利用受体漂白荧光共振能量转移技术研究β-分泌酶在活细胞内的二聚化

β淀粉样肽(Aβ)在阿尔茨海默病(AD)患者脑内的产生、聚集和沉积是AD的一个固有病理特征,也被普遍认为是AD的重要发病机理之一.β-分泌酶(BACE)对淀粉样前体蛋白(APP)的裂解是Aβ产生的关键步骤,β-分泌酶抑制剂是AD药物治疗的一个重要发展方向,因此对BACE结构的了解具有重要意义.利用受体漂白荧光共振能量转移(FRET)技术首次在活细胞内研究BACE的二聚化结构.通过基因工程技术分别构建了青色荧光蛋白(CFP)和黄色荧光蛋白(YFP)标记的全长BACE(BACE-FL)和BACE活性部分(BACE-NT),应用共聚焦荧光显微镜和受体漂白FRET技术研究了BACE-FL和BACE-NT在细胞中的表达和定位,以及它们在活细胞内的存在形式.实验结果表明:a.BACE-FL在内质网至细胞膜均有表达,主要分布在高尔基体、细胞膜和内体等细胞器中,而BACE-NT则被滞留在内质网里.b.BACE-NT是单体结构,而BACE-FL在活细胞内则以二聚体的形式存在.证明,BACE的跨膜序列和C端对BACE的转运和定位具有重要作用,其二聚体结构由这些序列决定,而不由其活性位点决定.

利用非侵入性光学成像技术监测在体肿瘤的生长

利用电穿孔技术将gfp表达质粒转染于SP2/0细胞,通过G418筛选获得稳定表达GFP的小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0-GFP细胞。将稳定的转化细胞移植于同系BALB/c小鼠后腿、耳部皮下及腹腔成瘤,每隔一天对小鼠肿瘤成像,跟踪肿瘤的生长过程。结果表明,探测到的GFP荧光强度和发光范围与肿瘤的生长或消亡相关,从而证明可以利用GFP作为肿瘤细胞的标记,结合光学成像技术,对肿瘤生长过程实时追踪。

利用基于GFP的FRET探针检测β-分泌酶的活性

β淀粉样肽(amyloidβ-peptide,Aβ)在阿尔茨海默病(Alzheimeir’s disease,AD)患者脑内的异常产生和积累在AD的发病机理中扮演着重要的角色。β-分泌酶对淀粉样前体蛋白的裂解是Aβ产生的关键步骤,因此抑制β-分泌酶的活性成为AD药物治疗的一个重要策略。为了检测β-分泌酶的活性,应用基因工程技术将β-分泌酶作用底物序列(NFEV)的两端分别与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的颜色突变体--青色荧光蛋白(cyan fluorescent protein,CFP)和黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP)相连,构建了一个基于GFP的荧光能量共振转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)探针。荧光光谱分析结果显示,该荧光融合蛋白中CFP和YFP之间存在着较强的FRET。而当与β-分泌酶进行孵育后,FRET逐步降低,证明该探针能被β-分泌酶酶切。SDS-PAGE分析显示探针与β-分泌酶孵育后,荧光融合蛋白由60 kD大小逐渐变成30kD大小的蛋白,表明探针被β-分泌酶酶切成CFP和YFP分子,证实了荧光光谱的结果。这些结果表明,可通过检测探针的FRET效率方便地分析β-分泌酶的活性,为进一步筛选β-分泌酶的抑制剂提供了一个平台。

加速康复外科理念在单孔胸腔镜肺叶切除术患者围手术期护理中的应用

目的探讨加速康复外科(ERAS)理念在单孔胸腔镜肺叶切除术围手术期护理中的应用效果。方法选取2015年3月至2017年3月该院收治的102例在胸腔镜下行肺叶切除术患者,并随机分为对照组(36例)和观察组(66例),对照组实施常规围手术期护理,观察组在对照组基础上应用ERAS理念。结果观察组术后肺部感染和肺不张发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组术后第2~5天最高疼痛评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组首次下床活动时间及平均住院时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论将ERAS理念运用于单孔胸腔镜肺叶切除术患者围手术期护理中,可降低肺部感染、肺不张并发症发生率,能显著减轻术后第2~5天疼痛和缩短住院时间,值得临床推广。

亚硒酸钠诱导SW480细胞凋亡过程中活性氧的作用

为探讨亚硒酸钠诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的机理。将荧光探针2′,7′-二氯荧光黄乙二脂 (2′,7′-DCFH -DA)、罗丹明123(rhodamine123)负载人结肠癌细胞 ,利用多光子成像系统测定胞内活性氧 (ROS)、线粒体跨膜电位 (ΔΨm)的变化。结果发现 (1)Na2SeO3 作用SW480细胞 ,可导致细胞凋亡和胞内的ROS增加 ,SOD、过氧化氢酶可降低凋亡率并抑制ROS的增加。 (2)线粒体电子传递链抑制剂鱼藤酮及氰化钠可抑制ROS增加。 (3)Na2SeO3 可导致线粒体的跨膜电位的下降。表明Na2SeO3 作用细胞可导致来源于线粒体的ROS增加 。

重型颅脑损伤患者气管切开术后气道梗阻的原因及护理对策

目的探讨重型颅脑损伤患者气管切开术后并发气道梗阻的原因及护理对策。方法选取2012年5月至2017年5月该院神经外科病房及重症监护病房收治的行气管切开术重型颅脑损伤患者162例,根据采用的护理方式不同,将其分为观察组(113例)和对照组(49例),对其进行回顾性分析。结果观察组术后抗生素使用时间[(11.65+0.20)d]明显短于对照组[(15.71+0.40)d],术后第1、7天SPO2<95%的发生率均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),而术后第3天,SPO2<95%发生率术后并发刺激性呛咳发生率与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);而观察组吸气性呼吸困难和喘累发生率均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论选择合适的气管切开套管,术后正确湿化气道,选择合适的吸痰时机、管道固定得当、松紧适宜,正确管理气囊,及时更换导管等可以避免发生气道梗阻。

生活垃圾分类中的社区动员与居民参与——以A市垃圾分类小区为例

本文以A市垃圾分类小区为例,探讨了社区生活垃圾分类动员的现状及其问题。研究发现,社区动员存在动员范围小、覆盖面低、宣传表面、效率低等问题,导致居民对垃圾分类政策知晓度低、参与率低。在此基础上,提出针对性宣传、根据居民特征拓宽动员途径以及培育社区志愿团体等建议,适用于与A市具有动员刚起步、群众基础弱、实行效率低等类似特征的地区。

生物组织黏弹性激光散斑检测方法研究进展

生物组织的黏性和弹性在许多疾病发生和发展的过程中会发生改变,因此检测生物组织黏弹性对疾病诊疗具有重要意义。基于此,介绍了基于激光散斑技术的生物组织黏弹性测量方法。从弹性波调制下的激光散斑衬比变化,布朗运动下的光强自相关函数和低频交变应力作用下的散斑位移3个方面,分别介绍生物组织黏弹性激光散斑检测的理论基础和研究现状。

面向恶性肿瘤早期诊断与药物研发的光学分子成像

随着光学成像技术、光学标记技术和基因组学/蛋白质组学的发展,光学分子成像在生命科学研究领域发挥着越来越重要的作用。

H_(2)S供体NaHS对渗透胁迫下美国剑麻干旱适应性及抗氧化特性的影响

【目的】美国剑麻(Agave americana)是热带地区一种具有高经济价值的、重要的景天科酸代谢(CAM)植物,研究其干旱适应性可为CAM植物的耐旱机制研究提供理论依据。【方法】通过对美国剑麻进行1.0 mmol/L NaHS(NS)、10%PEG(聚乙二醇,PEG10)、20%PEG(PEG20)、1.0 mmol/L NaHS+10%PEG(NS+PEG10)、1.0 mmol/L NaHS+20%PEG(NS+PEG20)的处理,以不添加PEG和NaHS的处理为对照,研究美国剑麻组培苗对PEG渗透胁迫的响应,以及渗透胁迫下H2S供体NaHS对其渗透调节和抗氧化特性的影响。【结果】美国剑麻组培苗在20%PEG高浓度处理下仍然存活,具有一定的抗旱能力。但植株出现了鲜质量下降(PEG20处理比对照降低了16.6%)、超微结构发生变化、丙二醛(MDA)和H_(2)O_(2)含量增加等受害症状和氧化胁迫反应。然而美国剑麻可以通过增加脯氨酸、可溶性糖的水平调节渗透压,降低胁迫强度。在高浓度PEG存在下,添加NaHS可降低脯氨酸和H_(2)O_(2)含量,从而减少脯氨酸和H2O2的过度积累;通过调节超氧化物歧化酶(SOD)等5种抗氧化酶活性,提高还原型谷胱甘肽(GSH)含量清除活性氧和活性羰基物,降低美国剑麻的脂质过氧化水平,增强其抗逆性。【结论】美国剑麻本身具有一定的耐旱性,H2S能够通过调控美国剑麻的渗透调节和抗氧化水平,使其更加适应干旱的环境。

在体监测吲哚氰绿在肿瘤中引起的X射线衰减

介绍了在体观测肿瘤内注射吲哚氰绿 (ICG) ,一种激光吸收染剂前后X射线衰减的实验结果。实验采用已种植两周的骨髓瘤细胞 (SP2 / 0 ) ,质量为 15～ 2 0g的BALB/c小鼠作为动物模型 ,采用数字X射线成像系统作为监测药物在肿瘤内扩散的机制。系统工作在 33kVp ,0 .3mA下 ,曝光时间 4s,采用 1.5×放大倍率。实验研究的是通过灰度值反应出不同区域的X射线衰减 ,和周围正常组织和图像中没有物体的背景区域相比较 ,注射ICG前后肿瘤内的灰度值发生了明显的变化。实验证明 ,使用数字X射线成像系统能够动态、有效、非侵入地监测ICG在肿瘤组织内的扩散 ,从而达到优化治疗结果的作用。