抗凝血酶受体单克隆抗体的制备与鉴定

采用杂交瘤技术，获得了４株稳定分泌抗凝血酶受体单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。４株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１κ链。ＥＬＩＳＡ交叉试验结果表明，该ＭｃＡｂ不与人凝血酶、凝血酶原和ＨＣＶ多肽反应。４株杂交瘤细胞培养上清液效价为３．２×１０－２～１．２８×１０－３，腹水效价为１．６×１０－６～５．１２×１０－７。

抗犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及初步应用

采用 B淋巴细胞杂交瘤技术 ,通过免疫荧光法筛选 ,获得 4株能稳定分泌抗犬瘟热病毒的单克隆抗体杂交瘤细胞株。 4株单克隆抗体均属 Ig G1亚类 ,其腹水效价在 1∶ 10 - 4 ～ 1∶ 10 - 5,细胞培养上清液效价为 1∶ 10 - 2 ～ 1∶ 10 - 3 。用微量细胞培养中和试验筛选到 2株具有中和活性的特异性单克隆抗体 ,其中和效价为 1∶ 32和 1∶ 12 8,并初步应用于治疗中早期犬瘟热病毒感染犬 ,取得了较好的结果。

庚型肝炎病毒NS5区蛋白鼠单克隆抗体的制备

庚型病毒性肝炎是近年来世界上才确认的一种新型肝炎［１～３］。庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）呈世界性分布，经血液传播为主，也可母婴传播。ＨＧＶ容易形成持续性感染，类似ＨＩＶ和ＨＣＶ。据粗略估计，我国大约有１００万～１０００万ＨＧＶ携带者。因此，ＨＧＶ已成为继乙...

从实验感染动物粪便中分离出两株疑似戊型肝炎病毒

用Hep-G_2细胞从肠道传播的非甲非乙型肝炎(ET-NANBH)病人粪便悬液感染恒河猴的潜伏期粪便中分离出两株致细胞病变(CPE)的病毒(R_(19),R_(25))。用免疫电镜(IEM)观察,这两株病毒均为球形,有实心和空心两种颗粒,直径约27—34nm,能被新疆和前苏联ET-NANBH急性期血清特异性凝集,病毒颗粒间抗体桥明显,ET-NANBH急性期血清对这两株病毒亦有一定中和作用,内地甲肝(HA)病人和正常人血清既不能凝集,也不能中和,是否为ET-NANBH病原体尚待进一步鉴定。

戊型肝炎病毒核酸生化研究进展

肠道传播的非甲非乙型肝炎(ET—NANBH)的致病因子是戊型肝炎病毒(HEV),其病毒颗粒大小为27～34nm。具有表面结构,其表面有突起(spikes)和缺刻(indentation)。病毒颗粒为圆形、饱满的或半空的没有包膜的20面体。戊型肝炎(HE)的流行是世界范围的,现已确定水是主要的传播途径。青壮年发病率较高,死亡率为1～2%,比甲型肝炎高9倍,孕妇的死亡率高达10～20%。鉴于以上特点,目前对HE的研究日趋深入。

戊型肝炎病毒细胞分离株部分核苷酸序列分析

用抗原捕获／多聚酶链反应（ＡＣ／ＰＣＲ）对戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）细胞分离株ＭＪ９０和Ｒ２５基因组的部分核苷酸序列进行扩增，获得了与ＨＥＶ缅甸株ＥＴ１·１相同的ｃＤＮＡ扩增带。该ｃＤＮＡ扩增带纯化后用双脱氧核苷酸ＤＮＡ链末端终止法测序，ＣＪ９０、Ｒ２５株的核苷酸和氨基酸序列与ＥＴ１·１克隆的同源性分别为９９．６％、１００％和９９％、９９％，从而证明ＭＪ９０和Ｒ２５毒株为ＨＥＶ．

微量细胞培养板钴-60照射灭菌效果观察

实验证明钴-60照射(2.5 Mrad)对微量细胞培养板有良好的灭菌作用,较紫外线灭菌处理者保存期为长,对细胞无明显毒性,并可反复灭菌使用。

基孔肯雅病毒空斑中和试验的研究

基孔肯雅(Chikungunya 简称 CHIK)热是一种由蚊媒传播的病毒性传染病。在非洲及东南亚地区常有流行。临床症状与登革热相似,以发热和关节疼痛为主,有时伴有出血现象。

用嗜肝DNA病毒模型筛选抗病毒中草药

对叶下珠等２１种中草药进行抗乙肝病毒药物研究，通过体外及体内逐步筛选发现，叶下珠和虎杖提取物对鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）及乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）均有较好的抑制效果，旱莲草对ＨＢＶＤＮＡｐ有一定的抑制作用。

急性重型肝炎患者肝组织中庚型肝炎病毒的检测

检测急性重量型肝炎患者肝组织中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ） 的存在状况及探讨与发病的关系，采用免疫组化方法以抗－ ＨＧＶＮＳ５ 单克隆抗体对２６ 例急性重型肝炎患者尸检肝组织中的ＨＧＶ 等抗原进行了检测。结果显示２６ 例肝组织中检测出ＨＧＶ 阳性６ 例（２３ ．１ ％ ） 。ＨＧＶＮＳ５Ａｇ 阳性着色颗粒表达于残存的肝细胞浆内，阳性细胞呈片簇状分布于汇管区周围。６ 例中４例重叠有ＨＢＶ 或／ 和ＨＣＶ 感染，肝组织中ＨＢｓＡｇ 或／ 和ＨＣＶ ＮＳ３Ａｇ 检测阳性，另２ 例肝组织中仅见ＨＧＶ ＮＳ５ 抗原表达。ＨＧＶ 感染可能与一些急性重型肝炎发病有关。

丙型肝炎病毒单克隆抗体的制备及其鉴定

目的押以基因工程表达的丙型肝炎病毒抗原蛋白(HCAg)为抗原,建立分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的McAb进行鉴定。方法:用纯化HCV基因工程表达抗原(HCAg)免疫Balb/c小鼠,取脾细胞及骨髓瘤细胞按常规方法融合、筛选、克隆化及腹水注射制备McAb。采用ELISA及分片断鉴定技术进行鉴定。结果押筛选出5株能稳定分泌特异性抗-HC的McAb杂交瘤细胞株,经多次复苏传代仍能稳定分泌抗体,特异性强,效价高。与不同抗原蛋白的ELISA反应呈特异性阳性反应。分片断鉴定结果显示,所获5株McAb主要为抗HCV核心蛋白和非结构蛋白NS3。结论:此5株丙肝杂交瘤细胞株分泌的抗体对丙肝抗原具有特异亲和性,为丙型肝炎病毒抗原诊断试剂的研制提供了关键技术基础。

电连接器接触件注塑成型翘曲变形的优化分析

结合正交试验法和数值分析,以最大翘曲量为质量指标,研究了不同工艺条件下某Y型电连接器接触件注塑成型过程,通过对翘曲变形的极差分析,确定了熔体温度、模具温度、注射时间、保压压力、保压时间等工艺参数对翘曲变形的影响敏感性。利用BP(back propagation)人工神经网络,建立主要工艺参数和塑件翘曲变形量之间的数学模型,并进行了预测。结果表明:所建立的数学模型具有较高的预测精度,从而达到以较少的试验实现注塑成型工艺的优化与控制。

用RT-PCR诊断Ⅰ型鸭肝炎病毒

取北京郊区某鸭场的病鸭肝脏制备病料,接种12日龄鸭胚尿囊腔及2日龄健康雏鸭,应用RT-PCR方法对病鸭的肝脏悬液及鸭胚尿囊液进行检测并测序,确定所分离的病毒为Ⅰ型鸭肝炎病毒.

鸭肝炎病毒现场分离株单克隆抗体的研制

为有效防治鸭肝炎,建立特异性强、敏感性高、简便快速的DHV检测方法,对分离的DHV进行纯化,并制备单克隆抗体。鸭胚尿囊液中的DHV经冻融、氯仿反复处理、PEG浓缩和超速离心纯化后,免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术,通过间接ELISA法筛选及多次亚克隆,成功获得8株阳性杂交瘤细胞,分别命名为DHV-1、DHV-6、DHV-7、DHV-8、DHV-9、DHV-10、DHV-11和DHV-12,并制备出腹水。8株单抗腹水经ELISA法检测,DHV-7、DHV-8的效价为1∶2 000;DHV-6、DHV-10的效价为1∶8 000;DHV-1、DHV-9、DHV-11和DHV-12的效价为(1∶32 000)^(1∶512 000)。抗体亚类鉴定,DHV-6、DHV-7、DHV-8、DHV-10为IgG1;DHV-1、DHV-12为IgG2a;DHV-2、DHV-9、DHV-11为IgG2b。上述抗体均为k链。特异性鉴定表明,上述单克隆抗体只能与从尿囊液中纯化的DHV病毒包板反应,与非DHV抗原无反应。鸭胚中和试验及雏鸭保护试验结果表明,DHV-6、DHV-7、DHV-9、DHV-10具有较好的中和活性,并对雏鸭有不同程度的保护作用。

叶下珠对乙型肝炎病毒结构与复制的影响

采用叶下珠(Phyllanthus,urinaria)乙醇提取物进行了药物对乙型肝炎病毒(HBV)抗原抗体结合抑制试验、病毒DNA聚合酶抑制试验以及在2.2.15细胞培养中对乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)表达抑制试验和DNA复制抑制试验,结果叶下珠提取物对上述指标均有不同程度的抑制作用,提示叶下珠为一潜在的抗HBV药物。

紫外线和热力灭活脊髓灰质炎病毒效果的试验观察

为了解紫外线和热力对脊髓灰质炎病毒１型（ＰＶＩ）的灭活效果及其影响因素，进行了悬液定量灭活病毒试验．结果，紫外线辐照剂量达 ２４０ ０００μＷ· ｓ／ ｃｍ２，可使滴度为 １０６·１７ ＴＣＩＤ５０的 ＰＶＩ全部灭活，灭活效果随病毒悬液厚度增加或悬液中存在有机物而降低。以 ５５℃作用 １０ ｍｉｎ，或以 ６０℃作用 ５ｍｉｎ，可使滴度为 １０６１７ ＴＣＩＤ５０的 ＰＶＩ全部灭活。病毒悬液中含体积分数为 ５０％的小牛血清时，需以５５℃作用 ２０ ｍｉｎ。 ＰＶＩ对紫外线的抗力强于大肠杆菌、肠球菌和大肠杆菌 ｆ２噬菌体，对热的抗力则仅比大肠杆菌ｆ２噬菌体强。

温降速率对玻璃-金属封接电连接器性能的影响

讨论了温降速率对玻璃体内气泡产生及排逸的影响,并通过实验研究了采用玻璃-可伐合金熔封时分别以23.5℃/min和16℃/min的速率从980℃降温到530℃,玻璃体内相同面积范围中气泡的残留状态。结果发现,以16℃/min的温降速率有利于玻璃体内部气泡的逸出。

黑龙江立克次体054株单克隆抗体对斑点热群立克次体抗原结合位点及特性的分析

本文利用三株黑龙江立克欢你054株（HLJ－054）的单克隆抗体对四株斑点热群立克次体西伯利亚种（R．s．）246株、精河株（JH－74），立氏立克次体（R.r．）R株及HLJ-054株进行了血清学反应，对其蛋白组成及单抗结合抗原特性等方面进行了研究。结果表明：JH-74林与246株在上述三个方面完全一致，不同于HLJ－054及R．r．R株；HLJ－054株与R．r．R株与三株单抗血清学反应高度交叉．但二者在蛋白组成及与单抗反应的抗原组成上均存在差异。该结果支持黑龙江立克次体054株为斑点热群立党次作的一个新成员。单抗F7针对的抗原结合表位为蛋白多肽；而单抗2E1、4G2结合的抗原表位可能为精蛋白。

HCCR重组蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

目的:克隆人宫颈癌基因(human cervical cancer oncogene,HCCR)的C末端截短序列(膜外区序列),重组表达并纯化HCCR-C端蛋白,制备和初步鉴定针对HCCR-C端蛋白的单克隆抗体。方法:从人肝癌细胞株HepG2中提取总RNA,RT-PCR扩增出HCCR-C端,构建其原核表达质粒,表达HCCR-C融合蛋白,以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,常规细胞融合和选择性培养,亚克隆筛选出分泌特异抗体的杂交瘤细胞株,制备单抗腹水,Western blot、细胞组化初步鉴定抗HCCR-C端单克隆抗体。结果:成功克隆了HCCR-C末端截短序列,原核表达并纯化了HCCR-C端重组蛋白;经ELISA双筛,获得3株能稳定分泌抗HCCR-C端单克隆抗体的杂交瘤细胞株;Western blot及细胞免疫荧光结果显示,其分泌抗体效价高且均能特异识别HCCR蛋白。结论:成功制备并初步鉴定了针对HCCR-C端的单克隆抗体,为深入研究HCCR蛋白的生物学功能和建立新的肝细胞癌早期诊断方法奠定了可靠基础。

丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶特异性结合肽的筛选和鉴定

丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶在病毒复制和包装中的重要作用使其成为特异性抗病毒药物研究的首选靶标。根据丝氨酸蛋白酶晶体结构特点 ,用柔性连接子连接NS3丝氨酸蛋白酶结构域和NS4A的核心序列 ,构建成单链丝氨酸蛋白酶基因并且在大肠杆菌中获得高水平的可溶性表达 ,纯化后的目的蛋白能够切割重组蛋白底物NS5ab。随后 ,以单链丝氨酸蛋白酶为靶分子对噬菌体展示的随机十二肽库进行了三轮淘筛 ,挑选的 44个克隆中有 3 7个克隆能够特异性地结合丝氨酸蛋白酶 ,并且这种结合作用为竞争性ELISA试验结果所支持。对 1 3个克隆进行序列测定 ,得到 6种序列 ,它们在氨基酸组成上存在明显偏性 ,富含组氨酸和色氨酸 ,缺乏酸性氨基酸 ;