浙江省儿童隐孢子虫感染的诊断及分析

目的 对浙江省腹泻儿童进行隐孢子虫的病原学诊断及感染情况分析。方法 从浙江大学附属儿童医院收集腹泻儿童粪便５４８ 份，每份样本先用改良抗酸染色法检查卵囊，发现阳性或可疑标本，再用免疫荧光染色法进一步确诊。结果 两种染色方法结合诊断共发现５７ 例阳性病人，隐孢子虫感染率为１０－４％ ，男女之间感染率无显著性差异（χ２ ＝ ０－００７，Ｐ＞ ０－０５），其中１ 岁以下婴儿感染率为５－７ ％ ，１ ～１０ 岁儿童感染率为１７－５％ ，两者之间存在显著性差异（χ２ ＝ １９－６９ ，Ｐ＜ ０－０５）。结论 改良抗酸染色法与免疫荧光染色法结合诊断能达到隐孢子虫确诊目的，由感染情况分析可得浙江省腹泻儿童中有较高的隐孢子虫感染率，其中１ 岁以下儿童感染率较１ 岁以上儿童明显降低，可能与１ 岁以下婴儿多母乳喂养有关。

青蒿琥酯预防曼氏血吸虫病的实验研究

目的 研究青蒿琥酯对小鼠曼氏血吸虫病的预防作用及优化给药方案。 方法 小鼠尾部接触感染曼氏血吸虫尾蚴后口服青蒿琥酯 ,灌注法收集计数虫体数和雌虫数 ,镜检计数肝脏和肠的虫卵 ,统计减虫率、减雌率和平均产卵量 ,分析青蒿琥酯不同给药时间、剂量、疗程的预防效果。 结果 青蒿琥酯预防小鼠曼氏血吸虫病的最佳剂量为 3 0 0mg/kg ,14、2 1d童虫对药物最为敏感 ,减虫率分别为 84%和 93 %。小鼠感染 14d后每周口服 1次青蒿琥酯3 0 0mg/kg ,连续 4wk ,减虫率达 99% ;感染 14或 2 1d后每 2wk口服 1次青蒿琥酯 3 0 0mg/kg ,连续 4wk ,减虫率达 97%或 96%。各服药组平均产卵量与对照组差异具有显著性意义 结论 青蒿琥酯可杀灭曼氏血吸虫童虫 ,影响雌虫发育产卵 ,有效预防曼氏血吸虫病。建议应用青蒿琥酯预防曼氏血吸虫病的给药方案为感染 14或 2 1d后首服 ,每 1或 2周服用

青蒿琥酯对曼氏血吸虫雌虫生殖作用的影响

目的 :通过观察青蒿琥酯对曼氏血吸虫雌虫产卵的影响 ,分析药物的抗生殖作用。方法 :小鼠尾部接触感染曼氏血吸虫尾蚴后口服不同剂量青蒿琥酯 ,灌流后收集虫体 ,记数。解剖小鼠取出肝、肠 ,组织溶解后计数虫卵 ,分析药物作用后雌虫平均产卵量的变化 ;收集无损虫体进行体外培养 ,计数雌虫体外产卵并观察虫卵形态。结果 :在 30 0mg kg和 5 0 0mg kg给药组小鼠的肝、肠中未查到虫卵 ,10 0mg kg给药组小鼠的雌虫平均产卵量与对照组存在极显著性差异 ;体外培养结果中 ,30 0mg kg和 5 0 0mg kg给药组的虫体未见产卵 ,10 0mg kg给药组雌虫平均产卵量与对照组存在显著差异。显微观察发现 10 0mg kg给药组雌虫体外培养所产的虫卵多外附泡状物 ,侧棘受损 ,虫卵结构异常。结论 :青蒿琥酯能降低或完全抑制存活雌虫的平均产卵量、导致雌虫异常卵的产生 ,具有抗曼氏血吸虫雌虫生殖的作用 。

直接PCR法检测血液中伊氏锥虫感染

为建立伊氏锥虫动基体DNA(KinetoplastDNA,kDNA)的PCR扩增技术,血液直接PCR法检测伊氏锥虫的感染,本文以伊氏锥虫kDNA片段为靶扩增DNA设计引物,确定最适PCR反应条件,建立kDNA片段的PCR扩增技术,应用直接扩增缓冲液(Ampdirect)从感染小鼠的滤纸血标本直接PCR检测伊氏锥虫。结果发现,PCR扩增伊氏锥虫kDNA片段分子量为364bp,能检测的最小DNA量是0·06pg,与布氏锥虫、活动锥虫没有交叉反应。应用直接扩增缓冲液不需进行样本的DNA抽提,直接PCR能检测感染小鼠的早期滤纸血样本,敏感性高于镜检法。本实验建立的直接PCR法检测伊氏锥虫具有较高的敏感性和特异性,方法快捷,可进一步应用于伊氏锥虫病的早期诊断以及现场调查。

激光照射对弓形虫速殖子作用的流式细胞分析

用流式细胞术 (FCM)检测分析了激光照射对弓形虫 RH株速殖子的作用。结果显示 ,激光照射后弓形虫速殖子群体 DNA含量分布发生改变 ,DNA含量的第 1道数峰值 (平均值 )左移 ,第 1峰值分布范围内速殖子数占总速殖子数百分率增加 ,3.5 W和 4.5 W剂量照射组与对照组相比差异存在显著性 (P<0 .0 5 )。提示激光照射能抑制弓形虫 DNA的合成 ,减少弓形虫群体

酮替酚配伍周效磺胺对红内期约氏疟原虫超微结构的影响

单独使用酮替酚或周效磺胺，红内期约氏疟原虫的超微结构受到一定程度的损伤，但配伍使用酮替酚和周效磺胺后虫体的结构变化更为迅速，给药８小时后裂殖体的形成受阻，滋养体除细胞结构逐渐消失外胞质中还出现伪食泡和逐渐增多增大的单膜或多膜空泡，给药２４小时后未查见结构完整的滋养体。

利福平对红内期约氏疟原虫超微结构的影响

利福平对红内期约氏疟原虫超微结构的影响陆绍红，曹汉民（华东师范大学生物系上海２０００６２）自从六十年代在泰国及哥伦比亚地区首次报道疟原虫对氯喹产生抗药性以来，氯喹逐渐失去临床的使用价值［１，２］，疟疾重新成为世界上重要的致命疾病，所以迫切要求寻找有效...

酮替酚配伍周效磺胺对红内期约氏疟原虫超微结构的影响

酮替酚或周效磺胺单独使用治疗疟疾，红内期约氏疟原虫的超微结构均能受到一定的损伤，但配伍使用酮替酚和周效磺胺后虫体的结构损伤更为迅速，给药８小时后裂殖体形成受阻，滋养体除细胞结构逐渐消失外还出现伪食泡和逐渐增多增大的单膜或多膜空泡，给药２４小时未查见结构完整的滋养体。

淡色库蚊有机磷抗性品系在生物学特性方面的不相适应性研究

本文在淡色库蚊的敌百虫、双硫磷和毒死蜱三种抗性品系筛选的基础上，通过抗性品系和敏感品系的吸血、繁殖、存活和发育等生物学特性的测定和比较，组建实验种群生命表、分析抗品系的适合度，结果表明：三种抗性品系的吸血率。产卵率和发育速率和敏感品系相比都有所降低；抗敌百虫品系，抗双硫磷品系和抗毒死蜱品系相对敏感品系分别具有０．５４２、０．６３１和０．６１８的适合度。

淡色库蚊酯酶等位基因及其在自然种群中的频率分布

酯酶基因扩增所产生的酯酶活性升高是库蚊 Ｃｕｌｅｘ ｐｉｐｉｅｎｓ 对有机磷杀虫剂抗性的主要机理之一。采用分子杂交技术和限制性酶切片段长度多态性 （ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ） 分析， 已鉴定出多种酯酶等位基因类型。该文通过酯酶基因特异性片段的 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增及扩增片段的酶切片段分析， 对淡色库蚊 Ｃｕｌｅｘ ｐｉｐｉｅｎｓ ｐａｌｌｅｎｓ 四种有机磷抗性品系的酯酶等位基因进行分型， 并测定分析自然种群中不同酶型的频率分布。研究结果表明： Ｐ Ｃ Ｒ 分型方法具有快速、准确的特点。不同的有机磷杀虫剂对酯酶等位基因具有明显的选择作用。双硫磷品系为 Ｂ１ 型； 毒死蜱和敌百虫品系为 Ｂ２ 型； 马拉硫磷品系为 Ｂ１ 型和 Ｂ１／ Ｂ２ 杂合型。不同地区采集的种群表现出不同的酶型频率分布。

DIGFA、ELISA与IHA平行检测血吸虫病流行区居民血清抗体的应用价值

目的探讨斑点金免疫渗滤法(DIGFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)与间接红细胞凝集试验(IHA)在日本血吸虫病流行区平行检测居民血清抗体的应用价值。方法采用DIGFA、ELISA和IHA平行检测粪检血吸虫虫卵阳性血清、健康人群及其它3种寄生虫感染人群血清、血吸虫病流行区居民血清,并对检测结果进行统计分析。结果DIGFA、ELISA和IHA检测100例粪检血吸虫虫卵阳性血清的敏感性均为96.0%;检测188例健康人群及其它3种寄生虫感染人群血清的特异性分别为98.9%、96.8%和97.3%;平行检测血吸虫病流行区居民血清抗体的阳性率分别为9.35%(102/1091)、11.54%(125/1083)和11.00%(120/1091),检测结果在统计学上无显著性差异(P>0.05)。结论DIGFA、ELISA和IHA敏感性高、特异性强,交叉反应少,平行检测血吸虫病流行区居民血清抗体的阳性检出率较为符合。

青蒿琥酯抗小鼠血吸虫性肝纤维化的作用

目的研究青蒿琥酯(artesunate,ART)体内抗血吸虫性肝纤维化的作用,探讨其分子机制。方法小鼠经腹部贴片感染血吸虫尾蚴建立肝纤维化动物模型,16周开始每天给予ART灌胃治疗,连续8周。停药4周后,通过定量PCR与Western blot,检测小鼠肝组织内纤维化形成相关基因与CHI3L1/ERK信号通路基因的表达水平。结果成功建立了血吸虫性肝纤维化小鼠模型。病理学指标评分显示,ART治疗血吸虫性小鼠肝纤维化有效。给药后,小鼠肝脏基质金属蛋白酶抑制因子TIMP-1和Ⅲ型胶原蛋白Col3α1基因表达水平明显降低,壳多糖酶3样蛋白CHI3L1和ERK1/2基因表达量的降低也具有统计学意义,ERK磷酸化水平被明显抑制。结论 ART在体内对血吸虫性肝纤维化具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制胶原蛋白合成及CHI3L1/ERK信号通路的传导有关。

LIT对小鼠抗弓形虫感染的保护作用

目的： 探讨激光照射弓形虫速殖子（ＬＩＴ） 的免疫保护力及其诱导的免疫应答水平。方法： 应用４．５ ＷＬＩＴ免疫ＩＣＲ小鼠，并用活体弓形虫速殖子攻击感染，观察ＬＩＴ抗虫效果。分别用间接免疫荧光法和ＥＬＩＳＡ法测定Ｔ淋巴细胞ＣＤ４＋ ／ＣＤ８＋ 亚群及特异性ＩｇＧ抗体。结果： ＬＩＴ免疫的小鼠具有抗急性弓形虫感染的能力， 能延长小鼠生存时间， 并能导致机体ＣＤ４＋ 、ＣＤ４＋ ／ＣＤ８＋ 显著升高及特异性ＩｇＧ抗体产生。结论： ４．５ Ｗ ＬＩＴ经腹腔免疫接种小鼠， 能诱导部分的保护性免疫力，

中华按蚊对拟除虫菊酯抗击倒因子分布频率的研究

本文报道中华按蚊敏感品系及不同地区自然种群对溴氰菊酯和氯菊酯的抗击倒因子分布频率。结果表明：这两种拟除虫菊酯对敏感品系幼虫的２０ｍｉｎ致死中浓度（ＬＣ５０）分别为０．０２０９和０．１７４７ｐｐｍ；用敏感品系幼虫致死率达９９％的剂量测试自然种群，发现已有抗性产生，其中用药试验的温州苍南，其致死率仅为６０％左右。自然种群成虫的神经不敏感因子分布频率明显大于敏感品系，最大差率达４０％左右（温州苍南用药地区种群）。

青蒿琥酯对小鼠曼氏血吸虫虫卵肉芽肿形成的影响

目的通过口服青蒿琥酯,观察其对曼氏血吸虫感染小鼠肝脏肉芽肿形成的影响。方法小鼠经尾部接触感染曼氏血吸虫尾蚴后,经不同时间、不同剂量喂服青蒿琥酯,治疗后2～6周解剖,取肝脏作石蜡切片,进行H.E.染色,显微镜下作病理学观察,并测定虫卵肉芽肿的面积。结果未给药对照组虫卵肉芽肿由大量炎性浸润细胞及间质成纤维细胞组成,服药组肝切片未见虫卵肉芽肿或虫卵肉芽肿面积明显小于对照组,肉芽肿周围少量炎性细胞浸润。100mg/kg组肉芽肿面积与对照比较无显著性差异(P>0.05)。但肉芽肿面积比对照减小36.9%。300、500mg/kg组病理切片未查到虫卵和肉芽肿。不同虫龄服药组肉芽肿面积与对照比较均有显著性差异(P<0.05～P<0.01)。其中21、22d服药组肝切片未查到虫卵和肉芽肿。结论青蒿琥酯能抑制虫卵肉芽肿的形成,降低虫体产卵率并减少形成的肉芽肿对肝脏的损害。

淡色库蚊（Culex pipiens pallens）抗性酯酶活性聚集度及有机磷抗性发展动态研究

本文报道浙江省不同地市淡色库蚊（Ｃｕｌｅｘｐｉｐｉｅｎｓｐａｌｅｎｓ）种群的抗性酯酶活性聚集度和对有机磷杀虫剂抗性的发展动态。通过生物测定法，敌百虫对各地市幼虫种群的半致死浓度（ＬＣ５０）分别是：宁波０．３５ｐｐｍ，杭州０．４６ｐｐｍ，舟山０．４７ｐｐｍ，温州０．６６ｐｐｍ，嘉兴０．７１ｐｐｍ，金华０．７５ｐｐｍ和台州１．４３ｐｐｍ。根据各地的历年资料综合分析，自七十年代以来，蚊虫幼虫对敌百虫的抗性逐渐下降，至九十年代初降至最低，但近几年又有回升趋势。通过雌蚊抗性酯酶活性测定，不同地市的抗性酯酶活性指标（Ｉ．Ｖ．）平均值分别是：宁波５７８０．７，杭州６４２５．９，舟山７０４５．９，嘉兴７２５９．９，金华８２８３．２，温州９０４６．３和台州１２９０７．９。与九十年代初相比有所增高。根据抗性酯酶活性指标相似性分析，宁波可划为中度抗性区，杭州、舟山和嘉兴为中高度抗性区，金华和温州为高度抗性区，而台州为强度抗性区。

抗日本血吸虫SEA纳米抗体制备与分析

利用制备的日本血吸虫虫卵抗原（SEA），免疫健康双峰驼Bactrian camel，分离其外周血淋巴细胞提取总RNA，利用RT—PCR扩增骆驼重链抗体IgG可变区（VHH）基因片段，将VHH片段与载体pMECS连接后电转入大肠杆菌TG1构建纳米抗体文库。经亲和筛选、phage—ELISA以及测序分析后，挑取阳性克隆，抽提质粒，电转入大肠杆菌WK6诱导表达纳米抗体。通过间接ELISA分析纳米抗体VHH-1的敏感性和特异性。结果显示，纳米抗体文库容量为2．3×10^8，测序分析显示，所获得的纳米抗体文库具有良好的多态性。经NI—NTA和AKTA纯化后获得高纯度纳米抗体。ELISA分析表明所获得的纳米抗体VHH-1具有较好的敏感性和特异性。为进一步开展纳米抗体在日本血吸虫诊治研究中的应用奠定一定基础。

淡色库蚊三种有机磷抗性品系的相对适合度分析

本文在淡色库蚊的敌百虫、双硫磷和毒死蜱三种抗性品系筛选的基础上，通过抗性品系和敏感品系的吸血、繁殖、存活和发育等生物学特性的测定和比较，组建实验种群生命表，分析抗性品系的适合度。结果表明：三种抗性品系的吸血率、产卵率和发育速率与敏感品系相比都有所降低，抗敌百虫品系、抗双硫磷品系和抗毒死蜱品系相对敏感品系分别具有：０．５４２、０．６３１和０．６１８的适合度。

刚地弓形虫免疫逃避相关分子的研究进展

刚地弓形虫可依赖有效的免疫逃避机制在宿主体内长期生存,造成慢性感染。纳虫泡膜、棒状体和细胞质等所含抗原物质多而复杂,在弓形虫逃避宿主的免疫应答中起重要作用。它们通过抑制过度炎症反应和一氧化氮产生,影响细胞因子基因表达,耗竭特异性免疫反应物质,以及下调免疫细胞功能等方式有效地逃避宿主免疫反应攻击。本文就弓形虫免疫逃避相关分子的最新研究进展作一综述。

重组弓形虫棒状体蛋白5诱导小鼠的免疫应答及其抗弓形虫感染的保护作用

为探讨重组弓形虫棒状体蛋白5诱导的免疫应答及其免疫保护效应，本研究克隆表达了弓形虫棒状体蛋白5，并分析其诱导的细胞免疫、体液免疫应答和抗弓形虫感染的保护作用。采用PCR方法从刚地弓形虫cDNA中扩增出ROP5基因片段，将该基因片段克隆至pET-28a原核表达载体表达，用重组ROP5蛋白免疫BALB／c小鼠，ELISA检测免疫后小鼠抗体和细胞因子的变化。以强毒型RH株弓形虫攻击感染免疫小鼠，统计小鼠不同时间存活率，评价重组蛋白产生的免疫保护性。结果表明ROP5重组蛋白疫苗免疫BALB／c小鼠诱导机体产生高水平的IgG、IgG1、IgG2a抗体和IFN—y、IL-2及IL-10细胞因子。与PBS及佐剂对照组相比，重组蛋白免疫组小鼠的存活时间明显延长。本实验证实了ROP5重组蛋白免疫BALB／c小鼠能够诱导其产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答，以及一定的抗弓形虫感染保护作用。