Long Evans和Wistar大鼠视网膜神经节细胞电生理学及形态学特性比较研究

目的 比较LongEvans大鼠和Wistar大鼠睁眼前后视网膜神经节细胞 (retinalganglioncells ,RGCs)电生理学特性及形态学特征上的差异。方法 取出生后 0～ 3 1dLongEvans和Wistar大鼠 ,各按睁眼时间分为两组 ,制备视网膜片 ,行膜片钳全细胞记录 ,同时行组织切片和细胞内染色 ,观察形态特征。结果 比较 2 2只LongEvans大鼠和 2 4只Wistar大鼠被动膜学特性和动作电位 (actionpotential,AP)幅度及阈值无显著差异 ,形态学上除两者视网膜色素上皮细胞 (retinalpig mentepithelium ,RPE)含或不含色素颗粒外未见明显区别。结论 LongEvans大鼠因其RPE含色素颗粒 ,以及在视觉和神经系统等方面的优点 ,可取代Wistar等白化鼠而作为一种良好的视觉和神经科学研究的实验动物模型。

Long Evans大鼠视网膜神经节细胞电生理学发育特性研究

目的研究Long Evans大鼠不同发育阶段视网膜神经节细胞(Retinal Ganglion Cells, RGCs)电生理学特性,认识视觉发育过程中视网膜神经元成熟的细胞内机制.方法取出生后3～31 d Long Evans大鼠,制备视网膜片,寻找RGCs行膜片钳全细胞记录,给予不同强度去极化脉冲,诱发动作电位.结果 33只Long Evans大鼠共获得94个RGCs,按动作电位类型RGCs分为单锋型、瞬变型和持续型,在视觉发育不同阶段,3种类型的RGCs所占比例不同,在电生理特性上有显著差异.结论在视觉发育过程中,RGCs的电学特性逐渐成熟,动作电位的幅度、频率存在差异,提示不同类型的RGCs在编码及传递时间、空间视觉信息中具有不同作用.

关节镜技术结合经皮钢板内固定术(MIPPO)治疗胫骨平台骨折的疗效观察

目的对关节镜技术结合经皮钢板内固定术(minimally invasive percutaneous plate osteosynthesis,MIPPO)治疗胫骨平台骨折患者的临床疗效进行研究。方法将40例胫骨平台骨折患者作为研究对象,根据患者住院尾号的奇偶数将其分为研究组与对照组,各20例,对照组应用传统开放手术,研究组采取关节镜技术结合MIPPO治疗。结果研究组患者优良率为90.0%,对照组为65.0%(P<0.05);研究组患者术后无并发症发生,对照组3例发生感染,2组比较差异无统计学意义.结论治疗胫骨平台骨折患者采取关节镜技术结合MIPPO,能够获得显著疗效。

微创钢板固定法治疗高能量胫骨平台骨折疗效观察

目的探讨微创钢板固定术治疗高能量胫骨平台骨折的效果。方法对30例高能量胫骨平台骨折患者实施微创钢板内固定术治疗。对所有患者进行11-19个月随访,观察治疗效果。结果本组均未出现切口感染、骨髓炎、骨筋膜室综合征、固定松动等。骨折愈合时间11-28周。完全负重9-25周。术后1 a膝关节HSS评分76-99分。结论微创钢板固定术治疗高能量胫骨平台骨折,疗效确切、切口小、骨折固定稳定性良好,有利于促进患者快速恢复。

经伤椎椎弓根椎体内植骨治疗胸腰椎骨折的疗效分析

目的探讨经伤椎椎弓根体内植骨治疗胸腰椎骨折的临床效果。方法选取淮阳县人民医院收治的40例胸腰椎骨折患者作为研究对象,随机分为对照组与观察组,各20例。对照组行后外侧植骨结合后路短节段固定术治疗,观察组则给予经伤椎椎弓根植骨结合后路短节段固定术进行治疗,观察两组患者的治疗效果及随访情况。结果观察组患者治疗总有效率显著高于对照组;术后随访18个月,观察组患者未见松动、断裂现象,对照组有3例出现内固定断裂。结论采用经伤椎椎弓根椎体内植骨结合内固定治疗胸腰椎骨折效果显著,能即时有效并长期维持椎体高度,并增加脊柱前中柱的稳定性,同时还能有效避免椎体高度丢失、内固定松动、断裂等现象的发生,值得在临床上推广应用。

慢性CSC合并PCV一例诊疗结果及其分析

患者,女,56岁,2014年12月10日因左眼视力下降及视物变形3d就诊.患者自诉10年前左眼曾因相似症状诊断为中心性浆液性脉络膜视网膜病变（central serous chorioretinopathy,CSC）,无其他全身及眼病史.

角膜基质细胞诱导分化的脂肪间充质干细胞羊膜片移植治疗兔角膜碱烧伤的疗效及其机制

背景角膜化学烧伤是致盲眼病之一，先前的各种疗法在临床上的应用均受到一定的限制，而脂肪间充质干细胞（ADSCs）移植疗法受到密切关注。目的观察诱导分化的ADSCs羊膜片移植治疗兔角膜碱烧伤的疗效及其机制。方法无菌条件下剪取兔角膜，用悬浮基质片法分离并培养兔角膜基质细胞（CSCs）。取兔腹股沟脂肪组织，以酶消化法（质量分数0．25％胰蛋白酶）分离及培养兔ADSCs，并用流式细胞术鉴定ADSCs表面抗原的表达。将CSCs与ADSCs共培养，采用免疫荧光技术和逆转录PCR（RT-PCR）鉴定CSCs诱导后ADSCs向角膜基质样细胞分化的表达，分别将诱导或未诱导的ADSCs种植于羊膜上制备成细胞羊膜片。选择60只新西兰白兔，右眼用浸有质量分数1％NaOH的滤纸贴敷于角膜中央50S制备兔角膜碱烧伤模型，按随机数字表法将模型眼随机分为诱导ADSCs＋羊膜移植组、未诱导ADSCs＋羊膜移植组、单纯羊膜移植组及模型组。分别于术后1周、2周和1个月在裂隙灯显微镜下观察各组兔模型眼角膜的混浊程度和新生血管形成情况，并对角膜炎症进行评分，采用ELISA法检测术后1个月角膜组织匀浆中CD45、叮干扰素（IFN-γ）、白细胞介素．10（IL-10）蛋白及房水中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的质量浓度。结果从脂肪组织分离培养的ADSCs表面抗原CDl05、CD29、CD44的阳性表达率分别为90．23％、88．56％、98．88％；分离培养的CSCs波形蛋白呈阳性表达；CSCs与ADSCs共培养后多数细胞双标记染色阳性。苏木精一伊红染色显示，ADSCs种植于羊膜后生长良好。术后1个月，模型组角膜混浊呈瓷白色，新生血管面积最大，而诱导ADSCs＋羊膜移植组角膜透明，新生血管最少。术后1个月，诱导ADSCs＋羊膜移植组、未诱导ADSCs＋羊膜移植组、单纯羊膜移植组和模型组兔角膜混浊程度评分分别为1．65±0．18、2．05±0．17、2．68±0．25和2．904-0．18，新生血管面积分别为（10．59±1．78）、（22．58±1．63）、（37．98±1．90）和（45．37±1．65）mm^2，术后1周、2周及1个月4个组间角膜混浊程度评分和角膜新生血管（CNV）面积的差异均有统计学意义（F=280．826、330．172、465．707，均P=0．000；F=60．020、670．811、1510．231，均P=0．000），其中诱导ADSCs＋羊膜移植组角膜炎症评分睨显低于其他3个组，CNV面积小于其他3个组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。术后1个月，4个组间角膜组织匀浆中CD45、IL-10、IFN-γ质量浓度的差异均有统计学意义（F=916．545、1739．358、462．134，均P=0．000），其中与未诱导ADSCs＋羊膜移植组、单纯羊膜移植组和模型组比较，诱导ADSCs＋羊膜移植组CD45、IFN-γ质量浓度明显降低，而IL-10质量浓度明显升高，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。4个组兔房水中VEGF质量浓度的总体比较差异有统计学意义（F=129．126，P=0．000），其中诱导ADSCs＋羊膜移植组兔房水中VEGF质量浓度明显低于未诱导ADSCs＋羊膜移植组、单纯羊膜移植组和模型组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论CSCs诱导的ADSCs羊膜片移植法治疗兔角膜碱烧伤有较好的疗效，其作用机制可能是ADSCs在CECs诱导下分化为具有角膜上皮细胞特征的细胞，同时羊膜可减轻免疫炎症反应，抑制新生血管形成。

玻璃体腔内注射TA与雷珠单抗治疗CRVO继发黄斑水肿的对照研究

目的:比较曲安奈德(TA)与雷珠单抗(ranibizumab)治疗视网膜中央静脉阻塞(central retinal vein occlusion,CRVO)继发黄斑水肿的的临床疗效及安全性。方法:回顾性分析继发黄斑水肿的CRVO患者40例40眼。其中20例20眼接受玻璃体腔注射TA(1mg,0.1mL)治疗,其余20例20眼接受玻璃体腔注射雷珠单抗(0.5mg,0.05mL)治疗。观察两组治疗前及治疗后1,2wk;1,2,3,6mo患者最佳矫正视力、黄斑中心凹厚度(CMT)及眼压的改变。结果:TA组及雷珠单抗组于玻璃体腔注药1,2wk;1,2,3,6mo后最佳矫正视力较治疗前明显提高(P<0.05);但两组之间无明显差异(P>0.05)。两组于玻璃体注药后1,2wk;1,2,3,6mo,CMT较治疗前有明显降低(P<0.05),但两组之间无明显差异(P>0.05)。TA组玻璃体腔注药后2wk及4wk眼压较治疗前明显升高(P<0.05)。雷珠单抗组玻璃体腔注药后各时间点眼压均无明显升高(P>0.05)。注药后第1,2wk;2,3,6mo,TA组眼压改变与雷珠单抗组无明显差异(P>0.05),注药后1mo,TA组眼压改变要明显高于雷珠单抗组(P<0.05)。结论:玻璃体腔内注射雷珠单抗是目前CRVO继发黄斑水肿的有效而且安全的治疗手段。与TA相比其在提高最佳矫正视力及降低CMT的同时几乎不会发生眼部及全身并发症。

视神经急性损伤后Long Evans大鼠闪光视觉诱发电位的实验研究

目的 探索视神经急性损伤后LongEvans大鼠闪光视觉诱发电位 (F VEP)。方法 使用AVE80 0 0自动视觉电生理系统 ,检测正常及视神经急性损伤后LongEvans大鼠F VEP。结果 测出了正常LongEvans大鼠F VEP潜伏时和振幅值 ;检测了视神经急性不完全损伤后F VEP ,其特点为潜伏时延迟 ,振幅值降低 ,与正常相比有显著性差异 ;视神经横断后F VEP波形呈熄灭型。结论 LongEvans鼠视神经损伤模型可用于观察视神经保护效应的研究 ,F

重组人促红细胞生成素对视神经不完全损伤后视网膜神经元的保护作用

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinat human erythropoietin,rhEPO)对大鼠视神经(optic nerve,ON)不完全损伤后视网膜神经元凋亡的抑制作用和对视功能修复的影响。方法雄性Long Evans大鼠随机分为实验组和对照组,每组25只。制作ON不完全损伤模型。实验组和对照组按ON夹伤后不同时间分为伤后1d、3d、5d、7d、14d5个时间点。实验组伤后即时、3d、5d、7d,按5000U·kg-1体重腹腔内注射rhEPO;对照组注射等量生理盐水。伤后1d、3d、5d、7d、14d取材。取材前行闪光视觉诱发电位检测。应用TUNEL法检测视网膜神经元的凋亡。结果伤后7d、14d对照组视网膜凋亡细胞密集分布于视网膜节细胞层及内、外核层。实验组7d、14d视网膜凋亡细胞明显减少,视网膜节细胞层的凋亡细胞与对照组相比有非常显著差异(P<0.01)。2组闪光视觉诱发电位潜伏期各时间点组间比较无显著性差异(P>0.05)。伤后1d、3d、5d、7d实验组P1-N2波振幅和对照组相比无显著性差异(P>0.05);伤后14d时有显著差异(P<0.05)。结论rhEPO对ON不完全损伤后视网膜神经元的凋亡具有抑制作用,可以促进视功能的恢复。

超声乳化拦截劈核联合手法娩核在硬核性白内障手术中的应用

目的：探讨超声乳化劈核联合手法娩核在硬核性白内障手术中的应用效果。方法对所选年龄相关性白内障患者257例（300眼）,晶状体核硬度Ⅳ~Ⅴ级,随机分为A、B、C三组,A组给予超声乳化劈核联合手法娩核＋折叠人工晶体植入术；B组给予传统小切口白内障囊外摘除＋折叠人工晶体植入术；C组给予超声乳化摘除＋折叠人工晶体植入术,观察三组术后视力、并发症、术后角膜水肿等情况。结果经3种不同方法治疗后,三组患者视力均有所提高,A组术后视力提高情况较B组、C组更为明显,A组并发症如后囊膜破裂发生率及术后角膜水肿发生率均比B、C组低,差异有统计学意义（ P 〈0．05）。 A 组并发症发生率仅为4．31%,显著低于 B 组并发症发生率31．25%、C 组并发症发生率29．55%,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论硬核性白内障患者经超声乳化劈核联合手法娩核＋人工晶体植入治疗后可显著提高其临床疗效,减少手术并发症,保障患者预后及视觉质量。

骨科手术后下肢深静脉血栓的防治研究

目的探讨骨科手术后下肢深静脉血栓的防治。方法我院2010年12月—2012年12月收治骨科疾病患者310例,随机分为治疗组和对照组,每组各155例。治疗组患者给予相应的预防下肢深静脉血栓形成措施,而对照组患者则不采取任何预防措施,观察2组患者下肢深静脉血栓发生情况。结果治疗组患者发生下肢深静脉血栓15例,对照组患者发生下肢深静脉血栓50例,2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。经积极治疗,2组患者均痊愈,均未出现任何严重并发症。结论骨科手术后采取综合防治措施,可以提高治愈率,减少下肢深静脉血栓的发生率,提高患者的生活质量。

正常Long Evans大鼠不同发育阶段闪光视觉诱发电位波形的比较

目的 比较3组不同发育阶段正常Long Evans大鼠的闪光视觉诱发电位(Flash visual evoked potential,F-VEP)的异同,探索闪光视觉诱发电位波形在视觉发育过程中的变化规律。方法 随机抽取不同发育阶段的Long Evans大鼠50只,分成3组。每组大鼠用乙醚麻醉,使用视觉电生理检查系统采集其F-VEP。结果 未睁眼组未记录到大鼠明显的F-VEP波形,睁眼后可记录到大鼠F-VFP波形,但成年组和幼年组F-VEF主波(Pmax)的潜伏期和振幅有显著性差异,成年组与幼年组Long Evans大鼠相比,F-VEP主波(Pmax)的潜伏期缩短、振幅减小。结论 随着发育,Long Evans大鼠F-VEP主波(Pmax)的潜伏期缩短、振幅减小。F-VEP对大鼠视觉发育阶段的判断具有一定价值。

腰椎间盘突出并椎管狭窄的手术治疗探讨

目的探讨腰椎间盘突出并椎管狭窄的手术治疗。方法我院2010年1月—12月对38例腰椎间盘突出并椎管狭窄患者进行手术治疗,观察患者的临床症状改善情况,统计治疗效果。结果所有患者均比较顺利地完成手术,治愈22例,显效12例,有效4例,患者均未出现严重并发症。结论腰椎间盘突出并椎管狭窄的手术治疗效果比较理想,值得临床推广应用。

动物眼视网膜冰冻切片制作方法

目的探索动物眼视网膜的冰冻切片方法,以期得到高质量的切片。方法采用LeicaCM1900冰冻切片机,制作猪视网膜冰冻切片50余例,鼠视网膜冰冻切片130余例,观察其组织结构。结果去除其他组织及液体的影响是视网膜切片的关键,以保持良好的组织形态。结论所有组织和细胞切片的一个重要环节就是尽可能地保存组织和细胞以再现其生活状态,因此切片前固定、脱水及其他处理起着非常关键的作用。

VEGF基因RNA干扰质粒的构建与鉴定

目的构建干扰血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因RNA表达的重组质粒。方法设计3组针对VEGF基因的核糖核酸干扰(RNA interference,RNAi)序列,应用基因重组技术克隆入载体pcDNA3.1中,重组质粒分别命名为pcDNA3.1-VEGF-LH1、pcDNA3.1-VEGF-LH2和pcDNA3.1-VEGF-LH3,用DNA直接测序法和双酶切法鉴定构建的重组质粒。结果 DNA测序证实克隆入载体pcDNA3.1(-)中的序列正确,双酶切证实RNA干扰序列正确插入载体pcDNA3.1(-)。结论成功构建针对VEGF基因的RNAi质粒,为进一步研究该RNAi质粒在脉络膜新生血管形成中的作用奠定了基础。

光动力疗法联合玻璃体内注射Bevacizumab治疗病理性近视合并脉络膜新生血管

目的观察光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)联合玻璃体内注射Bevacizumab治疗病理性近视(pathologicalmyopia,PM)合并脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)的临床疗效和安全性。方法回顾性分析68例(68眼)PM患者的临床资料。先行PDT治疗后1周内,行玻璃体内注射Bevacizumab1.5mg(0.06mL)。术后1个月、3个月、末次随访时,复查最佳矫正视力、眼底彩照、FFA、ICGA、OCT。随访时,发现CNV部分闭合或仍有渗漏者给予再次玻璃体内注射Bevacizumab。比较联合治疗前后最佳矫正视力、眼底彩照、FFA、ICGA、OCT检查结果,观察其疗效及安全性。结果术后1个月、3个月和末次随访时最佳矫正视力均较治疗前明显提高(F=33.149,P=0.000)。治疗后末次随访时,视力提高2行以上43眼(63·24%),视力稳定22眼(32.35%),视力下降2行以上3眼(4.41%)。眼底检查及眼底照相显示病灶缩小,出血及神经上皮水肿完全吸收或消失。54眼(79.41%)CNV完全闭合,无荧光素渗漏;14眼(20.59%)CNV大部分闭合,轻微荧光素渗漏。所有治疗眼OCT显示神经上皮水肿消失,CNV强反射区域明显缩小。所有治疗眼均接受1次PDT治疗,36眼行1次玻璃体内注射Bevacizumab,20眼行2次,12眼行3次,Bevacizum ab玻璃体内注射平均次数1.65次。结论 PDT联合玻璃体内注射Bevacizum ab治疗PM合并CNV是安全有效的,可有效封闭CNV,提高视力。

培养大鼠视网膜神经节细胞的形态学与电生理学特性△

目的比较不同培养天数大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)形态学特性与电生理功能,探讨其形态与功能的最佳培养时期。方法采用出生后0dLong Evans大鼠,取视网膜培养神经节细胞,分别于培养后第1d、4d、7d3个时间点观察细胞形态,并行膜片钳全细胞记录研究其静息膜电位(resting membrane potential,RMP)和动作电位(action potential,AP)的阈值、幅度及波宽。结果共记录到53个RGCs,根据AP类型RGCs分为单峰型(39个)、瞬变型(11个)和持续型(3个),其中以单峰型为主(占73.6%)。培养1d RGCs不易诱发AP,多数细胞需增加刺激强度后方可诱发出AP;培养4d时绝大多数RGCs给予20PA的刺激即可诱发出AP;培养7d时虽较容易诱发AP,但由于此时细胞存活状态较差,部分细胞(共记录28个细胞,其中8个不能诱发AP)给予不同强度的刺激,均不能诱发出AP。不同培养时期的RGCs静息膜电位和AP的特性无显著差异。结论随着培养时间的延长RGCs形态逐渐趋于成熟,但电生理功能仍处于幼稚状态;培养4d的RGCs形态和电生理状态最好。

RCS大鼠视网膜色素变性过程中视网膜形态学研究

目的研究遗传性视网膜色素变性大鼠(RoyalCollegeofSurgeonsrat,RCSrat)在视网膜变性发展过程中视网膜形态学变化。方法RCS p+(视网膜含色素的变性大鼠)按出生后视网膜变性的发展状况分为变性早期(RCS15d)、中期(RCS30d)、晚期(RCS90d)3个时相点,分别采用相应时期的RCS rdy+p+(视网膜含色素的正常大鼠)作为对照组(controlgroups,C15d,C30d,C90d),每组5眼,取各组大鼠眼球进行视网膜切片,行HE染色,采用MIAS1000图像分析系统在400倍光镜下测视网膜外节(OS)、外核层(ONL)以及内核层(INL)厚度。结果①视网膜感光细胞随着病变的发展逐渐变性死亡,晚期视网膜色素上皮层和感光细胞层结构紊乱,但光镜下观察内核层、神经节细胞层仍保持较正常的形态。②与对照组比较,RCS大鼠视网膜色素变性过程中感光细胞外节膜盘堆积,外核层变薄,内核层在变性中期增厚,早期及晚期变薄。结论①RCS大鼠病变发展过程中视网膜各层神经元形态改变的不一致性。②变性中期视网膜内核层较对照组增厚,可能与该时期内核层神经元缺乏前级神经元的信号输入致细胞突起反应性增生,产生视网膜形态重构(remodeling)有关。

小型猪多焦视网膜电图的记录方法及特点

目的 研究小型猪多焦视网膜电图（multifocal electroretinogram,mfERG）的记录方法及特点.方法 应用罗兰电生理系统中的RETI scan软件对5只小型猪正常眼行mfERG检查,记录波形成分并进行统计学处理.结果 对P1波各项指标进行统计学分析见第1～6环反应密度逐渐下降,波幅值逐渐升高;N1波幅值和潜伏期差异无统计学意义（P＞0.05）;P1波上半野反应密度和波幅值较下半野高,峰潜时值较短;N1波上半野波幅值较下半野高,峰潜时值较长.结论 应用mfERG对实验动物进行检查,可以客观评估动物视网膜后极部功能变化.