白术多糖缓解环磷酰胺诱导的岭南黄鸡氧化应激和肝脏细胞凋亡

本研究旨在探索白术多糖(PAMK)对环磷酰胺(CTX)诱导的岭南黄鸡氧化应激和肝脏细胞凋亡异常的调节作用。选用240只健康1日龄岭南黄鸡,随机分成4个组,每组6个重复,每个重复10只鸡。对照组和环磷酰胺组(CTX组)饲喂基础饲粮,白术多糖组(PAMK组)和白术多糖+环磷酰胺组(PAMK+CTX组)饲喂添加400 mg/kg PAMK的基础饲粮。在20、21、22日龄时,CTX组和PAMK+CTX组的岭南黄鸡腿肌注射20 mg/kg CTX,对照组和PAMK组的岭南黄鸡腿肌注射0.5 mL生理盐水。试验期27 d。结果显示:与CTX组相比,PAMK+CTX组肝脏细胞凋亡现象有所缓解,肝脏细胞状态有所恢复,炎性浸润程度有所降低,点状坏死灶数量明显减少;此外,血清丙二醛(MDA)含量显著下降(P<0.05),血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.05),肝脏组织半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)的蛋白相对表达量和半胱氨酸蛋白酶9(Caspase9)的mRNA相对表达量显著下调(P<0.05)。由此可见,PAMK能够缓解由CTX引起的岭南黄鸡氧化应激和肝脏细胞凋亡增多的现象。

LPS通过ROS/p38/MAPK信号通路对鹅胚肝细胞凋亡的影响

【目的】建立鹅胚肝细胞的分离培养技术,探索脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)影响鹅胚肝细胞凋亡的作用机制,为鹅肝脏功能相关研究提供参考依据。【方法】选取16~18日龄无特定病原鹅胚,无菌条件下取鹅胚肝脏并用2%胶原酶Ⅳ消化,过细胞筛后分离培养鹅胚肝细胞并进行PAS染色鉴定。在鹅胚肝细胞中添加不同浓度(0(对照组)、0.1、1.0、10μg/mL)LPS,分别于12、24、36 h收集细胞,采用试剂盒检测鹅胚肝细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR检测细胞凋亡关键基因(caspase3、caspase9、p38)mRNA表达量。【结果】试验成功从鹅胚中分离出肝细胞并进行培养,鹅胚肝细胞形态完整,贴壁率高,存活率高,能稳定生长。PAS染色结果显示,鹅胚肝细胞质呈深浅不一的紫红色,肝细胞核呈蓝色。添加不同浓度LPS后发现,鹅胚肝细胞有氧化损伤情况,其中1.0μg/mL LPS组鹅胚肝细胞内ROS水平升高。添加LPS后鹅胚肝细胞晚期细胞凋亡受到抑制,除36 h外,细胞凋亡关键基因caspase 3、caspase 9、p 38表达量均显著降低(P<0.05)。【结论】本研究建立了较稳定的鹅胚肝细胞分离培养方法,添加不同浓度LPS后鹅胚肝细胞内ROS水平升高,激活p38/MAPK通路,且细胞凋亡受到一定抑制。

白术多糖对岭南黄鸡生长性能、屠宰性能及免疫器官发育的影响

本研究旨在探索白术多糖(PAMK)对岭南黄鸡生长性能、屠宰性能及免疫器官发育的影响。选择240只健康的1日龄岭南黄鸡,随机分成4个组,每组6个重复,每个重复10只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中分别添加100(PAMK100组)、400(PAMK 400组)、800 mg/kg(PAMK800组)的白术多糖。试验期35 d。结果表明:1)与对照组相比,PAMK400组岭南黄鸡1~21日龄和1~35日龄的平均日采食量和料重比均显著降低(P<0.05),总增重和平均日增重均有所升高(P>0.05)。2)与对照组相比,PAMK100、PAMK400和PAMK800组岭南黄鸡35日龄的屠宰率、半净膛率和全净膛率均显著升高(P<0.05)。3)与对照组相比,PAMK100组岭南黄鸡21日龄的脾脏指数显著降低(P<0.05),PAMK100和PAMK400组岭南黄鸡21日龄的法氏囊指数显著升高(P<0.05)。4)与对照组相比,PAMK 400组岭南黄鸡肝脏双核细胞数量增多,各种类型细胞形态良好;胸腺中成熟胸腺细胞数量增多,皮髓分界明显;脾脏中淋巴细胞排列密集有序,形态良好;法氏囊中大淋巴滤泡数量增多,滤泡排列也更加紧密。由此可见,饲粮中添加400 mg/kg白术多糖可以提高岭南黄鸡的生长性能和屠宰性能,并促进免疫器官的生长发育。

三黄鸡TLR4基因的克隆及序列分析

为了解三黄鸡天然免疫受体TLR4基因的特点,本试验根据GenBank上已公布的其它品种鸡的TLR4基因序列设计引物,利用三黄鸡肝脏提取总RNA为模板,获得三黄鸡TLR4基因的cDNA全序列。基因序列分析表明,三黄鸡TLR4基因编码区全长2532 bp,编码843个氨基酸,N端含有30个氨基酸组成的信号肽,分子质量为95.68407 ku,理论等电点为6.83。通过克隆三黄鸡TLR4基因并对其进行相似性分析。结果发现,三黄鸡与日本鹌鹑、珍珠鸡、家鹅、绿头鸭的相似度在86%以上;与芦花鸡、贵妃鸡、北京油鸡、莱芜黑鸡的相似度在99%左右,并且遗传进化分析结果显示所有禽类处于同一分支,这证明TLR4在禽类中具有很高的保守性。这些试验结果为TLR4的深入研究提供了理论基础,同时为三黄鸡的抗病育种提供新思路。