桑叶粗多糖最佳提取工艺研究

为探究桑叶粗多糖最佳提取工艺,利用正交试验设计对桑叶粗多糖的提取工艺进行优化。以桑叶粗多糖得率为评价指标,以加水倍数、煎煮时间、煎煮次数为考察因素,设计3因素3水平正交试验,采用苯酚一硫酸比色法进行桑叶粗多糖含量测定,比较得出桑叶水提物的最佳制备工艺,并在此基础上考察不同浓度乙醇对桑叶粗多糖提取的影响。结果显示,煎煮次数对桑叶粗多糖提取率影响最大,当加水倍数为25倍,煎煮时间为2h,煎煮2次时桑叶水提物中桑叶粗多糖提取率最高,为4.94%。但结合影响因素分析,最终确定桑叶水提物的最佳提取工艺为加25倍水,煎煮2h,煎煮3次。乙醇浓度对桑叶粗多糖的含量及得率影响很大,70%乙醇醇沉所得水提物中桑叶粗多糖质量最大,40%乙醇醇沉所得桑叶粗多糖含量最高,平均含量达41.5%,显著高于其他乙醇浓度(P<0.05),提示乙醇浓度越高,桑叶粗多糖含量越低,但得率越高。桑叶粗多糖最佳提取工艺为:加水倍数为25倍,煎煮时间2h,煎煮3次,采用70%乙醇醇沉。

硫酸头孢喹肟混悬液在猪体内的药物动力学研究

以健康猪为试验动物,按随机交叉设计试验,肌肉注射头孢喹肟混悬液和静脉注射头孢喹肟溶液,研究其在猪体内的药物动力学。结果表明:肌肉注射的主要药物动力学参数,分布半衰期(T1/2α)为1.33 h,消除半衰期(T1/2β)为4.92 h,表观分布容积(Vd)为0.34 L.kg-1,曲线下面积(AUC)为17.22μg.h.mL-1,达峰时间(tmax)为0.83 h,峰浓度(cmax)为3.36μg.mL-1,生物利用度(F)为93.87%。静脉注射的主要药物动力学参数,T1/2α为0.30 h,T1/2β为2.32 h,Vd为0.13 L.kg-1,AUC为18.35μg.h.mL-1。硫酸头孢喹肟混悬液在健康猪体内的药物动力学特征可归纳为:肌注吸收迅速,达峰时间短,生物利用度高,有效血药浓度可维持24 h。

我国部分地区鸡新城疫病毒流行株遗传变异分析

将近年来从不同地区临床病例中分离鉴定的10株鸡新城疫病毒(NDV)流行株,用RT-PCR方法分别扩增出大小为535 bp的F基因重要功能区,并克隆到pGEM-T载体上,经酶切分析结合核苷酸序列测定而确诊。10株分离株核苷酸序列同源性达到81.9%～99.4%,其中8个分离株F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为:112R-R-Q/R-K/R/R/F117,为NDV强毒株,且具有基因Ⅶ型的典型特征,即在101位和121位氨基酸残基分别为K(赖氨酸)和V(缬氨酸);其余2株病毒F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为:112G-R-Q-G-R-L117,表明它们为NDV弱毒株,在13位和17位氨基酸分别为M(蛋氨酸)和I(异亮氨酸),属于基因Ⅱ型。根据上述测序结果并参照已发表NDV F基因序列绘制出遗传进化树,遗传进化树显示,上述8个强毒株和台湾95年分离株同源性较高,而2个弱毒株与La Sota株同源性较高。

肠炎沙门菌SEF14菌毛的抽提、纯化及生物学活性检测

试验从肠炎沙门菌国内标准株50336中抽提和纯化SEF14菌毛,并制备SEF14蛋白鼠源高免血清。结果发现,肠炎沙门菌在CFA培养液中,静止培养50h左右,SEF14菌毛表达量相对较多,在机械高速匀浆后,经进一步的透析纯化,得到较纯的SEF14菌毛蛋白,蛋白大小和相关报道一致,约14ku左右。Western-blotting检测发现纯化的重组蛋白rSEFA(体外表达的SEF14菌毛主要亚单位蛋白SEFA)免疫小鼠得到的高免血清能识别标准株肠炎沙门菌SEF14菌毛蛋白以及纯化的重组蛋白rSEFA,说明体外抽提的SEF14菌毛蛋白和体外表达的rSEFA蛋白同样具有较好的免疫原性和反应原性。

高职院校“校中厂”式实训基地运行机制探索——江苏畜牧兽医职业技术学院为例

积极探索高职院校"校中厂"式实训基地建设的校企组合新模式,构建"产学研"结合办学机制,强化实践体系的建设,是高职院校培养高技能专门型人才的关键举措。校内实训基地的运行和管理既不同于传统的实验室建设,也与纯粹的企业管理也存在着差异,校企互聘式市场化运作是高职院校校内实训基地管理的有效方法。本文通过对江苏畜牧兽医职业技术学院校内实训基地——江苏倍康药业的校企互聘运行机制进行阐述和探索,旨在为高职院校的实训基地建设提供积极参考。

复方中药涂膜剂蛇床子素体外透皮效果观察

评价了复方蛇床子涂膜剂经奶牛皮肤的体外效果,将制备的复方蛇床子涂膜剂置于牛皮表皮上方透皮装置的给药室,用HPLC法测定涂抹剂中的蛇床子素的透皮效果。蛇床子素经牛皮渗透到表皮下层的接受池。接受池为40%乙醇。整个装置放置于39oC恒温环境。每小时取接受液3 mL,同时补充3 mL 40%乙醇,连续取样12 h。所取样品按已确立的色谱条件进样5μL,测定蛇床子素的含量。结果蛇床子素的经皮渗透近似于零级动力学特征,表明该透皮剂具备明显的透皮效果。

不同中药多糖体外对鸡外周血和脾脏淋巴细胞增殖能力的比较

为比较玉竹多糖、桑叶多糖、杜仲多糖、商陆多糖、淫羊藿多糖体外增强免疫活性,采用酶学检测法测定各中药多糖对鸡胚成纤维细胞的安全浓度,根据安全浓度测定结果,选择250.000μg/ml、125.000μg/ml、62.500μg/ml、31.250μg/ml、15.625μg/ml 5个浓度,用MTT法比较5种中药多糖单独和PHA协同刺激对外周血T淋巴细胞增殖指数的影响,以及比较5种中药多糖单独和LPS协同刺激对脾脏B淋巴细胞增殖率的影响。结果显示,玉竹多糖、桑叶多糖、杜仲多糖、商陆多糖、淫羊藿多糖对鸡胚成纤维细胞的安全浓度分别为1 250.0μg/ml、625.0μg/ml、625.0μg/ml、625.0μg/ml、312.5μg/ml。玉竹多糖、桑叶多糖、杜仲多糖和淫羊藿多糖无论是单独还是协同PHA刺激外周血T淋巴细胞,均不同程度地表现出增强T淋巴细胞的活性。桑叶多糖、杜仲多糖和淫羊藿多糖无论是单独还是协同LPS刺激脾脏B淋巴细胞,均不同程度地显示出良好的增强B淋巴细胞的活性。桑叶多糖和杜仲多糖体外增强免疫效果最佳,在62.500μg/ml和125.000μg/ml时,均显示出较强的增强外周血T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞增殖的能力。

不同桑叶提取物对小鼠脾脏淋巴细胞增殖能力的影响

试验旨在比较不同桑叶提取物对小鼠脾脏淋巴细胞增殖作用的影响。用不同浓度乙醇醇沉桑叶水提物,制备桑叶粗多糖MLP-1、MLP-2、MLP-3、MLP-4、MLP-5,采用苯酚硫酸法测定各提取物多糖含量。以5种桑叶粗多糖和桑叶水提物(MLAE)为试验药物,采用MTT法比较多糖含量分别在15.625、31.25、62.5、125、250μg/mL浓度时各提取物单独刺激及协同LPS、PHA共同刺激小鼠脾脏B、T淋巴细增殖的变化。结果显示,多糖浓度在15.625~250μg/mL范围内,各提取物无论单独还是协同LPS和PHA时均能促进小鼠脾脏B、T淋巴细胞的增殖,其中,MLP-1多糖含量在低浓度时能显著刺激脾脏B淋巴细胞增殖(P<0.05);MLP-3和MLP-5在低浓度时表现出较强的刺激T淋巴细胞增殖的能力;MLAE协同LPS在大部分浓度点的脾脏B淋巴细胞的增殖能力均显著高于细胞对照组和LPS对照组,可显著提升体液免疫功能(P<0.05)。

沙门氏菌PEG菌毛研究进展

菌毛是细菌表面一种特殊的细丝状结构，其顶端的粘附素蛋白可以结合宿主的特定组织细胞，是细菌黏附、定植致病的关键蛋白。同时，菌毛具有良好的免疫原性，在疫苗的研制和诊断试剂的研发等领域具有重要的意义。此外，某些菌毛存在对细胞的侵袭和促进生物被膜形成能力，因此菌毛研究领域一直是研究的热点。

鞭毛素fliC基因的缺失对肠炎沙门氏菌生物膜形成的影响

为研究肠炎沙门氏菌鞭毛素对其生物膜形成的影响,本研究利用构建的肠炎沙门氏菌鞭毛素编码基因fliC缺失株,检测其缺失性修饰后的生长表型变化及其对生物膜形成的影响。结果显示在表型检测试验中,fliC缺失株在电镜下观察呈无鞭毛形态,在半固体培养基上缺乏运动性,并且不能与肠炎沙门氏菌鞭毛单克隆抗体发生可见的凝集反应。生物膜形成能力定性试验结果表明,肠炎沙门氏菌fliC缺失株生物膜形成大量减少,并且生物膜脆弱,而其回补株能够较好地恢复生物膜的形成;生物膜定量结果进一步证明,鞭毛素fliC基因缺失后肠炎沙门氏菌形成生物膜的能力下降50%左右,以上结果显示鞭毛在肠炎沙门氏菌体外生物膜形成中具有重要作用。

鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的检测技术研究

用高效液相色谱法检测鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺的残留,鸡蛋样品经乙酸乙酯提取、正己烷脱脂、氧化铝柱净化、提取物蒸发浓缩至干、流动相溶解、微孔过滤,进行HPLC分析。结果表明:用该方法测得氟苯尼考和氟苯尼考胺的最低检测限值皆为5 ng/g,氟苯尼考回收率为81.0%～92.3%,氟苯尼考胺回收率为78.0%～85.3%,能够满足鸡蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量检测技术要求。

F18大肠杆菌黏附素受体结合域鉴定新方法

运用DNA重组技术将F18ab和F18ac大肠杆菌黏附素fedF亚单位内的第60～109位氨基酸残基区段(fedF1)和fedF全基因克隆入V型分泌系统MisL的载客结构域上,经DNA测序确证其正确阅读框后,含重组菌质粒pnirBMisL-fedF或pnirBMisL-fedF1经厌氧诱导后,与断奶仔猪小肠上皮细胞进行体外黏附试验。结果表明:FUT1基因M307位点中GG型和AG型仔猪小肠上皮细胞均能黏附上述重组菌,而AA型个体小肠上皮细胞则不能黏附。上述重组菌均能与兔抗F18ab菌毛FedF亚单位单因子高免血清发生玻板凝集反应。而FedF突变体FedF(M)的重组质粒菌则失去上述凝集和黏附特性。证明F18大肠杆菌黏附素fedF基因及其基因片段fedF1在大肠杆菌表面得到了功能性表达,F18ab和F18ac黏附素FedF直接介导F18大肠杆菌与易感仔猪小肠上皮细胞表面大分子受体黏附结合,fedF1为黏附素FedF的受体主要结合域,其His88、His99是FedF黏附素受体结合域的重要氨基酸残基。

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌变异株的分离与鉴定

对江苏泰兴某猪场疑似猪传染性胸膜肺炎病料进行实验室分离培养,成功分离到1株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌,并对其进行生化特性、双抗夹心ELISA鉴定。为进一步分析该分离株的血清型,针对ApxIVA和ApfA保守基因设计2对检测引物,PCR结果表明:该分离株未扩增出预期大小的片段,说明该分离株很有可能是1株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌变异株,其血清型还有待进一步鉴定。

鸡蛋中头孢噻呋的残留检测技术研究

本试验建立了用高效液相色谱法测定鸡蛋中头孢噻呋残留的方法。鸡蛋样品经二硫赤藓醇提取,碘乙酰胺衍生,C18固相柱萃取净化,甲醇溶液洗脱,洗脱液氮气吹干,用流动相溶解,微孔过滤,HPLC分析。结果表明,用该方法测得鸡蛋中头孢噻呋的最低检测限为10μg/kg,回收率87%以上,日内、日间相对标准偏差小,能够满足鸡蛋中头孢噻呋残留检测技术要求。

多西环素在肉鸡可食性组织中的残留研究

为研究治疗剂量的多西环素在肉鸡可食性组织中的残留消除特点,多西环素以100 mg/L水(Ⅰ组)和100 mg/kg饲料(Ⅱ组),分别通过饮水和拌料2个途径给药,在不同的时间收集组织样品,采用高效液相色谱法,检测多西环素在肉鸡肝脏、肾脏、肌肉和皮肤+脂肪中的残留。结果显示,在给药期间,肉鸡组织中多西环素的浓度,随着时间的推移,在逐渐累积,于给药后第4天或第5天达到峰值。第Ⅰ组与第Ⅱ组比较,前者组织中浓度大多显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于后者。而在停药后的第1天,肉鸡各组织中多西环素的浓度迅速下降,随后缓慢消除。停药后第14天时,2组鸡的肝脏、肾脏、肌肉、皮肤+脂肪中多西环素浓度均低于农业部规定的最高残留限量(MRLs)。为安全考虑,多西环素以100 mg/L饮水给药和100 mg/kg拌料给药时,建议休药期为28 d。

新鱼腥草素钠增强NDV LaSota疫苗免疫作用研究

用新城疫病毒(NDV)LaSota株弱毒活疫苗接种1日龄非免疫健康肉雏鸡的同时,以新鱼腥草素钠为免疫佐剂按不同剂量颈部皮下注射,以生理盐水为对照;二次免疫后第7、14、21、28天分别测定各组动物的抗NDV血凝抑制抗体和外周血CD4+/CD8+淋巴细胞比值。结果表明:新鱼腥草素钠对提高鸡体抗NDV血凝抑制抗体效价和外周血CD4+/CD8+淋巴细胞比值都有一定作用,与对照组差异显著(P<0.05),且这种作用与给药剂量有关。另外,新鱼腥草素钠对细胞免疫的影响早于对体液免疫。

鸡源沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解某鸡场沙门菌临床分离株血清型分布与药物敏感性,以常规方法从病死雏鸡分离出多株细菌,经形态学观察、生化试验、PCR检测和血清型定型,最终鉴定出10株沙门菌,其中2株为肠炎沙门菌,8株为鸡白痢沙门菌。采用Kindy-Bauer(KB)法检测分离菌株对25种抗菌药物的敏感性表明,菌株均为多重耐药菌株,对阿奇霉素等12种药物的耐药率达到70%以上,而对复达欣等13种药物的敏感率均高于70%。结果表明,沙门菌早期感染仍是造成雏鸡高死亡率的重要病因之一,长期以来抗菌药物在养鸡业上的不合理使用已对沙门菌的耐药谱产生了明显影响,给沙门菌的临床防控带来了新的挑战。