中国重要外来物种紫茎泽兰的研究现状

紫茎泽兰曾被作为观赏性植物引入欧洲、澳洲、南美洲、亚洲等地,如今却成为我国最具侵害性的杂草之一。本文综述了外来恶性杂草紫茎泽兰的植物学特征、分布、入侵机制、危害性,以及对它的防除与综合利用。

基于环介导等温扩增技术检测橡树疫霉菌

应用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了基于颜色判定的简单、快速和灵敏的橡树疫霉菌(Phytophthora ramorum)检测方法。以ITS为靶序列对橡树疫霉菌的分子检测存在无法区分近似种的问题,笔者在橡树疫霉菌的基因组研究中,发现了PrA3aPro类转座子序列。生物信息学分析表明,该序列非常适合作为大豆疫霉分子检测的靶标。利用LAMP技术,以PrA3aPro为靶序列,设计LAMP特异性引物,建立LAMP反应体系与条件,并进行灵敏度和特异性试验。结果表明:整个检测过程仅需1 h,即可通过肉眼直接目测试验结果。在等温条件下(64℃)进行核酸扩增反应1 h,然后经3种方法验证扩增结果:1)浊度仪验证浊度变化;2)琼脂糖凝胶电泳验证;3)在扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,根据HNB的颜色变化判定。特异性试验中,在橡树疫霉菌株中能够产生浊度曲线,扩增到梯形条带,同时HNB显色观察到天蓝色的阳性反应,而在其他疫霉、腐霉和真菌供试菌株中均没有观察到这些现象。在灵敏度试验中,PrA3aPro-LAMP技术最低检测限为1 ng.μL-1。该方法的建立为橡树疫霉菌的检疫及其所致病害的快速诊断提供了新的技术。

环介导等温扩增技术在病原物检测上的应用研究进展

环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）采用特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在等温条件（60~65℃）下60 min左右进行核酸扩增,其扩增效率可达到109~1010个数量级,具有特异性强、灵敏度高、等温、操作简单和检测结果快速等优点。该技术已广泛应用于病毒、细菌、寄生虫、菌物等病原物的检测中,在人、畜和植物病原生物的快速检测和病害诊断等领域具有广阔的应用前景。本文对LAMP技术原理及其在病原物检测中的应用做了简要综述,并对LAMP技术的应用前景进行了展望。

双重PCR方法检测检疫性细菌洋葱腐烂病菌和菊基腐病菌

为建立同步检测检疫性细菌洋葱腐烂病菌和菊基腐病菌的双重PCR方法,根据Gen Bank上公布的洋葱腐烂病菌ITS序列设计1对特异性引物B3/B6,将设计的引物与已发表的检测菊基腐病菌特异性引物ADE1/ADE2结合,经过条件优化,建立了双重PCR反应体系,并进行特异性和灵敏度验证。应用双重PCR体系能从洋葱腐烂病菌和菊基腐病菌基因组DNA以及人工带菌样品中扩增到特异性条带。结果表明,建立的双重PCR检测方法能同时检测出洋葱腐烂病菌和菊基腐病菌,可应用于口岸进口郁金香种球2种检疫性细菌的检测。

大豆茎褐腐病菌环介导等温扩增检测技术的建立

[目的]应用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立基于颜色判定的简便、快速和灵敏的大豆茎褐腐病菌[Phialophora gregata f.sp.sojae(PGS)]检测方法。[方法]利用LAMP技术,以ITS为靶序列,设计了4条特异性的LAMP引物和2条环引物,在此基础上建立了检测大豆茎褐腐病菌的LAMP体系。[结果]整个检测过程仅需1 h就可通过肉眼直接目测试验结果。在等温条件下(64℃)进行核酸扩增反应1 h,在扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,根据HNB的颜色变化可以判断PGS的存在与否。特异性试验中,大豆茎褐腐病菌菌株DNA扩增后HNB呈天蓝色的阳性反应,而在其他大豆常见病害的供试菌株中均呈紫色的阴性反应。在灵敏度试验中,ITS-LAMP技术最低检测限为10 pg·μL-1,对于进口大豆残体样本中PGS的检测灵敏度为每10 g大豆植株残体50个孢子。[结论]该方法的建立为检疫性病害大豆茎褐腐病菌的检测提供了新的技术平台,符合我国口岸对大豆茎褐腐病菌快速检测的迫切需要。

进境百合种球上3种线虫的检疫鉴定研究

本文通过改良贝曼漏斗法分离收集进境荷兰百合种球及其介质土中携带的线虫,对江苏口岸首次截获的3种线虫进行检疫鉴定研究,以期为口岸进境花卉种球检疫监管提供参考。结果表明,经形态特征观察、显微测计及核糖体DNA28S D2/D3区序列分析,3种线虫分别为洞穴长尾线虫(Seinura caverna)、毁芽滑刃线虫(Aphelenchoides blastophthorus)和燕麦真滑刃线虫(Aphelenchus avenae),均为江苏口岸首次截获。目前,洞穴长尾线虫、毁芽滑刃线虫国内报道较少。

哈萨克斯坦小麦过境“集改集”检验检疫监管措施与操作规范

集装箱转集装箱(简称“集改集”)运输方式是哈萨克斯坦小麦过境中国从连云港口岸离境的主要运输方式,通过对“集改集”运输方式实施检验检疫监管研究,提出了针对性检验检疫监管措施和操作规范,以期为相关工作人员提供参考。

“科带室”深度融合管理模式的选择及其科学内涵

本文通过对检验检疫及植物检疫等技术执法机构"科"与"室"分工协作管理模式的分析,对"科带室"深度融合管理模式的选择和科学内涵进行深入探讨,为基层植物检疫确立"科""室"融合发展思路、构建"科带室"深度融合管理机制提供参考。

引起大豆红冠腐病的冬青丽赤壳菌快速分子检测

利用冬青丽赤壳菌(Calonectria ilicicola)的β-tublin基因特异性序列设计PCR引物,能成功将大豆红冠腐病菌与其他近似种及相关种区分开,灵敏度达到1 ng/μL,可以用于检测接种发病的植株样品。同时建立了C.ilicicola的实时定量PCR检测体系,灵敏度提高1 000倍。本研究建立的方法对冬青丽赤壳菌引起的大豆红冠腐病的实时监测有重要的指导意义。

逆转录环介导等温扩增技术检测烟草脆裂病毒

为实现进境种球中烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)的快速检测,本研究应用逆转录环介导等温扩增技术,建立了TRV-RT-LAMP检测方法,在60℃,60 min条件下,能特异性地检测到TRV,灵敏度可达到10 pg/μL,是普通RT-PCR的100倍。用SYBR Green I染色后可以使检测结果可视化,方便快速。同时结合RNA粗提,建立了一步法RT-LAMP技术,可以快速检测植株中的TRV。