灭活原生质体融合技术选育苏云金杆菌新菌种——原生质体融合条件的研究

利用双灭活原生质体融合技术获得了苏云金杆菌新菌株。着重对原生质体制备、再生、灭活及融合的实验条件进行了报道。

香菇柄水溶性多糖提取工艺的研究

研究了以香菇柄为原料，以工业化生产为目的的提取香菇柄水溶性多糖的新工艺，采用正交实验确定了提取工艺各项主要技术参数。本工艺香菇柄水溶性多糖提取率可达３．０９４％。

He-Ne激光在香菇速生高产菌株选育中的应用 Ⅰ菌株的诱变及选育

采用He－Ne激光（λ＝632．8nm）对2株香菇生产菌株分别进行了两次诱变处理，从中筛选出6株生长速率比亲本明显加快的变异株．所造变异株过氧化物酶活性与亲本相比有不同程度的提高（28．6％－66．7％），过氧化物酶活性提高程度与香菇菌丝生长速率呈相关性．所选变异株具有良好的遗传稳定性．

香菇膳食纤维挤压改性的研究

采用挤压改性方法处理两种不同工艺制备的香菇膳食纤维 ,在不同的挤压处理条件下 ,香菇膳食纤维的总膳食纤维的量均未改变 ,水溶性膳食纤维的含量分别提高 6%～ 1 5%和 2 %～ 8% ,被改性的物质主要是不溶性纤维中的半纤维素。

He-Ne激光诱变原生质体选育四环素高产菌的研究

采用He－Ne激光对金霉素链霉菌（S．aureofaciens）原生质体诱变处理，结果表明：He－Ne激光对该菌原生质体具有明显的致死作用．经激光处理的原生质体再生株产抗生素能力与亲本菌株相比，四环素产量平均提高9．32％，最高提高20．6％．

双亲灭活原生质体融合技术在苏云金杆菌菌种选育上的应用(Ⅱ)——融合产物的鉴定

在双亲灭活原生质体融合选育苏云金杆菌新菌株的过程中，最终筛选出一株毒力效价较双亲分别提高４１％和１１７％的新菌株３＃。该菌株的酯酶同工酶谱及晶体蛋白多肽均与双亲有显著不同。

He:Ne激光诱变的香菇变异株遗传稳定性分析

对三株香菇菌种采用He Ne激光 (λ =632 8nm)进行两次照射 ,筛选出三株比出发菌株菌丝生长速率分别提高 1 7 3%、73 7%和 42 6%的变异株 ,经传代培养及酯酶同工酶谱分析 ,变异株具有良好的遗传稳定性 表明激光作为微生物新型诱变因子与传统化因子相比 ,具有正变率高、回复突变率低。

氦氖激光辐照红霉素链霉菌诱变育种的研究

本文报道了氦氖激光对红霉素链霉菌孢子及原生质体的诱变效应，分离到红霉素发酵单位提高２７２％的辐照株，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法。

氦氖激光对链霉菌原生质体种间融合频率的影响

采用双亲灭活原生质体融合技术对金霉素链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓ）和龟裂链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｒｉｍｏｕｓ）种间原生质体融合进行了研究，分别利用聚乙二醇（ＰＥＧ）、ＨｅＮｅ激光以及ＰＥＧ与ＨｅＮｅ激光混合诱导融合，结果表明：ＰＥＧ及激光的双重诱导作用，使链霉菌原生质体种间融合频率得到显著提高．通过同工酶谱分析对融合子进行了初步鉴定．

酯酶同工酶技术在选育Bt新菌株中的应用

研究了苏云金杆菌亲本菌株及通过原生质体融合而获得的融合子的酯酶同工酶谱，通过比较分析，融合子的酯酶同工酶谱较之亲本菌株有显著变化。

链霉菌种间原生质体融合的研究(Ⅱ)——融合子56-2菌株的鉴定

通过金霉素链霉菌和龟裂链霉菌原生质体融合选育出的融合子５６－２菌株，其酯酶同工酶谱与双亲有显著差异，产抗生素能力及遗传稳定性均优于金霉素链霉菌３＃，发酵产物四环素符合中国药典的各项指标，并具有抗噬菌体Ｐ５，Ｐ８的能力。

香菇柄水溶性多糖LH-2的纯化及分析

由香菇柄提取、分级处理后获水溶性多糖ＬＨ－２。对ＬＨ－２经葡聚糖凝胶柱层析纯化后，用聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外光谱、红外光谱、薄层层析等方法分析表明：ＬＨ－２是一种具有β－糖苷键以葡萄糖为主的单一纯水溶性多糖。

激光对金霉素链霉菌孢子的诱变效应

研究了 He- Ne激光对金霉素 (S.aureofaciens,简称 Sa)孢子的诱变效应 ,结果表明 :小剂量He- Ne激光对 Sa孢子的萌发具有促进作用 ,大剂量 He- Ne激光的照射对 Sa的孢子具有致死作用 ;激光诱变 Sa孢子的正变率最高达到 6.6%。并且 。

He-Ne激光在香菇速生高产菌株选育中的应用 Ⅱ酯酶同工酶分析及中试栽培

采用He－Ne激光诱变选育的6株香菇菌种酯酶同工酶与亲本相比，酶带条纹数、迁移率等特征发生了明显的改变，表明了在激光作用下，香菇菌丝体遗传物质发生了变异．所选育的香菇新菌种中试栽培结果表明：新菌种在生产条件下，生长周期平均缩短20天以上，香菇产量最低平均提高10％以上，最高可提高22.5％．

氦氖激光在红霉素链霉菌和龟裂链霉菌灭活原生质体融合中的应用Ⅱ──融合子的分析鉴定

通过比较He－Ne激光和聚乙二醇（PEG）对红霉素链霉菌（s．erythreus简称SE）和龟裂链霉菌（S．rimosus简称SR）灭活原生质体的诱导融合，筛选得到几株红霉素产量与亲本相比有明显差异的融合子，通过对融合子酯酶同工酶谱、产抗能力及遗传稳定性分析，结果表明：融合子酯酶同工酶谱与亲本相比，酶带条纹数、迁移率等特征发生了显著的改变，表明其遗传物质发生了杂交重组，融合子产抗能力与亲本的相比，最多提高了28．04％，融合子具有良好的遗传稳定性．

四环素产生菌15^#菌株的选育

报道了采用放线菌菌丝准性杂交的方法选育出四环素产生菌１５￣＃新菌株。研究结果表明：新菌株与亲本相比较，具有良好的耐低溶解氧浓度的特点，即在相同条件下，增加摇瓶装量，新菌株发酵单位高出对照１７％。

利用菌丝体融合选育酿造新菌株Tu-3的研究

用米曲霉沪酿3.042和黑曲霉UV-11作为亲本,采用菌丝准性杂交方法获得一株可在酱油和食醋生产中通用的新菌株——Tu-3。研究结果表明:Tu-3三角瓶曲中性蛋白酶活力达5760单位/g,糖化酶达9900单位/g。Tu-3瓶曲与亲本3.042相比,中性蛋白酶活力提高19％,糖化酶活力提高204.6％,其他酶类活力也有不同程度的提高。

链霉菌种间原生质体融合的研究

金霉素链霉菌和龟裂链霉菌分别在含０．７５％，甘氨酸１．５０％的液体培养基中培养，对数生长中后期的菌丝体易于制备原生质体，当聚乙二醇（ＰＥＧ６０００）浓度为４０％，在５０℃下保温５ｍｉｎ，有效地诱导了两种原生质体的融合。用表型标记和间接选择的方法检出融合子，种间融合率为３．０５％。融合重组体与亲本在菌落形态，孢子形态，抗生素产量和抗噬菌体特性有显著的差异，不同重组体之间也表现了这些差异．

番茄茎内生细菌的分离鉴定及青枯病拮抗菌的筛选

采用化学法进行表面灭菌处理,运用平板涂布法及平板划线法从番茄茎内得到17株内生细菌.通过形态观察和生理生化指标鉴定,17株内生细菌分属于6个属,即葡萄球菌属(Staphylococcus)、短芽孢杆菌属(Brevi-bacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、棍状杆菌属(Clavibacter)、欧文氏菌属(Erwinia)和乳杆菌属(Lactobacillus).采用滤纸片法从17株内生菌中筛选出1株对青枯菌(Pseudomonas solanacearum)有拮抗作用的菌株,编号为TS-06,属于芽孢杆菌属(Bacillus).其抑菌圈半径为2.5 mm.

添加复合菌剂好氧发酵牛粪生产生物肥料的工艺优化

以新鲜牛粪和稻壳粉为发酵原料,进行牛粪好氧发酵试验,探讨生物有机肥生产的最佳工艺条件。首先选择复合微生物菌剂接种量、原料含水率、C/N比、翻堆次数4个因素进行单因素试验研究,初步确定四个因素的最适范围,然后对四个因素进行正交优化试验,确定最佳发酵工艺参数。在一次发酵结束后,加入固氮细菌、解磷细菌和解钾细菌等有益微生物,通过测定二次发酵过程中有益微生物的变化情况,确定二次发酵终止时间。试验结果表明,一次发酵的最优工艺参数为原料含水率65%,C/N30︰1,菌剂接种量3.5‰,翻堆次数4d一次。在一次发酵15d后加入固氮细菌、解磷细菌和解钾细菌等有益微生物,发酵6d,三种菌的活菌数达到稳定,可终止发酵。在此工艺条件下,物料升温快,最高温度高,高温持续时间长,腐熟度高,发酵周期缩短,生物有机肥中活菌数达到5.2×109cfu/g,发芽指数为96.8%。