微生物絮凝剂的制备及絮凝条件的研究

报道微生物絮凝剂制备工艺，初步分析微生物絮凝剂的组分。研究了3株絮凝剂产生菌JIM-15、JIM-89和JIM-127产生的絮凝剂的絮凝条件。分别考察了PH、Ca2+、温度、样品加量等理化因素对絮凝的影响，以及絮凝剂对不同微生物菌悬液的絮凝作用。

微生物絮凝剂产生菌的筛选和发酵条件研究

设计了微生物絮凝剂产生菌菌种筛选模型,并从土壤和活性污泥中筛选到51株絮凝剂产生菌,经复筛获得两株絮凝活性较高的菌株,分别定名为Nocardia,JIM-89和JIM-127。对两株菌的发酵条件,特别是培养基组成,进行了初步研究。两株菌所产生的絮凝剂,对大肠杆菌悬液20min的絮凝活性在1000u/ml,最高可达1248u/ml。

多核丝状真菌的选育及遗传稳定性

细胞中多核体的存在 ,对其隐性突变体的分离及优良形状的稳定遗传产生了相当大的障碍。通过采用大剂量的NTG诱变多核单细胞丝状真菌三孢布拉霉JMβ817的孢子 ,再经紫外线复合照射该孢子制备成的原生质体 ,使其高产菌株———超黄突变体的隐性基因CarS和CarD得以表达 ,从中分离到一株CarS隐性突变株JMβ2 87,β -胡萝卜的产量达到 2 36g/l,比出发菌株提高了 30 %。并通过孢子的亚培养进行定向选育 ,使高产性状得以稳定遗传 ,为促进工业化发酵生产天然 β -胡萝卜提供了必要的手段。

凝血酶制备工艺的研究

目的从猪血中分离纯化凝血酶。方法采用离子交换树脂法对从猪血制备获得的凝血酶进行纯化 ,并考察凝血酶原的激活条件。结果离子交换树脂法纯化的凝血酶平均比活为 36 .5u/mg ,凝血酶原的最佳激活条件为 :CaCl2 浓度 1 .0 % ,时间 1 5min ,温度 37℃。结论离子交换树脂法分离纯化凝血酶的工艺是可行的 ,适用于规模化生产。

标记免疫分析技术在食品分析中的应用

本文介绍了标记免疫分析技术的原理、分类、应用,重点介绍了酶联免疫吸附分析技术在食品分析中的应用进展.

微生物新药创制的思路与方法

微生物药物是新药研究与开发中极其重要的领域之一。结合本单位二十多年来在微生物制药研究过程中的经验与体会,探讨微生物新药创制的思路与方法。

营养和环境条件对生物絮凝剂合成的影响

在考察了红平红球菌RhodococcuserythropolisCCRC10 90 9基本生长代谢特性的基础上 ,研究了营养条件对生物絮凝剂合成的影响 .R .erythropolisCCRC10 90 9合成的絮凝剂约 80 %以上分泌至胞外培养基中 ,仅 2 0 %左右的絮凝活性存在于菌体细胞上 .蔗糖是该菌生长及絮凝剂合成的最佳碳源 ;玉米浆既能刺激菌体生长 ,又能显著提高絮凝剂的水平 .生物絮凝剂的合成与培养基碳氮比密切相关 :碳氮比在 2 0～ 30之间时 ,絮凝活性达到最大 ;碳氮比低于 10或高于 10 0后 ,絮凝活性迅速下降 .提出了促进絮凝剂合成的控制策略 :发酵前期适当提高玉米浆的浓度 ,发酵后期按碳氮比为 2 0～ 30 ,补加一定量的蔗糖和尿素 .实验结果表明 ,采用这一策略 ,最终发酵液的絮凝活性和细胞生长量分别增长了 8%和 33.3% .图 9表 4参

利用可重复使用的URA3标记基因建立热带假丝酵母基因敲除系统

热带假丝酵母(Candida tropicalis)在发酵工业中具有重要的应用潜力,但二倍体遗传结构和较低的遗传转化效率限制了其代谢工程育种技术的应用。建立可靠的遗传转化技术并高效的删除目的基因是代谢工程改造热带假丝酵母的重要前提。文章以C.tropicalis ATCC 20336为出发菌株,通过化学诱变筛选获得了尿嘧啶缺陷型突变株C.tropicalis XZX(ura3/ura3)。以丙酮酸脱羧酶(Pyruvate decarboxylase,PDC)基因作为靶基因构建了两端包含同源臂并在选择性标记C.tropicalis URA3(Orotidine-5′-phosphate decarboxylase,乳清酸核苷-5-磷酸脱羧酶)基因两侧同向插入源于沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的hisG序列的基因敲除盒PDC1-hisG-URA3-hisGPDC1(PHUHP),并转化宿主菌株C.tropicalis XZX,筛选获得PHUHP片段正确整合到染色体的PDC基因位点的转化子XZX02。在此基础上,将转化子XZX02涂布于5-FOA(5-氟乳清酸)选择培养基上,筛选得到URA3基因从PHUHP片段中丢失的营养缺陷型菌株XZX03。进一步构建了第2个PDC等位基因的删除表达盒PDCmURA3-PDCm,并转化C.tropicalis XZX03菌株,获得转化子C.tropicalis XZX04。经PCR和DNA测序确认转化子C.tropicalis XZX04细胞染色体上的两个PDC等位基因被成功敲除。文章建立了一种营养缺陷型标记可重复使用的热带假丝酵母遗传转化技术,利用该技术成功敲除了细胞的PDC基因,为进一步利用代谢工程改造热带假丝酵母奠定了基础。

赤藓糖醇发酵工艺研究

赤藓糖醇的制备方法主要为微生物发酵法。为提高圆酵母(Torulasp.)B84512转化葡萄糖生产赤藓糖醇的发酵产量,采用控制发酵过程中葡萄糖起始浓度(30.0%)、中间流加葡萄糖浆的工艺使总葡萄糖糖浓度达到40%,发酵120h可产赤藓糖醇162.5gL,生产率为1.35gL·h,而不采取中间流加工艺,起始葡萄糖浓度为40.0%,发酵120h可产赤藓糖醇120gL,生产率为1.00gL·h。通过研究发现在赤藓糖醇发酵过程中采取中间流加葡萄糖工艺,能大大提高赤藓糖醇的发酵水平,提高幅度达30-35%,生产率也有相应提高。

生物絮凝剂的絮凝条件

研究了红平红球菌 (Rhodococcuserythropolis)CCRC 1 0 90 9产生的生物絮凝剂REA 1 1的絮凝条件 .REA 1 1在偏酸性范围内 (pH 3.0～ 6.5) ,絮凝活性稳定 ,耐热性较强 ,热稳定范围可高达 80℃ .CaCl2 、AlCl3、CaO、FeCl3、FeSO4、MgCl2 、NaCl、KCl均能不同程度地提高REA 1 1的絮凝活性 .其中 ,CaCl2 和FeSO4的助凝效果较好 .在实验体系中 ,CaCl2 的最佳助凝浓度为 8mmol/L ;絮凝体系中缺少CaCl2 或CaCl2 浓度过高 (大于 2 5mmol/L)都会明显降低REA 1 1的絮凝活性 .助凝离子Ca2 +浓度与絮凝剂的最适投加量存在密切关系 ,CaCl2 浓度的增大使REA 1 1的最适投加量呈降低趋势 .

耐氨米根霉发酵生产L-乳酸的研究

传统的L-乳酸发酵法生产以CaCO3为酸中和剂,在乳酸后提取中产生的大量石膏废渣不仅在过滤时造成较大的乳酸损失,而且由于废渣不易处理,对L-乳酸万吨级规模的生产将形成巨大的环保压力和废渣处理成本。为此,为了降低L-乳酸生产成本,该文采用氨水为酸中和剂,用筛选得到的一株米根霉RhizopusoryzaeJS-N02-02进行以氨水为中和剂的L-乳酸摇瓶、15L自动发酵罐的发酵试验。以玉米粉双酶水解糖为碳源,接种孢子浓度1×105个ml,以0.01%(NH4)2SO4为氮源,30℃,15L自动发酵罐连续5批发酵,平均总糖浓度为136.8gL,平均产酸达100.6gL,L-乳酸纯度达95.3%,糖酸转化率达71.6%。

酶联免疫吸附法检测罂粟碱研究 (Ⅱ)抗体制备和酶标抗原合成

利用前文制备的罂粟碱 -牛血清白蛋白 (Pap -BSA)偶联物作为免疫抗原 ,免疫新西兰大白兔 ,获得效价为 1:3 2的特异性抗罂粟碱免疫球蛋白 (抗体 )。同时 ,合成了罂粟碱 -辣根过氧化物酶 (Pap -HRP)结合物 (酶标抗原 ) ,抗体和酶标抗原特性的鉴定结果令人满意。

新型甜味剂——赤藓糖醇产生菌的筛选

从土壤、酿造食品、花粉等样品中分离赤藓糖醇产生菌的方法 ,分离得到约 30 0株耐高渗酵母 ,其中有 3株菌产赤藓糖醇 ,2 6 0 8在葡萄糖培养液中可产赤藓糖醇 32mg/ml。

猪血凝血酶的制备

从猪血制备凝血酶 ,对丙酮沉淀法和离子交换树脂法进行了比较 ,结果表明 ,两种方法的得率分别为 2 30 0u/L和5 6 0 0u/L ,酶比活分别为 15u/mg和 36 5u/mg。

赤藓糖醇产生菌B845的形态、生理特征

分离筛选到了一株产赤藓糖醇能力高的菌种B84 5 ,通过对B84 5的形态、生理生化特性试验 ,发现该菌耐高渗 ,能发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖 ,细胞为圆形、椭圆形 ,单边或多边芽殖 ,有真菌丝 ,在固体培养基上培养 7d后颜色开始变深 ,由黄色变成褐黑色 ,参阅真菌鉴定手册 ,初步鉴定为圆酵母属菌 (Torulasp.)

皂化法分离测定三孢布拉氏霉菌体中辅酶Q_(10)的研究

目的：为研究醇碱皂化法分离三孢布拉氏霉菌体中辅酶Q10的最佳工艺。方法：采用正交实验，对醇碱皂化法分离测定三孢布拉氏霉菌体中辅酶Q10的各工艺条件进行了研究。结果：皂化时间、醇碱浓度及焦性没食子酸添加量对皂化效果影响显著，而温度（50—90℃）对其影响较小。醇碱皂化法提取三孢布拉氏霉中辅酶Q10的最佳工艺条件为：KOH加入量为湿菌体的1／2（w／w），醇碱浓度为10％，焦性没食子酸量添加量为湿菌体的10％（w／w），在70℃下皂化60min。此提取工艺平均回收率达81．8％，RSD为2．6％。

酶联免疫吸附法检测罂粟碱研究Ⅲ测试盒指标的确立及验证

目的:研究能检测食品中罂粟碱含量的酶免测试盒。方法:利用研制的罂粟碱抗体,罂粟碱酶标抗原以及相关的ELISA其它试剂,进行测试盒的各项技术指标的确证。结果:结果表明:测试盒的最低检测限:0.1ng/ml;定量检测范围:0.1～20ng/ml;精密度(批内CV%):5.7%～9.1%;样品加标回收率79%～123%;与类似生物碱的交叉反应率很低(<1.7%);测试盒4℃下保存期可达6个月以上;与HPLC法和免疫胶体金法对比实验表明,有良好的一致性。结论:研制的罂粟碱酶免测试盒能定性定量检测食品中的罂粟碱含量。

圆酵母B84512单倍体的制备及其产赤藓糖醇特性分析

圆酵母B84512为工业用赤藓糖醇生产菌株,为获得其遗传育种单倍体亲本,以Mcclary产孢培养基进行该菌株子囊孢子萌发,萌发条件为:30℃,培养7 d,菌株产孢率为45%;以蜗牛酶裂解子囊孢子细胞壁150 min,共筛选出10株单倍体菌株,其中3株在发酵培养基中合成赤藓糖醇的能力相对较高,分别命名为Torula sp.B84512-7,Torula sp.B84512-8及Torula sp.B84512-9。经PCR验证,前两者为α型,后者为a型。将3株单倍体两两杂合,发现杂合子Torula sp.B84512-79的发酵性能最佳,赤藓糖醇产量高达97 g/L,约为出发菌株的56%。赤藓糖醇产量较高的单倍体亲本Torula sp.B84512-7及Torula sp.B84512-9可用于基因工程育种。

三孢布拉氏霉合成辅酶Q_(10)及其代谢调控

对三孢布拉氏霉代谢产物的分析表明,该菌能够合成辅酶Q10,且正株合成辅酶Q10的能力高于负株。当正负菌株以5∶1混合培养时,辅酶Q10产量最高。三孢布拉氏霉合成辅酶Q10是遵循经典的辅酶Q10生物合成途径的,本实验选育到具有L-甲硫氨酸和D-酪氨酸或对氨基苯丙氨酸双重抗性标记的突变菌各一株,其辅酶Q10产量较出发菌株分别提高了76.7%及94.2%。