生地黄水煎剂对H_2O_2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用研究

目的:探讨生地黄水煎剂对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法:以H2O2处理PC12细胞制作成氧化应激损伤模型,采用MTT法检测生地黄水煎剂对PC12细胞活性的影响,并采用Westen blot法检测PC12体外凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、细胞色素C、caspase3的表达情况。结果:经150μmol/L H2O2处理的PC12细胞存活率明显降低,而经生地黄水煎剂(2.5、5、10mg/m L)预处理后,细胞存活率大致呈浓度依赖增长,并明显抑制细胞凋亡相关蛋白Bax、细胞色素C、cleaved-Caspase3的高表达,提高Bcl-2/Bax比值。结论:生地黄水煎剂对氧化应激损伤的PC12细胞凋亡具有保护作用,其保护机制是通过抑制细胞凋亡相关蛋白Bax、细胞色素C、cleaved-Caspase3的表达,并提高Bcl-2表达而实现的。

基于同异比值的产品族绿色模块化设计

现代产品由大规模生产向大规模定制转变、同时社会对资源环境也提出了更高的要求,在此基础上提出了产品族绿色设计。而模块化设计以及产品平台设计是产品族设计的方法与手段,也是文中采用的研究方法。在对现有的产品族设计、模块化设计的一般方法进行了归纳总结,通过对已有产品的分析,能够量化描述产品族,同时利用这个量化进一步得到产品族的模块化,以提高产品族的共性及绿色属性。

二妙散主要成分盐酸小檗碱与白术内酯Ⅲ对脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎性活化的影响

目的探讨二妙散主要成分——来自黄柏的盐酸小檗碱与来自苍术的白术内酯Ⅲ(苍术内酯Ⅲ)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞炎性活化的影响。方法使用LPS激活BV2小胶质细胞产生炎症反应建立体外BV2小胶质细胞活化模型;用噻唑蓝比色法(MTT)检测正常对照组、LPS模型组、盐酸小檗碱组、白术内酯Ⅲ组、盐酸小檗碱+白术内酯Ⅲ组BV2小胶质细胞活性;用Western blot法检测正常对照组、LPS模型组、盐酸小檗碱组、白术内酯Ⅲ组、盐酸小檗碱+白术内酯Ⅲ组、Resatorvid组BV2小胶质细胞的激活相关蛋白环氧化酶-2(COX-2)、髓样分化因子(MyD88)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达情况;分别用Griess法和免疫荧光染色法检测正常对照组、LPS模型组、盐酸小檗碱组、白术内酯Ⅲ组、盐酸小檗碱+白术内酯Ⅲ组、Resatorvid组BV2小胶质细胞产生一氧化氮(NO)情况和核因子-κB亚基p65(NF-κB p65)核转移情况。结果盐酸小檗碱组、白术内酯Ⅲ组、盐酸小檗碱+白术内酯Ⅲ组BV2小胶质细胞活性与正常对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。LPS模型组BV2小胶质细胞中TNF-α、iNOS、MyD88、TLR4、COX-2蛋白表达水平及NO浓度、NF-κB p65入核率均明显高于正常对照组(P均<0.05);盐酸小檗碱组、白术内酯Ⅲ组、盐酸小檗碱+白术内酯Ⅲ组、Resatorvid组BV2小胶质细胞中TNF-α、iNOS、MyD88、TLR4、COX-2蛋白表达水平及NO浓度、NF-κB p65入核率均明显低于LPS模型组(P均<0.05),其中盐酸小檗碱+白术内酯Ⅲ组和Resatorvid组的结果均明显低于盐酸小檗碱组、白术内酯Ⅲ组(P均<0.05)。结论二妙散主要成分可通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,调节相关促炎细胞因子的表达来抑制LPS诱导的小鼠BV2小胶质细胞活化产生的炎症反应,且盐酸小檗碱与白术内酯Ⅲ两种单体共同使用较单独使用效果更佳。

地黄对阿尔茨海默病小鼠行为学的影响及其对血脑屏障的保护作用

目的:探讨中药地黄对阿尔茨海默病模型小鼠日常活动能力和恐惧记忆能力的行为学影响及其对血脑屏障的保护作用。方法:38只4月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型对照组(给予等渗氯化钠溶液)、地黄小剂量组(给予地黄5g·kg^(-1)·d^(-1))和地黄大剂量组(给予地黄12g·kg^(-1)·d^(-1)),连续灌胃给药3个月,每日给药1次。分别采用筑巢实验和条件恐惧实验检测小鼠日常活动能力和恐惧记忆能力;硫黄素T染色检测小鼠皮层和海马CA1区β淀粉样蛋白(Aβ)沉积;免疫荧光双重标记染色检测小鼠皮层和海马CA1区血管内皮完整性及血脑屏障渗出情况。结果:与模型对照组比较,地黄小、大剂量组日常活动能力均明显改善(均P<0.01);地黄大剂量组恐惧记忆能力明显提高(P<0.01);地黄大剂量组皮层和海马CA1区Aβ沉积量明显减少,面积占比明显减小,地黄小剂量组海马CA1区Aβ沉积面积占比也减小(均P<0.05);地黄小、大剂量组大脑皮层CD34阳性面积占比显著增加,纤维蛋白原阳性面积占比显著减小(均P<0.05);地黄大剂量组海马CA1区CD34阳性面积占比显著增加,纤维蛋白原阳性面积占比显著减小(均P<0.05)。结论:中药地黄可以提高模型小鼠的日常活动能力及恐惧记忆功能,减少脑内Aβ沉积,且大剂量时效果更为显著;其机制可能与降低血脑屏障通透性、保护血脑屏障完整性有关。

黄柏碱对LPS诱导小胶质细胞活化的抑制作用及其机制研究

目的:探讨黄柏碱对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞活化的抑制作用及其机制。方法:采用脂多糖(1μg/mL)处理BV2小胶质细胞建立体外小胶质细胞活化模型,将细胞分别设为对照组,模型组,抑制剂组(resatorvid,TLR-4抑制剂)和黄柏碱低、中、高剂量组,使用噻唑蓝(MTT)比色法检测黄柏碱对LPS处理后BV2小胶质细胞活性的影响;倒置相差显微镜下观察各组细胞形态变化;Griess法测定黄柏碱处理前后对NO水平影响;Western blotting法检测炎症蛋白iNOS、COX-2、TNF-α表达,以及通路蛋白TLR-4/MYD-88/NF-κB(p65)的表达情况。免疫荧光法检测黄柏碱对LPS(1μg/mL)诱导BV2小胶质细胞活化后iNOS、NF-κB(p65)的荧光值及核定位情况。结果:MTT结果显示不同浓度黄柏碱,不同浓度LPS,不同浓度黄柏碱+LPS,以及抑制剂+LPS对BV2小胶质细胞活性无明显影响;与对照组比较,LPS处理后小胶质细胞胞体变大,突起变短、形态呈“阿米巴状”,NO释放量增加,黄柏碱处理后改善;与LPS模型组比较,100、200、300μmol/L黄柏碱均能不同程度降低iNOS、COX-2、TNF-α、TLR-4、MYD-88、NF-κB(p65)蛋白表达水平,并能抑制NF-κB的核转移及iNOS在胞浆内的表达。结论:黄柏碱对LPS刺激所致的BV2小胶质细胞炎症反应有保护作用,其机制可能与抑制TLR-4/MYD-88/NF-κB(p65)通路激活及炎症因子释放有关。

基于Nrf2通路探讨环黄芪醇调控H_(2)O_(2)致HT22细胞氧化应激损伤的作用

目的:探讨环黄芪醇对H_(2)O_(2)处理的HT22细胞氧化应激损伤的保护作用,并对其潜在机制进行研究。方法:首先采用MTT法检测经不同浓度环黄芪醇处理的HT22细胞活性差异,对环黄芪醇的有效浓度进行筛选。将细胞分为5组,其中空白组和H_(2)O_(2)组不加入环黄芪醇,其余3组根据筛选结果分别加入不同浓度的环黄芪醇(50、75、100μmol/L)培养24 h。然后除空白组外,其余4组均加入H_(2)O_(2)作用4 h。采用DCFH-DA活性氧探针检测各组细胞中ROS的生成水平;免疫荧光染色检测各组细胞中Nrf2的入核情况;蛋白免疫印迹法检测各组细胞凋亡相关蛋白的表达情况。结果:本实验中,使用环黄芪醇作用于细胞的有效浓度分别为50、75、100μmol/L。随着环黄芪醇浓度的增加,环黄芪醇的保护作用也随之增强。环黄芪醇可抑制细胞中ROS的产生,促进Nrf2的入核,降低凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax的表达,增加CleavedCaspase-3、Bcl-2的表达,减少细胞色素C的释放,并表现出浓度依赖性。结论:环黄芪醇对H_(2)O_(2)导致的HT22细胞的氧化应激损伤呈现出保护作用,这种保护作用可能是通过激活Nrf2通路来实现的。

以周仲瑛“伏毒”学说论治视神经脊髓炎谱系病

周仲瑛教授在辨治急难病症时提出了"伏毒"学说,认为"伏毒"是指内外多种致病邪毒潜藏人体某个部位,具有伏而不觉、发时始显的病理特征。而视神经脊髓炎谱系病是一种自身免疫性急难重症,反复发作,迁延难治。本病精亏为本,邪伏体内,外因引动伏邪,引起发作,符合"伏毒"的发病机制,其毒具有特异性。根据"伏毒"理论对视神经脊髓炎谱系病的发病机制、临床特点及治疗方案进行探讨。

哈巴俄苷通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路减轻神经炎症诱导的神经元损伤

目的研究哈巴俄苷对神经炎症诱导神经元损伤的作用。方法采用MTT检测血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)和哈巴俄苷对小鼠小胶质BV2细胞活性的影响;观察BV2细胞的形态变化;检测细胞上清液中炎症因子水平;采用免疫荧光检测核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)核易位以及CD86、髓系细胞触发受体2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2)的表达;采用Western blotting检测Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(molecule myeloid differentiation factor 88,MyD88)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)蛋白表达。分别使用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和TLR4抑制剂(TAK-242)进一步验证哈巴俄苷的作用机制。建立BV2-HT22细胞共培养模型,检测线粒体膜电位、细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白表达,研究哈巴俄苷对神经炎症引起的神经元损伤的影响。结果Ang II显著上调BV2细胞TLR4、My D88、IL-1β、TNF-α和iNOS蛋白表达(P<0.01、0.001),促进NF-κB p65入核(P<0.001),调节小胶质细胞表面炎症标志物CD86和TREM2的表达(P<0.05)。哈巴俄苷和TAK-242可逆转Ang Ⅱ或LPS诱导的BV2细胞的作用(P<0.05、0.01、0.001)。此外,哈巴俄苷可显著下调BV2-HT22共培养模型HT22细胞中凋亡相关蛋白的表达(P<0.01、0.001),抑制HT22细胞凋亡(P<0.05、0.001)。结论哈巴俄苷可能通过抑制Ang Ⅱ诱导的BV2细胞TLR4/MyD88/NF-κB通路的激活来减轻炎症反应,进而缓解炎症引起的神经元细胞的凋亡。