吡咯烷二硫代氨基甲酸铵对创伤性脑损伤大鼠神经炎症的作用及机制

目的探讨吡咯烷二硫代基甲酸铵(PDTC)对创伤性脑损伤(TBI)大鼠半暗带神经炎症损伤的作用及机制。方法将60只Sprague Dawley大鼠按随机数字表法分为PDTC组、TBI组、假手术组、对照组,每组15只。PDTC组大鼠于术前15 min腹腔注射PDTC(100 mg·kg-1),TBI组、假手术组及对照组大鼠腹腔注射等体积双蒸水。TBI组和PDTC组大鼠开颅窗后,将内径6.0 mm的2.5 g钢棒从内径7.0 mm聚氯乙烯透明管高度自75 cm自由下落,撞击硬脑膜致右顶叶脑挫裂伤,制备TBI模型;假手术组大鼠开颅窗后用骨蜡封闭,不施加打击;对照组大鼠正常饲养。造模后1、4、7 d,应用改良的神经损伤评分(mNSS)评估各组大鼠神经行为学损害程度;造模后2 d,取4组大鼠各5只,断头处死,取脑组织,行苏木精-伊红(HE)染色,光学显微镜下观察脑组织形态学改变;应用免疫组织化学染色检测各组大鼠脑组织中β-淀粉样前体蛋白(β-APP)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达。造模后24 h,4组大鼠各取5只,断头取右侧损伤半暗带组织,应用Western blot检测各组大鼠右侧损伤半暗带组织中核转录因子-κB(NF-κB)P65、磷酸化NF-κB P65、NF-κB抑制蛋白(IκB)、磷酸化IκB、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)及caspase-1蛋白的表达,实时定量聚合酶链式反应检测各组大鼠右侧损伤半暗带组织中NF-κB P65、IκB、NLRP3及caspase-1 mRNA的表达。结果造模后1、4、7 d,TBI组大鼠mNSS评分均显著高于PDTC、对照组、假手术组,PDTC组大鼠mNSS评分显著高于对照组和假手术组(P<0.05);假手术组与对照组大鼠mNSS评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组及假手术组大鼠的神经元及神经胶质细胞形态正常,无肿胀,细胞间质无增宽。TBI组大鼠脑组织出现弥漫性出血性改变,神经元胞体形态不一,细胞膜与细胞质分辨不清,细胞核固缩,常为三角形,正常结构及核仁皆消失,弥漫性白细胞、红细胞填充视野。PDTC组大鼠病灶周边呈缺血性改变,神经元体积轻度缩小,呈均匀淡红色,细胞核固缩,细胞核、质分离,正常结构及核仁皆消失,神经炎症局限化。对照组及假手术组大鼠脑组织无明显β-APP和GFAP表达,TBI组和PDTC组大鼠脑组织中均可见β-APP、GFAP在神经元浆膜下和(或)轴突处积累。与TBI组比较,PDTC组大鼠大脑皮质β-APP和GFAP阳性染色体神经元细胞数减少、表达强度减弱。假手术组、TBI组和PDTC组大鼠脑组织中NF-κB P65蛋白相对表达量显著高于对照组,PDTC组大鼠脑组织中NF-κB P65蛋白相对表达量显著高于TBI组(P<0.05)。PDTC组和假手术组大鼠脑组织中磷酸化NF-κB P65蛋白相对表达量显著低于对照组,TBI组大鼠脑组织中磷酸化NF-κB P65蛋白相对表达量显著高于对照组和假手术组,PDTC组大鼠脑组织中磷酸化NF-κB P65蛋白相对表达量显著低于TBI组和假手术组(P<0.05)。假手术组与对照组大鼠脑组织中IκB蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);TBI组大鼠脑组织中IκB蛋白相对表达量显著高于对照组,PDTC组大鼠脑组织中IκB蛋白相对表达量显著低对照组、假手术组和TBI组(P<0.05)。TBI组大鼠脑组织中磷酸化IκB蛋白相对表达量显著低于对照组和假手术组,PDTC组大鼠脑组织中磷酸化IκB蛋白相对表达量高于TBI组(P<0.05)。假手术组大鼠脑组织中NLRP3蛋白相对表达量显著高于对照组,TBI组和PDTC组大鼠脑组织中NLRP3蛋白相对表达量显著低于假手术组和对照组,TBI组大鼠脑组织中NLRP3蛋白相对表达量显著低于PDTC组(P<0.05)。假手术组、PDTC组及TBI组大鼠脑组织中caspase-1蛋白相对表达量显著高于对照组,PDTC组大鼠脑组织中caspase-1蛋白相对表达量显著低于TBI组(P<0.05)。PDTC组、TBI组、假手术组大鼠脑组织中NF-κB P65 mRNA相对表达量显著高于对照组,PDTC组和TBI组大鼠脑组织中NF-κB P65 mRNA水平显著高于假手术组,PDTC组大鼠脑组织中NF-κB P65 mRNA相对表达量显著低于TBI组(P<0.05)。PDTC组和TBI组大鼠脑组织中IκB mRNA相对表达量显著低高对照组,假手术组大鼠脑组织中IκB mRNA表达显著低于对照组(P<0.05);PDTC组和TBI组大鼠脑组织中IκB mRNA相对表达量显著高于假手术组,PDTC组大鼠脑组织中IκB mRNA相对表达量显著低于TBI组(P<0.05)。PDTC组和TBI组大鼠脑组织中NLRP3 mRNA相对表达量显著高于对照组,假手术组大鼠脑组织中NLRP3 mRNA相对表达量显著低于对照组,PDTC组和TBI组大鼠脑组织中NLRP3 mRNA相对表达量显著高于假手术组,PDTC组大鼠脑组织中NLRP3 mRNA相对表达量显著低于TBI组(P<0.05)。假手术组、TBI组、PDTC组大鼠脑组织中caspase-1 mRNA相对表达量显著低于对照组,TBI组、PDTC组大鼠脑组织中caspase-1 mRNA相对表达量显著高于假手术组(P<0.05)。结论PDTC可有效改善TBI大鼠神经功能缺损评分、减轻神经炎症损伤,其机制可能通过调节NF-κB/NLRP3轴相关炎症损伤指标mRNA和蛋白表达及调控下游炎症因子而发挥作用。

褪黑素与妊娠期高血压疾病的关系研究进展

褪黑素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)为多效性神经内分泌脂溶性小分子物质,主要由松果体分泌。妊娠期间,孕妇夜间褪黑素水平随着妊娠期的进展而升高,产后恢复正常。妊娠期高血压疾病病因复杂,越来越多的证据表明褪黑素参与妊娠期高血压疾病的调控,该调控与褪黑素表达水平、分泌节律和受体水平存在相关性。胎盘血液循环灌注异常、缺血缺氧和孕妇全身血管内皮功能障碍是妊娠期高血压疾病的主要病理生理过程。褪黑素通过直接抗氧化作用,改善线粒体功能障碍和保护滋养层细胞免受氧化损伤,参与胎盘氧化应激水平调控,在防止胎盘缺氧缺血再灌注引起的氧化损伤中发挥保护作用,从而维持胎盘功能稳态。此外,也有证据显示褪黑素通过减少促炎细胞因子以及血管活性化合物的产生和分泌来保护母体血管内皮免受氧化应激损伤,参与孕妇全身血压的调控。这些发现均提示褪黑素可通过氧化应激的调控参与妊娠期胎盘和全身血管功能稳态的维持。该文以褪黑素对妊娠期高血压疾病的影响及相关机制为切入点进行综述,总结了褪黑素在妊娠期高血压疾病发病进程中所发挥的积极作用。

改良大鼠股静脉穿刺置管术的实验研究

目的 显微技术下比较两种股静脉穿刺置管术的差异及其应用效果。方法 显微技术下分离SD大鼠股静脉,分别用针管回缩式静脉留置针(实验组)及普通穿刺针(对照组)穿刺置管。成功后肝素封管,结扎固定,血管造影进一步确认穿刺成功。注射造影剂,X线显影,估计大鼠血液循环时间。结果 实验组的手术时间、总体成功率均优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),2组穿刺并发症发生率差异均无统计学意义(P>0.05)。血管造影显示成年大鼠血液循环时间为(11.20±1.15)s。结论 针管回缩式静脉留置针较穿刺普通针具有稳定可靠、简便易行、可重复性强,以及血流动力学稳定优势。可为后续建立创伤性脑损伤模型、伊文斯兰染色,以及药物干预奠定基础。

大鼠自由落体创伤性脑损伤动物模型的建立

目的将实验与临床相结合,探索建立稳定可靠、简便易行、可重复性的创伤性脑损伤动物模型,为临床研究奠定基础。方法40只雄性Sprague Dawley大鼠,分为假手术组与轻、中、重度组(A、B、C组)各10只。参照Feeney损伤模型,轻、中、重度组分别按打击高度(50、75、100 cm)使重量为4.5 g的钢棒自由下落打击大鼠硬脑膜建立动物模型,观察各组大鼠伤后神经行为学、脑组织形态学、病理学、免疫学改变。结果损伤后改良的神经损伤评分(modified neurological severity score,mNSS)随打击高度增加而升高(P<0.05),均高于假手术组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果提示与假手术组比较,随着打击高度的增加,光镜下可见神经基质紊乱、神经元肿胀、细胞周围间隙和血管间隙红细胞渗出,神经元细胞及胶质肿胀变性,细胞核肿大变形。免疫组织化学染色结果提示,与假手术组比较,轻、中、重度组大脑皮质β-APP、GFAP阳性表达程度增强。3组大鼠损伤后改良的神经损伤评分(mNSS)随打击高度增加而升高,均高于假手术组。差异均有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果提示,与假手术组比较,随着打击高度的增加,光镜下可见神经基质紊乱、神经元肿胀、细胞周围间隙和血管间隙红细胞渗出,神经元细胞及胶质肿胀变性,细胞核肿大变形。免疫组织化学染色结果提示,与假手术组比较,A、B、C组大脑皮质β-APP、GFAP阳性表达程度增强。结论自由落体打击大鼠硬脑膜,可成功建立创伤性颅脑损伤动物模型,其病理学特征明显,重复性和稳定性好。

创伤性脑损伤大鼠脑组织中α-酮戊二酸脱氢酶的活性变化及意义

目的探讨创伤性脑损伤(TBI)大鼠脑组织中α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)活性变化及意义。方法将80只Sprague Dawley大鼠随机分为假手术组、TBI组、TBI-溶剂对照组、TBI-3-甲基-2-氧基戊酸(KMV)组,每组20只。TBI组、TBI-溶剂对照组和TBI-KMV组大鼠建立中度液压TBI模型,假手术组大鼠给予相同的手术步骤,但不实施液压冲击。TBI前24 h,TBI-KMV组大鼠侧脑室注射10μL KMV,TBI-溶剂对照组大鼠侧脑室注射10μL生理盐水,注射速度为lμL·min^-1;假手术组和TBI组大鼠侧脑室不做注射。分别于TBI后24、72 h及7 d时,每组随机选取5只大鼠,采用Shapira和Wahl脑损伤神经功能评分法进行神经功能评分,Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆功能;Morris水迷宫实验后快速断头处死大鼠,完整取出脑组织,迅速分离出损伤侧大脑皮层、海马及丘脑,采用比色法检测脑组织中α-KGDHC活性。TBI后72 h,每组随机选取5只大鼠,应用40 g·L^-1多聚甲醛溶液灌注固定,断头取脑组织,采用Fluoro-Jade染色液对坏死神经元进行染色并计数。结果TBI后24、72 h及7 d,TBI组和TBI-溶剂对照组大鼠神经功能评分显著低于假手术组(P<0.05),TBI-KMV组大鼠神经功能评分显著低于TBI-溶剂对照组和TBI组(P<0.05),TBI-溶剂对照组与TBI组大鼠神经功能评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。TBI后24、72 h及7 d,TBI组和TBI-溶剂对照组大鼠登台时间及登台累计距离显著长于假手术组(P<0.05),TBI-KMV组大鼠登台时间及登台累计距离显著长于TBI-溶剂对照组和TBI组(P<0.05),TBI-溶剂对照组与TBI组登台时间及登台累计距离比较差异无统计学意义(P>0.05)。TBI后24、72 h及7 d,TBI组和TBI-溶剂对照组大鼠损伤侧大脑皮层、海马及丘脑组织中α-KGDHC活性显著低于假手术组(P<0.05),TBI-KMV组大鼠大脑皮层、海马及丘脑组织中α-KGDHC活性显著低于TBI组和TBI-溶剂对照组(P<0.05),TBI-溶剂对照组与TBI组大鼠大脑皮层、海马及丘脑组织中α-KGDHC活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。TBI后72 h,TBI组和TBI-溶剂对照组大鼠损伤侧大脑皮层、海马和丘脑坏死神经元数显著多于假手术组(P<0.05),TBI-KMV组大鼠损伤侧大脑皮层、海马和丘脑坏死神经元数显著多于TBI组和TBI-溶剂对照组(P<0.01),TBI组与TBI-溶剂对照组大鼠损伤侧大脑皮层、海马和丘脑坏死神经元数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论TBI大鼠脑组织中α-KGDHC活性降低,抑制α-KGDHC活性可加重脑损伤,α-KGDHC可能参与了TBI和继发性脑损伤的发生与发展。

动静脉夹闭在创伤性脑损伤大鼠脑组织固定中的应用效果

目的探讨下腔静脉腹主动脉夹闭在大鼠创伤性脑损伤后脑组织在体心脏灌流固定术中的应用效果。方法自由落体打击诱导中度创伤性脑损伤24 h后,股静脉穿刺置管静脉注射伊文斯兰染色,对照组行左心室心脏灌流,实验组左心室心脏灌流同时夹闭下腔静脉胸主动脉。断头取脑常规HE染色及免疫组化染色。结果实验组灌注固定成功率为93.33%,高于对照组灌注固定法的80.00%,实验组灌注时间(102.25±4.12)s,对照组灌注时间(248.53±4.10)s,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组灌注液使用量(103.85±3.12)mL,对照组使用量(148.12±3.16)mL,差异有统计学意义(P<0.05)。两种方法灌注固定损伤区蓝染,光镜下星形胶质细胞肿大,神经元核固缩。结论与对照组比较,实验组灌注成功率高,灌注时间缩短,灌注液使用减少,节约试剂,且可以取得与传统方法固定脑组织相同的良好效果。

改良钻孔引流术治疗创伤性迟发性双侧骑跨横窦硬膜外血肿的效果

创伤性迟发性双侧骑跨横窦硬膜外血肿(TDBEHSTS)临床发生率低,但病情凶险。由于起病隐匿,随病程进展可出现急性临床病情恶化,甚至危及生命迟发性血肿出血来源为静脉源性,临床表现与血肿体积不成正比,使得病情评估及手术时机方式选择面临困惑。精确病情评估和手术方式选择与预后密切相关。微创手术对静脉来源硬膜外血肿的治疗效果好,已获临床广泛认可但改良钻孔引流手术对于TDBEHSTS的治疗效果及技巧尚无相关临床经验。笔者采用回顾性病例系列研究分析2008年1月至2020年12月河南科技大学第一附属医院及医联体医院收治的17例TDBEHSTS患者临床资料,探讨改良钻孔引流术对TDBEHSTS的治疗效果.

序贯缝粘术对颅颌面皮肤挫裂伤效果的分析

目的探讨序贯缝粘术对颅颌面皮肤挫裂伤的效果。方法 2018年1月至2020年7月, 河南科技大学第一附属医院急诊科收治颅颌面皮肤挫裂伤患者189例(男134例、女55例, 26~38岁), 分为序贯缝粘组66例、美容缝合组63例、常规缝合组60例。比较3个组手术时间, 术后24 h视觉模拟评分(VAS), 6个月时温哥华瘢痕量表(VSS)及不良反应发生率, 评估疗效及满意度。结果序贯缝粘组手术时间为(10.67±1.26) min, 显著少于美容缝合组(18.91±1.38) min与常规缝合组(17.96±1.43 ) min(均P<0.05)。序贯缝粘组术后24 h VAS为(3.11±1.01)分, 较美容缝合组及常规缝合组显著降低(t=3.84, P<0.05)。序贯缝粘组术后6个月VAS为(1.18±0.21)分, 显著小于美容缝合组(3.78±1.01)分(t=2.13, P<0.05)及常规缝合组(5.98±1.06)分(t=1.21, P<0.01)。序贯缝粘组总有效率为96.5%, 显著高于美容缝合组(85.7%, χ^(2)=8.41, P<0.05)及常规缝合组(56.1%, χ^(2)=8.62, P<0.01);美容缝合组总有效率显著高于常规缝合组(t=4.12, P<0.05)。序贯缝粘组术后伤口感染率、裂开率均低于美容缝合组及常规缝合组(χ^(2)=6.13, P<0.01)。序贯缝粘组满意率(99.0%)显著高于美容缝合组(89.1%)及常规缝合组(71.3%, χ^(2)=4.15, P<0.05);美容缝合组满意率显著高于常规缝合组(χ^(2)=3.92, P<0.05)。结论序贯缝粘术治疗颅颌面部皮肤挫裂伤操作简单, 效果较好, 并发症少, 患者满意度高, 值得临床应用。