猪流行性腹泻病毒Nsp6蛋白的分段表达及多克隆抗体制备

猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白Nsp6在诱导宿主细胞自噬中起着重要作用。为进一步确定Nsp6蛋白诱导细胞自噬的关键功能域,本研究利用RT-PCR扩增技术获得了Nsp6及其3个分段基因。首先构建了重组原核表达质粒pSUMO-Nsp6,并转化至大肠杆菌Rosetta感受态中,经IPTG诱导并纯化后,所得蛋白用于小鼠免疫,制备抗Nsp6蛋白的多克隆抗体。再将Nsp6及其3个分段基因分别构建至真核表达载体pCMV-HA,并将其转染至IPEC-J2细胞进行真核表达,通过Western blot和双荧光标记法来确定蛋白表达情况。结果:Nsp6蛋白在Rosetta中成功表达,并通过免疫小鼠获得了效价为1∶10240的多克隆抗体,该抗体具有与PEDV和Nsp6蛋白特异性结合的能力;免疫荧光及Western blot结果表明,Nsp-6及其截短基因在IPEC-J2细胞中成功表达,且与制备的Nsp6多克隆抗体发生特异性结合。综上,本研究原核表达了Nsp6蛋白并制备了相应的特异性抗体,验证了Nsp6及其分段基因的在细胞中的真核表达,为进一步研究Nsp6蛋白的特性和功能奠定了基础。

软土地基施工技术在公路桥梁施工中的应用要点分析

软土地基具有不稳定性和易压缩性特征,成为了当代路桥工程建设中的难题,软土地基施工技术的创新也成为了延长工程使用寿命的关键。我国地质条件特殊,湿地、沼泽地众多,如何有效改善和加固软土地基成为工程技术研究的重要方向。为了提高路桥工程软土地基施工质量,加强软土地基施工技术在路桥工程中的应用,本文将选取具体的工程案例,结合公路桥梁施工中软土地基施工技术的重要性,在对堆载预压法、强夯法、加筋法等技术进行分析的基础上,就软土地基施工技术在公路桥梁施工中的具体应用进行深刻探究。

叶片空化清洗器单空泡动力学研究

基于叶片空化清洗器流场模型,对叶片空化清洗器流场进行面积等效处理,利用MATLAB对流场面积进行参数化编程。以Rayleigh-Plesset方程为基础,应用4-5阶Runge-Kutta法对推导的等效流场的单空泡动力学模型进行数值求解,得到了叶片清洗器单空泡生长、溃灭的流场特性变化规律。结果表明:面积等效方式为复杂流场中单空泡流场特性的分析提供一种手段;空泡溃灭位置位于流场入口x/x_0=0.155处,溃灭时产生高温、高压和高速微射流,可有效去除管道垢质。

Stathmin基因在^(131)I抑制甲状腺癌细胞生长中的作用

目的探讨微管不稳定蛋白(stathmin)基因在^(131)I抑制甲状腺癌细胞生长中的作用及相关机制。方法将^(131)I抵抗甲状腺癌细胞株(res⁃TPC⁃1)随机分为对照组、^(131)I组、si⁃NC组、si⁃stathmin组、^(131)I+si⁃NC组和^(131)I+si⁃stathmin组。采用MTT实验检测res⁃TPC⁃1细胞存活率。克隆形成实验检测克隆形成数。流式细胞术检测凋亡率。TUNEL染色检测凋亡指数。Transwell检测迁移数。Western blot检测stathmin、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl⁃2)、基质金属蛋白酶-2(MMP⁃2)、基质金属蛋白酶-9(MMP⁃9)、β-连环蛋白(β-catenin)和c⁃Myc蛋白表达水平。结果Stathmin在res⁃TPC⁃1细胞中的表达水平明显高于TPC⁃1细胞,差异有统计学意义(t=-18.552,P<0.05)。与对照组比较,^(131)I组res⁃TPC⁃1细胞存活率、克隆形成数、迁移数、CyclinD1、Bcl⁃2、MMP⁃2和MMP⁃9水平明显降低,差异有统计学意义(t值分别为3.786、6.293、5.226、5.979、6.882、6.578和4.500,P<0.05),凋亡率、凋亡指数、p21、Bax、β-catenin和c⁃Myc水平明显增加,差异有统计学意义(t值分别为-8.131、-11.496、-6.240、-6.600、-13.950和-10.262,P<0.05)。与si⁃NC组比较,si⁃stathmin组res⁃TPC⁃1细胞存活率、克隆形成数、迁移数、CyclinD1、Bcl⁃2、MMP⁃2、MMP⁃9、β-catenin和c⁃Myc水平明显降低,差异有统计学意义(t值分别为3.793、9.199、9.193、10.733、9.430、9.907、7.496、9.261和12.862,P<0.05),凋亡率、凋亡指数、p21和Bax水平明显增加,差异有统计学意义(t值分别为-12.675、-14.712、-6.626和-6.091,P<0.05)。与^(131)I+si⁃NC组比较,^(131)I+si⁃stathmin组res⁃TPC⁃1细胞存活率、克隆形成数、迁移数、CyclinD1、Bcl⁃2、MMP⁃2、MMP⁃9、β-catenin、c⁃Myc水平明显降低,差异有统计学意义(t值分别为7.134、11.324、8.589、8.558、10.817、10.401、11.833、10.490和9.098,P<0.05),凋亡率、凋亡指数、p21、Bax水平明显增加,差异有统计学意义(t值分别为-13.190、-13.284、-10.817和-10.419,P<0.05)。结论抑制stathmin表达可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路增强^(131)I对res⁃TPC⁃1细胞的杀伤效果。

甲状腺癌患者术后感染的病原学特点及临床指标诊断价值分析

目的分析甲状腺癌患者术后感染的病原学特点,探讨血PCT、MCP-1、免疫球蛋白对患者术后并发感染的诊断价值。方法选取2020-2022年福建省泉州市第一医院收诊的105例甲状腺癌术后并发感染患者为本次研究对象,同时随机选取同期进行甲状腺癌手术未发生感染的90例患者作为对照组。采集患者标本并进行培养和病原菌鉴定,采用K-B纸片扩散法对主要病原菌进行药敏试验。采集所有患者静脉血,采用化学发光免疫分析法检测降钙素原(Procalcitonin,PCT)、单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)水平,采用免疫比浊法测定免疫球蛋白G(Immune globulin G,IgG)、免疫球蛋白A(Immune globulin A,IgA)、免疫球蛋白M(Immune globulin M,IgM)水平。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析术后1 d、3 d的PCT、MCP-1、IgG、IgA、IgM水平对术后并发感染的诊断价值。结果105例甲状腺癌患者发生术后感染,感染部位主要为呼吸道系统(41.90%),其次为切口部位(30.48%)。本次研究中共检出病原菌87株。革兰阳性菌(29株,33.33%)主要为金黄色葡萄球菌(12株,13.79%)、肺炎链球菌(11株,12.64%)。革兰阴性菌(52株,59.77%)主要为肺炎克雷伯菌(26株,29.89%)、铜绿假单胞菌(17株,19.54%)。真菌(6株,6.90%)主要为白色念珠菌(3株,3.45%)。革兰阳性菌金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌对常用抗菌药物克林霉素、青霉素、红霉素的耐药性均高于60%,对利福平的耐药率低于20%,未产生对利奈唑胺、万古霉素、喹诺普汀/达福普汀的耐药株。革兰阴性菌肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌对常见抗菌药物庆大霉素、头孢哌酮/舒巴坦、环丙沙星的耐药率均高于50%,对阿米卡星、亚胺培南的耐药率低于15%,未产生对多粘菌素B的耐药株。感染组患者术后1 d、3 d的PCT、MCP-1水平均高于对照组患者水平,术后1 d、3 d的IgG、IgA、IgM水平均低于对照组患者水平,差异有统计学意义(P<0.05)。采用ROC曲线评估术后1 d、3 d的PCT、MCP-1水平对并发感染的诊断价值显示,术后3 d MCP-1水平的曲线下面积(AUC)最大,为0.998(95%CI:0.995~1.000)。采用ROC曲线评估术后IgG、IgA、IgM水平对并发感染的诊断价值显示,术后3 d IgM水平的曲线下面积(AUC)最大,为1.000(95%CI:0.999~1.000)。结论甲状腺癌患者术后感染多发生于呼吸道系统,以革兰阴性菌为主要病原菌。通过检测患者PCT、MCP-1、IgG、IgA、IgM水平变化可以有效预测患者术后感染的发生。

槲皮素联合伊马替尼体外抑制人胃癌SNU-1细胞生长和诱导细胞凋亡的研究

目的观察槲皮素联合伊马替尼对人胃癌SNU-1细胞生长和细胞凋亡的影响。方法以12.5~200.0μmol/L槲皮素和0.125~2.000μmol/L伊马替尼单药以及二者联合用药处理细胞24 h,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Hoechst 33342染色观察细胞核变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;用蛋白印迹法检测相关蛋白的表达情况。结果槲皮素和伊马替尼单药均能使细胞活力降低,0.250μmol/L伊马替尼和2 5.0μmol/L槲皮素联合用药对细胞活力具有显著抑制作用,差异有高度统计意义(P<0.01),且可诱导人胃癌SNU-1细胞凋亡;二者联合处理还可以显著诱导半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的上调,差异有高度统计意义(P<0.01)。结论槲皮素联合伊马替尼能抑制胃癌SNU-1细胞的生长并诱导细胞凋亡,其作用机制主要是通过上调Caspase-9和Caspase-3的表达从而启动细胞凋亡来实现的。

计划控制指标与实绩之间的关系

在世纪之交的特殊阶段,中国将如何发展自己?《纲要》为我们描绘了一个蓝图、从这个蓝图中，我们可以了解今后15年、5年，以及明年，将做什么，怎样来做。