Musashi-1在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨RNA结合蛋白Musashi-1(MSI1)在前列腺癌(PCa)中的表达及其调控功能。方法基于肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库对目的基因MSI1进行差异分析、生存分析和临床相关性分析。通过在DU145细胞中敲低目的基因, 探究MSI1其对前列腺癌细胞DU145增殖、迁移和侵袭能力的影响, 组间比较采用独立样本t检验。结果 MSI1在前列腺癌中表达水平明显高于正常前列腺组织, 差异有统计学意义(7.75±1.01比4.56±0.54, t= 4.82, P<0.01)。且生存分析结果显示, 低表达MSI1组的无病生存期明显长于高表达组[风险比(HR):1.71(1.15~2.53), P<0.01]。T1+T2期MSI1表达水平和T3+T4期表达水平无统计学意义(t=0.38, P>0.05)。MSI表达水平[HR:1.47(1.02~2.10), P<0.05]、T分期[HR:1.93(1.02~3.60), P<0.05]及Gleason评分[HR:3.17(1.59~6.30), P<0.01]可作为前列腺癌的预后因素。细胞计数试剂盒(CCK-8)结果, 第4天Ctrl DU145细胞在波长450 nm吸光度(A)值为0.929±0.085, 而shMSI1#1和shMSI1#2 DU145实验组第4天A值分别为0.687±0.005和0.711±0.018, 与对照组比较差异有统计学意义(t=42.21、44.19, P<0.01)。DU145中ctrl组伤口愈合面积显著高于si-MSI1#1和si-MSI1#2组, 组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时前列腺癌细胞迁移侵袭实验发现, ctrl组及si-MSI1#1和si-MSI1#2组PC3迁移细胞分别为790.9±80.7、403.3±49.9和504.6±117.3, 组间比较差异有统计学意义(t=21.80、13.55, P<0.01)。结论 MSI1在前列腺癌组织中高表达且与前列腺癌患者的不良预后明显相关。抑制MSI1可有效抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭能力。

小核糖核蛋白多肽E在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨小核糖核蛋白多肽E(SNRPE)在前列腺癌(PCa)中的表达及在前列腺癌细胞中调控功能。方法基于肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库对目的基因SNRPE进行差异分析、生存分析和临床相关性分析;通过干扰RNA(siRNA)敲低SNRPE的表达, 探究其对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。组间比较采用独立样本t检验。结果 SNRPE在前列腺癌样本中的表达水平明显高于正常前列腺样本(5.3±0.10比4.8±0.12, t=5.54, P<0.01)。T1+T2期SNRPE表达显著低于T3+T4期表达组(t=4.53, P<0.05)。前列腺癌淋巴结未转移病人SNRPE1表达显著低于淋巴结转移病人组(t=4.21, P<0.05)。多变量Cox回归分析表明, 年龄[风险比(HR):0.99(0.95~1.00), P>0.05]、T分期[HR:1.84(0.96~3.50), P>0.05]及N分期[HR:1.32(0.68~2.60), P>0.05]不能作为OS相关的独立预后因素, 而SNRPE表达[HR:2.00(1.20~3.50), P<0.05]、及Gleason评分[HR:3.14(1.57~6.30), P<0.01]可作为前列腺癌的预后因素。PC3中ctrl组伤口愈合面积显著高于si-SNRPE#1和si-SNRPE#2组, 组间比较差异有统计学意义[(82.30±1.21)%比(38.10±2.56)%, t=27.04, P<0.01;(82.30±1.21)%比(40.05±1.82)%, t=33.48, P<0.01]。同时前列腺癌细胞迁移侵袭实验发现, ctrl组及si-SNRPE#1和si-SNRPE#2组PC3迁移细胞分别为351.8±16. 5、189.4±10.50和176.6±23.5, 组间比较差异有统计学意义(t=14.38、10.57, P<0.01)。ctrl组及si-SNRPE#1和si-SNRPE#2组PC3侵袭细胞分别为495.6±77.9、251.2±70.8和203.4±41.2, 组间比较差异有统计学意义(t=4.02、5.74, P<0.01)。结论 SNRPE基因具有促进前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的功能。

DNA甲基转移酶1对前列腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响

目的:探究DNA甲基转移酶1(DNMT1)对前列腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响。方法:采用小干扰RNA(siRNA)沉默前列腺癌细胞株(PC3和DU145)中DNMT1表达,通过定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测沉默效率。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的体外增殖能力;TransWell检测细胞体外迁移和侵袭能力;Western blot检测si-DNMT1细胞后上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达。组间比较采用t检验。结果:qPCR和Western blot实验结果显示DNMT1在前列腺癌细胞中高表达,并成功构建siDNMT1 PC3和DU145细胞系。4 d后,CCK-8结果显示,siDNMT1细胞增殖能力低于相应对照组[PC3:1.27±0.71和1.44±0.48比1.66±0.58,t=7.268、5.108,P<0.01;DU145:1.43±0.12和1.27±0.10比1.80±0.06,t=4.841、7.493、P<0.01]。Transwell显示,与对照组细胞比较,siDNMT1细胞迁移和侵袭能力降低(P<0.05)。Western blot结果显示,沉默DNMT1后E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达升高,而N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平下降。结论:DNMT1在前列腺癌中高表达,沉默DNMT1后可有效抑制前列腺癌细胞增殖和侵袭迁移能力。

地西他滨抑制前列腺癌细胞的增殖和迁移侵袭

目的:探究DNA甲基转移酶1(DNMT1)抑制剂地西他滨(DAC)对前列腺癌PC3细胞的增殖和迁移侵袭的影响。方法:取对数生长前列腺癌细胞株PC3,分为3组,分别为对照组和实验组(DAC处理组,250 nmol/L和500 nmol/L)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和单克隆检测细胞体外增殖能力;Transwell检测PC3细胞体外迁移和侵袭能力的改变。定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测DAC对DNMT1的影响效率,并检测DAC处理后p21水平改变。组间比较采用t检验。结果:DAC使用后显著抑制PC3细胞增殖能力,并呈剂量依赖性。CCK-8实验显示Ctrl组、250 nmol/L DAC和500 nmol/L DAC组的吸光度值分别为1.831±0.105、1.530±0.119和1.329±0.056,与对照组比较实验组差异均有统计学意义(t=3.247,P<0.05;t=7.299,P<0.05)。单克隆实验结果显示Ctrl组、250 nmol/L DAC和500 nmol/L DAC克隆形成数目为(827.67±4.04)、(577.33±2.52)和(283.67±6.03)个,与对照组比较实验组差异均有统计学意义(t=91.072、129.835,P<0.05)。Transwell结果显示,DAC处理组细胞迁移和侵袭能力低于对照组(P<0.05)。Western blot和qPCR结果显示,DNMT1表达随DAC剂量增高表达而逐渐下降,呈剂量依赖性。DAC处理后,PC3细胞的p21表达水平呈剂量依赖性增高。结论:DAC能够有效抑制前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,通过调节DNMT1-p21信号通路可能是作用机制之一。

地西他滨有效抑制前列腺癌PC3细胞移植瘤

目的:观察DNA甲基转移酶1(DNMT1)抑制剂地西他滨(Decitabine)对前列腺癌裸鼠移植瘤的治疗作用,并探讨其机制。方法:通过PC3细胞系构建裸鼠去势抵抗性前列腺癌皮下移植瘤模型,当肿瘤体积为100 mm 3随机分成两组,分别为空白对照组[磷酸盐缓冲液(PBS)组]和药物处理组(Decitabine组)。每3 d测量肿瘤体积,并绘制肿瘤时间-体积生长曲线。免疫组织化学检测肿瘤组织中细胞核增殖抗原(Ki-67)、DNMT1和p21蛋白表达。组织芯片进行免疫组织化学染色并评分,检测DNMT1和p21表达及相关性。数据符合正态分布时采用t检验分析两样本之间差异,采用ANOVA分析多组间差异。数据不符合正态分布时,组间比较采用Manu-Whitney U检验。采用χ^(2)检验分析定性资料差异。结果:成功构建裸鼠前列腺癌PC3细胞系移植瘤模型。药物处理组和PBS组移植瘤终体积分别为(611.34±117.35)mm 3和(139.66±71.11)mm 3,差异有统计学意义(t=7.686,P<0.01)。免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67、DNMT1和p21蛋白表达的结果显示,药物处理组DNMT1和Ki-67表达显著低于PBS组,差异有统计学意义(t=7.686、12.820,P<0.01、P<0.01),而p21蛋白表达显著高于PBS组,两者差异有统计学意义(t=-2.890,P<0.05)。组织芯片结果显示在前列腺癌中DNMT1高表达,而p21低表达,两者之间存在线性关系(R2=0.638,P<0.01)。结论:DNMT1抑制剂Decitabine能够有效抑制趋势抵抗前列腺癌PC3细胞皮下移植瘤的生长,其机制可能通过抑制DNMT1、Ki-67和促进p21表达抑制肿瘤生长。