下瘀血汤对肝硬化大鼠肝组织CD68和CD163蛋白表达的影响

目的探讨下瘀血汤抗肝硬化的作用机制。方法 SD雄性大鼠ip给予硫代乙酰胺200 mg·kg-1每周2次,连续8周,制备大鼠肝硬化模型。造模成功后,模型大鼠于第9周首日ig给药下瘀血汤0.313,0.626和1.252 g·kg-1,每天1次,连续3周。于第11周末处死大鼠,取肝组织,用Western蛋白质印迹法和免疫组化法测定肝组织CD68和CD163蛋白表达;用激光共聚焦方法检测肝组织CD68+TUNEL+和CD163+TUNEL+双阳性细胞,观察ED1和ED2肝巨噬细胞凋亡。结果与正常对照组比较,模型组大鼠血清谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性增强(P<0.01),血清总胆红素(TBil)水平升高(P<0.01),血清白蛋白(Alb)水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,下瘀血汤0.626和1.252 g·kg-1组大鼠血清GPT和GOT活性以及Tbil水平均显著降低(P<0.05,P<0.01),Alb水平显著升高(P<0.01)。Western蛋白质印迹和免疫组化实验结果显示,与正常对照组比较,模型组CD68表达升高(P<0.01),CD163表达明显降低(P<0.01);与模型组相比,下瘀血汤0.626和1.252 g·kg-1组CD68表达明显降低(P<0.01),CD163表达显著升高(P<0.01)。激光共聚焦实验结果表明,与正常对照组比较,模型组大鼠CD68+TUNEL+双阳性细胞显著增加(P<0.05);与模型组比较,下瘀血汤0.626和1.252 g·kg-1组CD68+TUNEL+双阳性细胞进一步增加(P<0.05,P<0.01);所有组别均未检测到CD163+TUNEL+双阳性细胞。结论下瘀血汤对肝硬化大鼠肝功能具有改善作用,可抑制肝硬化大鼠肝组织CD68表达,促进CD163表达。

绿色荧光蛋白转基因小鼠神经干细胞在脑出血大鼠脑内移植后迁移和神经功能改变

目的:观察GFP-NSCs移植脑出血大鼠脑内后移植细胞的迁移和对神经功能缺损的影响。方法 :体外分离培养GFP-NSCs。60只雄性SD大鼠随机分为单纯脑出血组、培养液移植组和GFP-NSCs移植组,每组又分为移植后7、14、21和28 d 4个时间点。注射Ⅳ型胶原酶制作大鼠脑出血模型,3 d后注射GFP-NSCs入同侧尾状核,观察移植细胞的迁移及不同时间点神经功能的恢复情况。结果:移植后7 d,血肿周围可见大量GFP标记的移植细胞,第28天可在同侧侧脑室观察到GFP标记的移植细胞。移植后第14、21、28天行NSS评分,GFP-NSCs移植组均较其他两组功能恢复好(P<0.05)。结论:移植的GFP-NSCs能在脑出血大鼠脑内存活并迁移,对脑出血后神经功能缺损的恢复有一定的作用。

微小RNA-20a对人胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性的影响

目的 检测微小RNA(miRNA,miR)-20a在替莫唑胺(TMZ)耐药的胶质瘤细胞株中的表达,探讨胶质瘤产生TMZ耐药的机制。方法 通过浓度梯度递增法建立人脑胶质瘤TMZ耐药模型细胞株,并命名U251/TMZ。实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞株中miR-20a的表达。Western blot技术检测细胞株中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号及其下游信号的磷酸化。对U251/TMZ细胞株转染miR-20a inhibitor,并检测其细胞存活率、miR-20a表达及mTOR信号通路磷酸化。结果 与U251细胞株比较,U251/TMZ细胞株中miR-20a的表达水平明显升高(2.28±0.18比1.03±0.05,P<0.05),同时mTOR通路的磷酸化水平也升高。并且抑制miR-20a表达后,U251/TMZ细胞株的细胞存活率明显下降(P<0.01),mTOR信号通路的磷酸化水平下降。结论 miR-20a的表达可能与胶质瘤细胞对TMZ的耐药性相关,其可能通过mTOR信号通路发挥作用。