牛mettl3基因的原核表达与蛋白纯化

m^6A甲基转移酶(methyltransferase-like protein 3,METTL3)可调控m RNA的m6A甲基化水平,调节细胞蛋白质合成,实验室前期发现METTL3为乳腺上皮细胞乳合成重要调节分子,发挥泌乳调节作用。目前尚不清楚METTL3分子结构基础及其参与的调节机制。为揭示METTL3结构与功能关系,对METTL3蛋白作原核表达及纯化。研究采用PCR方法扩增牛mettl3基因完整CDS区,将CDS区插入原核表达载体p GEX-4T-1,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导METTL3蛋白大量表达,用8 mol·L-1尿素裂解包涵体,利用GST蛋白纯化试剂盒纯化诱导获得METTL3蛋白。SDS-PAGE证实GST-METTL3融合蛋白存在于包涵体内,试验获得高纯度GST-METTL3融合蛋白,为进一步研究METTL3蛋白在奶牛泌乳中作用提供重要依据。

牛乳腺上皮细胞SNAT2对氨基酸调节乳合成的影响

试验旨在研究氨基酸转运体钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白(the sodium-dependent neutral amino acid transporter 2,SNAT2)在牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cell,BMEC)中对氨基酸调节乳合成的影响。利用组织块法成功培养原代BMEC,添加不同氨基酸(蛋氨酸(Met)、赖氨酸(Lys)和亮氨酸(Leu)刺激BMEC后,通过实时荧光定量PCR、Western blotting技术和甘油三酯试剂盒检测SNAT2、酪蛋白(β-casein)基因的表达量和BMEC培养液上清甘油三酯的分泌量;将N-flag-SNAT2真核表达载体及SNAT2siRNA分别转入细胞中进行SNAT2基因的过表达和敲低试验;通过Western blotting和甘油三酯试剂盒分别检测SNAT2、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(the mammalian target of rapamycin,mTOR)、β-casein蛋白表达量和BMEC培养液上清的甘油三酯含量。结果显示,3种氨基酸(Met、Lys、Leu)均能显著促进BMEC分泌乳蛋白和乳脂,并激活mTOR信号途径,其中Met、Lys还能够显著上调SNAT2基因表达;SNAT2能够正向调节BMEC乳蛋白和乳脂肪的合成,并激活mTOR信号通路,说明氨基酸激活mTOR信号通路是通过SNAT2基因介导完成的,进而调节了BMEC乳蛋白和乳脂肪合成。

浅谈借入蒙古语科尔沁土语中的汉语词词义变化

由于地理位置和社会文化的因素,在蒙古语各方言土语中科尔沁土语受汉语的影响比较深。因此,本文主要从词义的扩大、缩小及转移等三方面来解析蒙古语科尔沁土语中汉语词的具体应用情况,并得出由于蒙古语和汉语的系统不同,在其借入过程中不仅对词的语义做出适当的修改,也会出现错误识别语意现象。

酿酒酵母稳定整合位点鉴定及其在橘烯生物合成中的应用

橘烯(valencene)是一种带有柑橘香气的高值倍半萜类化合物,被广泛应用于食品、化妆品等行业,以及工业合成圆柚酮。本研究在酿酒酵母基因组中鉴定到了16个位于基因间区(intergenic region,IGR)的基因组位点,利用CRISPR-Cas9技术,将Ypet表达盒整合到不同的基因组位点,整合成功率高达87.50%,不同插入位点之间的表达差异达1.91倍。研究显示,位置效应在基因表达中相对稳定,基本不受启动子和报告基因变更的影响。之后筛选高效表达的元件组合PTDH3-TPRC1,在优选的整合位点迭代整合来自阿拉斯加黄扁柏(Callitropsis nootkatensis)橘烯合成酶(VSm),橘烯产量提升至254.67 mg/L。过表达多个拷贝的关键基因t HMG1-ERG20,橘烯的产量提高了93.49%。所得工程菌株L-13在3 L发酵罐中进行2阶段补料分批发酵能够生产橘烯9 530.18 mg/L,相较出发菌株提高了近100倍,展现了筛选出的基因组位点在橘烯生产优化过程中的潜力。

我喜欢的一张照片

我有一张特别喜欢的照片,留下了我头一回当节目主持人的影像。这张照片中只有我一个人,戴着红色的军帽,穿着迷彩服式的军装连衣裙。右手握着麦克风,站在影剧的舞台正中。看到这张照片的人都说:“看你多威风!能独自站在舞台上主持节目,真是多么令人羡慕啊”。我听了这些赞美的语言总是甜滋滋的。我不禁想起了一年前发生的事。