神经干细胞体外三维培养模型的构建

研究了小鼠海马NSCs在胶原凝胶内的生长情况,构建适合于干细胞药物筛选及作用机理研究的三维培养模型。实验采用体外培养第三代NSCs,均匀混合于胶原溶液中,形成"细胞-胶原"的三维凝胶培养。通过扫描电镜观察胶原的微观结构,倒置显微镜及激光共聚焦显微镜观察胶原凝胶中NSCs的生长、伸展情况;应用免疫荧光技术鉴定NSCs,同时采用CCK-8法检测不同胶原浓度及不同培养模式下NSCs的生存和增殖能力。结果表明:质量浓度为0.5 mg/mL的胶原具有良好的三维多孔结构,凝胶中的NSCs生长状态良好,且大部分呈Nestin、BrdU阳性;与传统二维培养方式相比,三维胶原凝胶更利于NSCs的生存及增殖。

胶原-壳聚糖复合支架体外三维培养神经干细胞

采用冷冻干燥法制备了胶原-壳聚糖复合支架并通过层粘连蛋白（LN）进行结构修饰，测定其物理性能特征，建立了胎鼠海马神经干细胞（NSCs）的三维培养体系，同时考察了NSCs与胶原-壳聚糖复合支架的生物相容性．孔径、孔隙率、吸水率、降解率等参数的比较表明，体积比为7：3的复合支架更适合于体外细胞培养的要求，并且NSCs在经LN修饰后支架材料上的接种率得到明显提高；激光共聚焦显微镜及扫描电镜观察表明，NSCs能够在胶原-壳聚糖复合支架内良好地生长、增殖及分化．这些结果为NSCs的进一步临床移植应用，以及治疗神经系统疾病的新药筛选和机理研究等奠定了坚实的实验基础．

体外神经干细胞三维药物筛选模型的构建

研究目的：建立中药对神经干细胞诱导转变为神经细胞的体外模型，不仅对研究脑的发育和分化以及神经系统疾病的治疗具有重要价值，而且也有助于了解中药的作用机制，为中药的临床应用提供坚实的科学依据。本研究评价体外海马神经干细胞在胶原凝胶内的生长情况，探讨胶原凝胶作为神经系统组织支架材料的可行性，以建立适合于干细胞药物筛选及作用机理研究的三维培养模型。研究方法：①细胞培养：体外培养来源于孕13天胎鼠的海马部位神经干细胞，传至第三代；根据胶原的特性，把神经干细胞均匀混合于胶原的预凝胶溶液中，便可形成“细胞．胶原”的凝胶三维结构。②检测指标：倒置相差显微镜和激光共聚焦显微镜观察胶原凝胶中神经干细胞的生长、伸展情况；通用免疫细胞化学方法及荧光显微技术鉴定神经干细胞，BrdU染色标记增殖的细胞；采用CCK-8法及Live／DeadViability／CytotoxicityKit试剂盒检测神经干细胞不同培养条件下的生存和增殖能力，筛选出最佳的胶原工作浓度。结果：①倒置相差显微镜下观察发现胶原凝胶中的神经干细胞生长状态良好；