选择浙江省疟疾诊断参比实验室2011-2014年确诊的卵形疟原虫感染患者血样,提取卵形疟原虫DNA,巢式PCR扩增卵形疟原虫Cytb、CoxⅠ和LDH基因的部分片段,对扩增产物进行双向测序。测序序列经校对、拼接后,应用MEGA软件对测序序列和相应的氨基酸序列进行比对,分析单核苷酸多态性位点以及氨基酸突变位点。结果 19例卵形疟原虫感染者(其中curtisi亚种11例,wallikeri亚种8例)均为赴非洲返国人员。PCR扩增Cytb、CoxⅠ和LDH基因的产物长度分别为735、1 323和355 bp。curtisi和wallikeri两个亚种在Cytb、CoxⅠ和LDH基因分别发现10、13、13个单核苷酸二态性位点,且大多数的二态性位点属于同义突变。此外,两个亚种内部也存在核苷酸多态性,同时发现1例血样的CoxⅠ基因存在693个碱基的缺失。结论对卵形疟患者血样的Cytb、CoxⅠ和LDH基因进行了单核苷酸多态性分析,丰富了卵形疟原虫基因多态性信息。

浙江省2012—2020年输入性疟疾重症病例流行特征分析

目的了解浙江省2012—2020年输入性重症疟疾病例的流行特征和影响因素。方法收集2012—2020年浙江省报告的输入性重症疟疾病例资料,采用SPSS 20.0软件描述性分析重症疟疾种类、三间分布、感染地来源、诊断时间间隔,Logistic回归分析导致重症疟疾的影响因素。结果2012—2020年浙江省共报告输入性重症疟疾病例127例,占报告疟疾病例总数的7.96%(127/1596),全部为境外输入性病例,其中恶性疟107例(占84.25%)、间日疟11例(占8.66%)、卵形疟7例(占5.51%)、混合感染2例(占1.57%)。重症疟疾病例分布于浙江省11个地市,其中报告重症病例数前3位的地区为杭州(27例)、台州(24例)、温州(22例),重症病例数占报告病例总数前3位的地区为台州(17.65%,24/136)、宁波(13.45%,16/119)和温州(11.64%,22/189)。1月、10月及12月重症病例数占当月总报告病例数的比例均超过10%。重症疟疾病例中,男性116例,女性11例,男女性别比为10.55:1;30~59岁重症病例数最多,共98例(占77.17%);职业主要为务工和经商,共114例(占89.76%);外籍重症疟疾病例9例。死亡2例,2013、2016年各报告1例。93.70%(119例)重症疟疾病例来自非洲国家输入,重症疟疾病例数输入居前3位的国家为尼日利亚(35例,27.56%)、赤道几内亚(13例,10.24%)、刚果(金)(11例,8.66%)。发病到初诊间隔、初诊到确诊间隔中位数分别为1 d和1.5 d,重症病例初诊至确诊时间长于非重症病例(Z=-3.285,P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,年龄(OR=1.022,95%CI:1.004~1.041)、初诊到确诊间隔时间(OR=1.046,95%CI:1.004~1.089)是导致重症疟疾的危险因素;外籍(OR=0.488,95%CI:0.241~0.990)、有疟疾病史(OR=0.598,95%CI:0.399~0.895)不易导致重症疟疾。结论浙江省输入性疟疾重症病例主要分布于杭州、台州、温州等地,人群分布以男性、30~59岁、务工和经商为主,主要来自非洲国家输入,年龄和初诊到确诊间隔时间是导致重症疟疾的危险因素。

西湖区首例输入性卵形疟病例诊疗分析

目的分析杭州市西湖区首例输入性卵形疟病例诊疗过程。方法收集病例资料和流行病学资料,采集患者抗凝血样,结合镜检和巢式PCR检测结果确诊后规范治疗。结果该患者曾在非洲尼日利亚务工6年,有疟疾发作史,回国后30 d出现发热等症状,经外周血涂片镜检和PCR检测诊断为卵形疟,随后给予磷酸氯喹片3 d加磷酸伯氨喹片8 d疗法治疗后,患者痊愈。结论根据镜检和PCR检测结果,确诊该病例为卵形疟原虫感染。