几个转移相关基因的评估

背景与目的围绕本实验室筛选鉴定的MAG-1，MAG-2，14—3—3f和PAR1等转移相关基因进行分析比较，对其在肿瘤转移的功能和作用机理进行评估。方法MAG-1，MAG-2，14—3．3ζ黾利用抑制消减杂交技术（Suppression subtractive hybridization，SSH），以同源性人巨细胞肺癌细胞系PLA-801亚克隆得到的一对具有不同转移能力的细胞株为模型，结合cDNA微阵列（cDNA microarry）得到了99条在高转移性细胞株中高表达的序列和98条在低转移细胞株中高表达的序列。从高转移性细胞株中高表达的序列中选择具有自主创新性的肿瘤转移相关新基因MAG—1，MAG-2；从低转移细胞株中高表达的序列选出已知基因14．3．3ζ。PAR1是凝血酶受体基因。对以上基因通过生物信息学分析，分子克隆和基因转染表达于肺癌细胞株，结合正反义和RNA干涉技术，检测细胞的生物学功能变化。并对其可能涉及的相关分子及信号传导路径进行分析。并结合临床标本进行验证。

上皮生长因子受体在肿瘤转移中的作用研究进展

上皮生长因子受体(EGFR)属于酪氨酸蛋白激酶家族细胞表面受体成员之一,在多种不同类型细胞发育过程中有广泛表达。可以通过下列方式给细胞传递信号:(1)与相应配基,如上皮生长因子(EGF),转化生长因子α(TGFα),两性调节蛋白(amphiregulin)或肝素结合EGF等结合;(2)当胞外或胞内功能区被截短或突变时;(3)通过其它细胞信号传递途径或与核内事件(如V-erbA表达)合作,即使缺少配基,通过基础受体活性的提高,给细胞以信号。活化的EGFR对细胞起多重作用,这不仅取决于组织起源和分化状态,在某些情况下。

电穿孔导入的LacZ基因在人肺癌细胞中的表达

选用LacZ基因作为报告基因，用电穿孔法与pSV2neo质位共转化导入人肺巨细胞癌高转移细胞株，经G418及X－gal组化法双重筛检，获得LacZ基因表达阳性的细胞克隆。经X－gal组化染色，该克隆70％细胞蓝染，再经软琼脂培养后，形成的集落蓝染率约为65％，单个集落中的细胞蓝染率可达100％，在裸小鼠皮下或尾静脉接种这一LacZ基因表达阳性的克隆细胞后，在形成的肿瘤及肺内转移灶的冰冻切片中，X－gal染色可观察到蓝染的癌细胞。但由于细胞周期不同步、遗传稳定性以及表达调控因素的影响，则可能是本实验中部分细胞染色阴性的原因。我们的实验表明，LacZ基因有可能在肿瘤转移的研究中作为一种理想标志基因。

免疫金染色技术在常规垂体瘤电镜标本的应用

在免疫电镜方面,由于胶体金颗粒均匀一致,定位准确,不遮盖超微结构;此外,可利用不同直径的胶体金粒子在同一组织切片上对多种抗原进行定位。

Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂大鼠关节炎模型的建立和比较

目的对Ⅱ型胶原蛋白（ＣⅡ－Ａ）和弗氏完全佐剂（Ａ－Ａ）大鼠关节炎模型在大体外观和足部组织病理学切片等方面进行观察比较。方法分别采用Ⅱ型胶原蛋白和弗氏完全佐剂诱导建立大鼠关节炎模型，利用排水法对大鼠足部体积进行测定，并将大鼠后足进行组织病理学切片观察。结果从大体外观和足部病理切片上两种大鼠模型均显示出有明显的病变，但ＣⅡ－Ａ大鼠与Ａ－Ａ大鼠比较，滑膜增生及软骨破坏等继发性病变特征更为明显，关节炎持续时间也较长，更接近于人的类风湿性关节炎。结论ＣⅡ－Ａ大鼠模型与Ａ－Ａ相比是研究ＲＡ较为理想的动物模型。

肿瘤转移相关新基因MAG-1和MAG-2的克隆

目的 从两株人肺巨细胞癌细胞株中分离并鉴定人肺癌转移相关基因 ,为探讨肿瘤转移的分子机制奠定基础。方法 以细胞系PLA 80 1的两个具有不同转移潜力的亚克隆为模型 ,利用抑制消减杂交(suppressionsubtractivehybridization ,SSH)技术克隆差异片段 ,对得到的片段经基因芯片筛选后测序并与GenBank数据库进行同源性比较 ,然后用Northern杂交和RT PCR对其中的两条序列进行验证 ,并进行详细的生物信息学分析。结果 获得了 79条在高转移细胞中高表达而在低转移细胞中低表达的序列 ,在与这些序列同源的己知基因中包括两条功能未知的全长cDNA序列BC0 0 62 3 6和BC0 0 2 42 0 ,分别命名为MAG 1和MAG 2。MAG 1定位于 4q2 1,由 4个外显子组成 ,MAG 2定位于 2 q3 5 ,由 9个外显子组成 ,基因长度分别为8.5kb和 5 .2kb。二条序列均有开放阅读框架 (ORF) ,编码产物以α螺旋为主并含有部分片层结构和无规卷曲。结论 MAG 1和MAG 2在高低转移性肺巨细胞癌细胞株中的表达具有显著差异 ,二者的表达与高转移潜能具有相关性 ,提示MAG 1和MAG 2可能参与肿瘤转移过程。

新型生物可降解材料与骨髓间充质干细胞生物相容性研究

目的 探讨人骨髓间充质干细胞 (MSCs)与第 3代聚羟基烷酸酯 (PHA)类聚酯 :3-羟基丁酸、3-羟基己酸无规嵌段共聚物 [p(3HB- co- 3HH) ]的生物相容性 ,以及材料植入体内的组织相容性。 方法 将培养的人 MSCs分别接种于细胞载体 p(3HB- co- 3HH)上 ,通过相差显微镜和电镜 ,以及 HE、Von Kossa染色和 型胶原表达等分析 ,了解细胞载体复合物体外立体培养 2周、或裸鼠体内植入后经过培养的 MSCs在支架材料上生长、扩增和分泌基质等与材料的相容性。 结果 p(3HB- co- 3HH)具有良好的亲水性及细胞亲和力 ,材料表面不需特殊处理 (如卵磷脂、多聚赖氨酸包埋等 ) ,可以作为种子细胞的载体 ,接种的 MSCs能够在材料中均匀分布 ,贴壁生长良好 ,维持骨髓干细胞表型。在培养体系中加入成骨诱导分化试剂后 ,贴壁生长的 MSCs可向成骨细胞分化并分泌基质 ,表达 型胶原。 结论 p(3HB- co-3HH)具有良好的生物相容性和细胞亲和性 ,是较好的可降解的高分子生物材料。

肺癌中凝血酶受体-1的表达及意义

目的 分析凝血酶受体 (PAR 1)在肺癌组织及细胞中的表达情况 ,探讨PAR 1与人肺癌生物学行为的关系。方法 采用免疫组织化学、Westernblot及RT PCR方法检测不同类型肺癌组织及细胞系中PAR 1的表达情况。结果 免疫组化S P法检测PAR 1在 5 2例肺癌组织中表达情况分别为 :腺癌 14 / 2 0例、鳞癌 6 / 16例、大细胞癌 6 / 10例、小细胞癌中 4 / 6例。免疫组化阳性细胞多位于癌巢周边 ,1例侵及支气管软骨处的鳞癌癌巢及另 1例低分化腺癌脉管内的癌栓呈明显阳性 ,1例腺癌组织周围的肺泡上皮不典型增生灶呈明显阳性。Westernblot及RT PCR方法检测结果均显示PAR 1在人肺巨细胞癌细胞系高转移株 (PLA80 1D)中的高表达明显高于其低转移株 (PLA80 1C)。结论 PAR 1在各种组织类型的人肺癌组织中均有不同比例表达。PAR 1在人肺巨细胞癌细胞系高转移株 (PLA80 1D)中的表达明显高于其低转移株 (PLA80 1C)。PAR

胃癌c－myc，c－erbB－2，EGFR癌基因扩增、共扩增及其临床相关性研究

应用斑点杂交技术（ＤｏｔＢｌｏｔ）分析５０例胃癌中癌基因ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｅｒｂＢ－２．ＦＧＦＲ扩增。结果４４％的胃癌存在至少一个癌基因扩增，其中ｃ－ｍｙｃ扩增率２２％（扩增２～６倍），ｃ－ｅｒｂＢ－２１４％（扩增２～７倍），ＦＧＦＲ１６％（扩增２～９倍）。发现了４例癌基因共扩增。扩增与胃癌临床相关性研究表明，癌基因扩增与肿瘤的恶性程度存在相关性，累积有更多扩增事件的病例预后更为不良。

凝血酶与肿瘤转移

凝血酶是一种多功能丝氨酸蛋白酶,在体内一系列生理和病理过程中起重要作用。它不但参与止血和凝血、炎症、免疫反应、组织修复和创伤愈合,而且可激活正常细胞的致瘤潜能和导致恶性细胞的转移表型。凝血酶是肿瘤细胞的促有丝分裂剂,能够增强肿瘤细胞对细胞因子的增殖反应,增强肿瘤细胞对血小板的黏附及体外细胞基质的侵袭,促进肿瘤血管形成和肿瘤微环境的组织重建。凝血酶受体家族PARs介导凝血酶的细胞生物学效应。凝血酶对肿瘤细胞生长具有双向调控作用,低浓度者促进生长,高浓度者抑制生长,甚至导致肿瘤细胞凋亡。本文就凝血酶的生物学功能、凝血酶与肿瘤及凝血酶受体等进行综述。

线粒体DNA缺失对人肺癌细胞生长和侵袭能力的影响

目的探讨线粒体DNA损伤对人肺癌细胞生长和侵袭能力的影响。方法采用溴化乙锭处理获得线粒体DNA缺失细胞;软琼脂集落形成实验检测细胞集落形成能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;MTT方法测定细胞长状态。结果线粒体DNA缺失细胞较之于其母本细胞系,具有更强的集落形成和侵袭能力,以及更明显的生长优势结论线粒体损伤可能参与了肺癌细胞恶性表型的形成。

体外培养人骨髓间充质干细胞的生物学特性

目的 体外分离培养人骨髓间充质干细胞 (MSCs)并研究其一般的生物学特性。方法 通过密度梯度离心法分离MSCs、体外培养传代细胞计数、流式细胞仪检测细胞增殖周期、表面分子测定以及细胞化学染色了解人MSCs一般的特点。结果 人MSCs经过体外培养均一地表达CD2 9、CD4 4、CD16 6 ,而CD34、CD4 5阴性。细胞化学结果显示 ,细胞糖原 (PAS)强阳性 ,脂肪 (SB)为阴性 ,5 %～ 10 %细胞碱性磷酸酶 (ALP)阳性。细胞周期分析表明 :G0 /G1、S和G2 /M所占比例分别为 83 11%、5 17%和 11 72 %。分离细胞在成骨诱导体系下进一步向成骨细胞分化。结论 密度梯度离心法能够分离纯化MSCs有其特殊的生物学特点 ,能够向成骨细胞分化。

胃癌c－erbB－2蛋白高表达及其与c－erbB－2基因扩增的关系

胃癌ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白高表达及其与ｃ－ｅｒｂＢ－２基因扩增的关系黄焰，宋廷惠，蒋彦永，陆应麟，陈立军关键词胃癌，ｃ－ｅｒｂＢ－２，高表达，扩增中国图书分类号Ｒ７３５．２生长因子受体类癌基因ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增或高表达已发现与部分胃癌的恶性发展密切相...

光敏生物素标记探针原位杂交检测肝癌基因表达

运用光敏生物素标记基因探针对２３例新鲜肝癌和癌旁组织的ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ和ｐ５３ｍＲＮＡ进行原位杂交（ｃＤＮＡ－ｍＲＮＡ）检测，发现在部分组织切片中存在内源件生物素样物质而产生假阳性，本实验采用一种封闭内源性生物素样物质的方法解决了假阳性问题，对这一方法的机理进行了讨论。

TGF-β_1与肝纤维化

转化生长因子β1(transforminggrowthfactor β1)作为细胞因子TGF β超家族的成员 ,调节多种靶基因的表达 ,在肝纤维化疾病发生发展中起重要作用 ,被认为是最重要的致纤维化因子 。

pcDNA3与pIRES1.neo筛选克隆效率的比较

将绿色荧光蛋白(GFP)报告基因分别插入pIRES1.neo与pcDNA3二真核表达载体,构建pGFP-IRES1.neo和pcDNA3-GFP,转染小鼠B16细胞和人HepG2细胞,经G418筛选出抗性克隆,在倒置荧光显微镜下观察,鉴定共表达克隆数;结果在两个细胞系中,pcDNA3-GFP共表达率分别为0%和4%,而pIRES1.neo-GFP共表达率为75%和100%,差异非常显著;因此在筛选稳定表达目的基因细胞克隆的实验中,pIRES1.neo是一个较理想的载体。

DNA斑点杂交检测大肠癌C－myc癌基因扩增的临床意义

应用ＤＮＡ斑点杂交技术对４４例大肠癌及相邻正常粘膜组织Ｃ－ｍｙｃ癌基因扩增进行分析，探讨Ｃ－ｍｙｃ扩增与大肠癌分化程度及Ｄｕｋｅｓ分期的关系．结果表明：大肠癌Ｃ－ｍｙｃ扩增率为６１．４％．并与分化程度密切相关，粘液腺癌和低分化腺癌的扩增率明显高于高分化腺癌．Ｃ－ｍｙｃ扩增可作为大肠癌的一项有价值的生物学标志．

重组复制缺陷型腺病毒Ad-p53AIP1的抗肿瘤效应及其作用机制

目的:探讨外源性p53AIP1(p53-regulated apoptosis-inducing protein 1)基因抗肿瘤效应及其作用机制,以评估p53AIP1基因在肿瘤基因治疗中应用的可行性。方法:构建携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒Ad-p53AIP1,感染人肝癌细胞HepG2,应用MTT比色法、Western blotting、流式细胞术、罗丹明染色以及电镜等观察外源性p53AIP1基因表达对肿瘤细胞的作用及其相关机制。小鼠皮下接种感染Ad-p53AIP1的小鼠乳腺癌4T1细胞,观察Ad-p53AIP1对肿瘤细胞体内成瘤性的影响;建立4T1细胞皮下移植瘤小鼠模型,直接瘤内多点注射重组腺病毒,观察Ad-p53AIP1的抗肿瘤疗效。结果:感染Ad-p53AIP1的HepG2细胞能够高效表达P53AIP1蛋白。MTT检测显示Ad-p53AIP1对人肝癌细胞HepG2的生长抑制率达50%以上;流式细胞术分析证实p53AIP1使肿瘤细胞周期阻滞于G_2/M期;罗丹明染色、电镜观察以及凋亡相关蛋白PARP表达的检测均证实p53AIP1能诱导肿瘤细胞发生明显凋亡。感染Ad-p53AIP1的肿瘤细胞体内成瘤受到非常明显的抑制(P<0.01),Ad-p53AIP1瘤体注射对移植瘤生长也有明显的抑制作用(P<0.05)。Western blotting以及RT-PCR检测证实Ad-p53AIP1对p53 mRNA表达无影响,能下调mdm2基因的表达;p53AIP1能上调P53蛋白的表达、下调MDM2蛋白的表达水平,同时还影响P21等细胞周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达。结论:p53AIP1有明显的体内外抗肿瘤作用,其作用机制与其反向调控P53蛋白、调控多种细胞周期和细胞凋亡相关蛋白、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡有关,该基因在肿瘤基因治疗中具有潜在的应用前景。