心理支持疗法对成人急性白血病患者化疗后生活质量的影响

目的:观察心理支持疗法对成人急性白血病患者生活质量的影响,探讨其影响机制。方法:化疗后50例随机抽签分为观察组26例,对照组24例,观察组化疗后进行心理支持疗法,两组白血病患者均长期随访(1995-01/2002-06),生活质量参照PULSES的内容自拟生活质量调查问卷评定,心理健康水平应用汉密顿焦虑评定量表(HAMA)进行评定。结果:治疗组26例中,持续完全缓解大于5年13例,持续完全缓解未达5年的6例,复发7例;生活质量积分少于10分的13例,生活质量积分少于15分的7例,生活质量积分少于20分的6例。对照组24例中,持续完全缓解大于5年9例,持续完全缓解未达5年的5例,复发10例;生活质量积分少于10分8例,少于15分5例,少于20分11例。两组间的5年生存率有明显差异(χ2=5.1023,P<0.05),生存质量改善情况差异明显(t=-2.043,P<0.05)。结论:心理支持疗法对急性白血病患者的生活质量有较好的改善作用。

抗PTD-bcr/abl单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备单克隆抗体(mAb)并初步用于PTD-bcr/abl融合蛋白的研究,为慢性粒细胞白血病的免疫治疗提供实验依据。方法:在大肠杆菌中表达PTD-bcr/abl融合蛋白,用所获得的蛋白免疫BALB/c小鼠,常规收集小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,筛选杂交瘤细胞株的阳性克隆,并对其进行一系列鉴定。结果:(1)表达PTD-bcr/abl融合蛋白;(2)制备了抗PTD-bcr/abl融合蛋白mAb;(3)用mAb以多种方法检测PTD-bcr/abl融合蛋白,证实此抗体效价高,特异性强。结论:此抗体可用于PTD-bcr/abl融合蛋白的进一步研究。

85例急性白血病的流式分析

目的:评价流式细胞仪检测在急性白血病诊断中的意义。方法:应用形态学、组织化学以及流式细胞仪分析相结合的方法对85例急性白血病进行诊断。结果:AML、B-ALL、T-ALL分别有不同抗原的高表达;部分AML可以表达淋系抗原,而某些淋系AL亦可表达髓系抗原;形态学+组织化学诊断与流式细胞免疫分型符合率为89.4%。结论:流式细胞仪检测可提高急性白血病的确诊率。

人源性抗NS5B单链抗体的制备及鉴定

目的:运用核糖体展示技术制备抗HCV NS5B人源性单链抗体,并进行初步分析。方法:以HCV阳性患者的外周血单个核细胞为材料,扩增全套重链可变区和轻链可变区的基因,构建人单链抗体(scFv)核糖体展示文库;以NS5B蛋白为靶标筛选到scFv基因,并将其连接到pET16b载体并转化至大肠杆菌BL21,诱导表达scFv;对scFv基因测序和特异性分析。结果:成功构建抗HCV scFv库;获得2个具有较强结合活性的scFv;基因分析证实获得预期抗体。结论:成功制备了人源性抗NS5B scFv,为HCV的免疫治疗奠定了基础。

抗PTD-bcr/abl多克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备多克隆抗体并初步用于PTD -bcr/abl融合蛋白的研究 ,为慢性粒细胞白血病的免疫治疗提供实验依据。方法 在大肠杆菌中表达PTD -bcr/abl融合蛋白 ,用所获得的蛋白免疫家兔得到多克隆抗体 ,并用免疫组化染色 ,Western -blot等方法进行此抗体的鉴定。结果 ①表达PTD -bcr/abl融合蛋白。②制备了抗PTD -bcr/abl融合蛋白多克隆抗体。③并用多克隆抗体以多种方法 ,检测PTD-bcr/abl融合蛋白 ,证实此抗体效价高、特异性强。结论 此抗体可用于PTD

抗淋巴细胞球蛋白联合环孢菌素A治疗重型再生障碍性贫血

目的：观察抗淋巴细胞球蛋白（ALG）和环孢菌素A（CsA）联合治疗重型再生障碍性贫血（SAA）的疗效．方法：SAA患者13例，联合使用ALG10mg／（kg·d）静脉输注，1～5d；CsA3—5mg／（kg·d）口服，31d开始使用，疗程3mo，根据血清肌酐及胆红素浓度调节剂量．结果：目前存活患者10例，死亡3例．治疗1mo内即有血液学反应，脱离红细胞以及血小板输注的中位时间分别为52d和44d．治疗3mo血象可以满足基本生活需要．在治疗期间有少量并发症发生．结论：ALG联合CsA治疗SAA疗效明显．

体外诱导兔骨髓间充质干细胞定向分化为软骨细胞的实验研究

目的:研究兔骨髓间充质干细胞(BMMSCs)向软骨细胞分化的潜能。方法:将兔髂骨骨髓液进行原代和传代培养,以高糖DMEM无血清特定培养液诱导(含TGF-β210ng/ml、地塞米松7mol/L-10mol/L、维生素C50μmol/L),相差显微镜下观察细胞形态变化,免疫组织化学染色检测软骨特异性II型胶原表达。结果:BMMSCs诱导后细胞体外扩增能力显著降低,细胞形态由成纤维样细胞梭形向多角形、多边形或类圆形转变,诱导21天后细胞形态变化最为显著,II型胶原免疫组化染色深而均匀。结论:在适当条件下,体外培养的BMMSCs可定向诱导分化为软骨细胞。

LD-HA联合诱导治疗高白细胞性急性非淋巴细胞性白血病

目的:观察小剂量高三尖杉酯碱-阿糖胞苷(LD-HA)联合诱导治疗高白细胞性急性非淋巴细胞性白血病的疗效和不良反应。方法:将78例高白细胞性急性非淋巴细胞性白血病患者随机分为A组(41例)及B组(37例)。A组给予LD-HA(高三尖杉酯碱2mg/日,阿糖胞苷25mg2次/日,D1-14)联合诱导治疗。B组在应用羟基脲降白细胞的基础上进行常规化疗。结果:A组完全缓解(CR)率显著高于B组;死亡率明显降低。骨髓抑制程度两组无明显差异;心、肝、肾、消化道功能损害发生率A组低于B组。结论:LD-HA联合诱导治疗高白细胞性急性非淋巴细胞性白血病疗效好,不良反应轻。

芝麻开门的钥匙——个体化治疗之基因测序

2011年2月出版的《Nature》杂志刊载了前列腺癌基因测序研究的文章,题为"前列腺癌基因组的复杂性"。我们对该论文进行研读后,结合目前个体化治疗的研究进展进行了讨论并就此发表评论。我们撰写的comment于2011年2月15日发表在《Nature》杂志上。

以地西他滨为主的化疗方案治疗初治中、老年急性髓系白血病的临床研究

目的:研究以地西他滨为主的化疗方案治疗初治中、老年急性髓系白血病(AML)的安全性及有效性。方法:选取2013年1月-2016年12月就诊于本院年龄大于50岁的初诊急性髓系白血病患者(除M3)49例(所有患者均因各种原因不适合行异基因造血干细胞移植)。诱导治疗均采取以地西他滨为主的化疗方案,包括地西他滨单药(DAC)、地西他滨联合半量CAG方案(DAC-CAG)及地西他滨联合HAAG方案(DAC-HAAG)。在强化治疗方面对大部分患者继续应用原诱导方案治疗,部分患者给予标准"3+7"方案及中大剂量阿糖胞苷治疗。患者缓解后疗程数为2-4周期。结果:49例患者全部完成诱导治疗,完全缓解(CR)26例,部分缓解(PR)7例,无效(NR)16例,CR率53%,总有效率(ORR)67%。DAC组、DAC-CAG组及DAC-HAAG组有效率分别为17%、77%及63%。诱导过程感染14例,死亡1人,死因为肺部感染。诱导过程中平均输注红细胞9 U,输注血小板69U。白细胞恢复时间15 d,血小板恢复时间20 d。患者0.5、1和2年生存率分别为75%、30%及26%,0.5、1及2年无复发生存率分别为83%、54%及47%。诱导治疗是否能达到CR是影响预后的独立因素,而初诊时外周血白细胞和血小板数、年龄、诱导治疗效果、预后分层、化疗方案及诱导时是否合并肺炎均为非独立预后因素。结论:地西他滨联合化疗方案诱导效果优于单药,首次诱导治疗结果是独立的预后因素,而初诊时高白细胞、不良核型、合并症、伴有病态造血相关改变并不影响长期生存。DAC-CAG方案治疗有效率高,不良反应相对较少,适合应用于年龄大、合并症多、不适合常规方案化疗的中老年急性髓系白血病患者。

TATPTD-BCR/ABL SH3融合蛋白对白血病细胞系K562凋亡诱导作用

目的 研究基因重组 HIV- 1反式激活蛋白 (TAT)的蛋白转导域 (PTD)与 BCR/ ABL SH3结构域融合蛋白 (PTD-BCR/ ABL SH3)导入白血病细胞株 (K5 6 2 )的细胞后对 K5 6 2细胞增殖、凋亡的影响 .方法 通过台盼蓝拒染法、流式细胞术、透射电镜 (TEM)、激光共聚焦显微镜 (CL SM)及凋亡细胞原位标记 (TU NEL)等方法 ,测定了 PTD- BCR/ ABL SH3融合蛋白作用于 K5 6 2细胞后细胞的增殖、形态学变化、细胞凋亡和细胞周期参数的改变 .结果 ≥ 5μmol· L- 1 的 PTD-BCR/ ABL SH3融合蛋白对 K5 6 2细胞生长有抑制作用 ,浓度越高 ,抑制作用越强 ;苔盼蓝拒染法、细胞形态学、电镜超微结构、TUNEL原位杂交和 FCM检测的观察证明 ,PTD- BCR/ABL SH3融合蛋白可引起 K5 6 2细胞的凋亡和坏死 ;FCM检测显示该融合蛋白可将细胞阻滞在 G2 / M期 .结论 PTD-BCR/ ABL SH3融合蛋白进入 K5 6 2细胞后可引起细胞凋亡和坏死 ,导致细胞增殖抑制 .这一结果可能为慢性粒细胞性白血病 (CML )

PTD介导蛋白通过血脑屏障及其在脑组织中的分布

目的 :探讨HIV - 1TAT的蛋白转导结构域 (proteintransductiondomain ,PTD)介导的大分子蛋白通过血脑屏障 (blood -brainbarrier,BBB)的作用及其在脑组织中的分布。方法 :将纯化的PTD -BCR/ABL融合蛋白及伊文思蓝经尾静脉注入小鼠体内 ,制备全脑组织恒冷箱连续切片 ,用免疫组织化学染色法检测PTD -BCR/ABL融合蛋白在脑组织中的分布 ,用伊文思蓝作为指示剂检测PTD对BBB开放的影响。结果 :将其注射到小鼠体内后 ,在全脑组织细胞中均检测到PTD -BCR/ABL融合蛋白 ,呈非特异性组织分布 ;全脑组织除无BBB区域外 ,余脑区均无伊文思蓝渗入 ,PTD不引起BBB的开放。结论 :PTD可在体内特异性介导大分子蛋白通过血脑屏障 ,并在全脑组织细胞中分布 ,为肽类或蛋白类大分子药物通过BBB进入中枢神经系统 (cen tralnervousystern ,CNS)开辟了一条新的途径。

蛋白转导域介导BCR/ABL抗原对CML患者T细胞的活化作用

目的 :研究蛋白转导域 (PTD)介导的BCR/ABL抗原对慢性髓细胞白血病 (CML)患者T细胞的特异性活化作用。方法 :利用基因工程技术 ,将PTD基因与CMLb3a2bcr/abl基因融合并原核表达。将纯化的PTD BCR/ABL融合蛋白与CML患者外周血单个核细胞 (PBMC)体外共孵育 ,用流式细胞仪分别检测CD4 + 、CD8+ T细胞上活化抗原CD2 5的表达。结果 :终浓度为 10 0mg/L的PTD BCR/ABL抗原体外刺激 4d后 ,10例CML患者中 ,5例表现为CD8+ T细胞活化 ,2例表现为CD4 + T细胞活化 ,其中有 1例CD8+ 和CD4 + T细胞同时活化 ;而作为对照的BCR/ABL抗原刺激组无一例表现为CD8+ 或CD4 + T细胞活化。结论 :PTD能将外源性BCR/ABL抗原转导入抗原呈递细胞内 ,加工呈递后激活抗原特异性CD8+ 及CD4 + T细胞 ,为CML特异性CD8+ 、CD4 +

化疗联合微移植诱导治疗难治及复发急性髓系白血病疗效观察

目的研究化疗联合微移植方案治疗难治及复发急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的疗效。方法收集2014年2-8月在唐都医院血液内科采用化疗联合微移植方案诱导治疗的12例难治及复发急性髓系白血病患者,对治疗效果进行分析。结果 12例患者均完成1个疗程的化疗联合微移植,其中获得完全缓解3例,部分缓解3例,未缓解6例,有效率50%。达到完全缓解的3例中2例随后分别行二次微移植、异基因骨髓移植治疗,1例患者在第1次微移植后1个月时出现移植物抗宿主病(GVHD)导致死亡。部分缓解3例中2例行二次微移植治疗,仍未缓解,1例放弃治疗。6例未缓解中2例分别行二次微移植、异基因骨髓移植结果均未缓解,2例因并发症于院外死亡,2例放弃治疗。结论化疗联合微移植提高了难治、复发ANLL的缓解率,并且降低单纯化疗的毒性作用,是难治复发ANLL的较好的治疗手段。

TAT蛋白转导结构域介导的BCR/ABL融合蛋白在小鼠体内的跨膜转运

目的 探讨HIV 1反式激活蛋白 (TAT)的蛋白转导结构域 (PTD)介导的BCR ABL(TATPTD BCR ABL)融合蛋白在小鼠体内的跨膜转运和通过血脑屏障作用。方法 在大肠杆菌中表达PTD BCR ABL融合蛋白 ,经Ni NTA树脂亲合层析 ,纯化后的融合蛋白经小鼠尾静脉注射体内 ,用免疫组织化学方法对小鼠组织细胞内的PTD BCR ABL融合蛋白进行检测。结果 ①表达和纯化了分子量为 2 3× 10 3的PTD BCR ABL融合蛋白 ;②在接受融合蛋白的小鼠肝、脾、肾及心肌组织的细胞内检测到了PTD BCR ABL融合蛋白 ;③接受融合蛋白的小鼠脑组织细胞中可以检测到融合蛋白的存在。结论 PTD可在体内介导较大分子量的融合蛋白进入组织细胞和通过血脑屏障 。

非清髓单倍体造血干细胞移植联合格列卫治疗慢性粒细胞白血病

目的：探讨格列卫联合非清髓性单倍体造血干细胞移植在治疗慢性粒细胞白血病（CML）中的作用。方法：4例CML患者，采用移植前、后口服格列卫，以环磷酰胺、阿糖胞苷、抗胸腺细胞球蛋白、赛尼派、环胞素A等作非清髓性预处理的单倍体异基因外周血造血干细胞移植。结果：移植过程顺利，4例患者均植入成功，嵌合性植入。中性粒细胞〉0．5×10^9／L。天数，16（10～21）d；血小板〉20×10^9／L天数，10（4～15）d。3例发生I～Ⅱ度皮肤急性移植物抗宿主病（GVHD），1例发生Ⅳ度皮肤慢性GVHD。1例＋27d死于肺部感染并多脏器功能衰竭，1例死于Ⅳ度皮肤慢性GVHD并发感染。2例无病存活（随访16个月仍健在），且Ph^＋染色体，bcr-abl融合基因转阴。结论：非清髓单倍体造血干细胞移植联合格列卫治疗CML，具有降低移植前白血病细胞负荷，抑制残留白血病细胞增殖，促进供者完全嵌合状态的转变，增强抗移植物白血病（GVL）效应的作用，是一种有效的治疗方法，值得进一步临床研究。

7例格列卫联合非清髓造血干细胞移植治疗加速期、急变期CML的临床观察

目的:探讨非清髓造血干细胞移植联合格列卫在治疗慢性粒细胞性白血病(CML)中的作用。方法:7例CML患者(4例为AP,3例为BP),移植前、后口服格列卫(400～1500mg/d)治疗,预处理方案为福达华氟达拉宾、环磷酰胺和阿糖胞苷联合ATG和(或)CD3单抗。供者HLA配型2例完全相合,2例一个位点不相合,1例3个位点不相合的同胞及2例半匹配的母亲供者,干细胞来源为G-CSF动员的外周血造血干细胞(PBSC),GVHD预防以环孢菌素A和骁悉为主,部分病例加用MTX、CD3单抗及CD25单抗(塞尼派)。结果:7例患者均获得不同程度的嵌合状态,3例获得完全嵌合(FC>95%),4例获得44%～95%的混合嵌合,经调整免疫抑制剂、供者淋巴细胞/PBSC输注,格列卫治疗后,2例患者在移植后1.5～10个月转变为完全嵌合。移植后中性粒细胞>0.5×109/L天数,16d(范围10～21d);血小板大于20×109/L天数,10d(范围4～15d)。移植期间1例患者移植后45天因肠道感染,颅内出血死亡。另1例患者移植后27天因多脏器衰竭死亡。5例患者随访7～23个月,3例发生Ⅰ～ⅡGVHD,2例发生Ⅲ～ⅣGVHD,1例因cGVHD死于感染,余4例仍生存,平均无病生存12.2个月(7～17个月),Bcr/abl转阴时间33～130天,巡访期间无1例复发。结论:非清髓造血干细胞移植前、后联合格列卫治疗CML,具有降低移植前白血病细胞负荷,抑制残留白血病细胞增殖,促进供者完全嵌合状态的转变,增强GVL效应的作用,是一种安全有效的治疗方法,值得进一步临床研究。

自体外周血干细胞移植治疗非霍奇金淋巴瘤的外周血干细胞动员方案临床分析

本研究比较CEP+G-CSF与CVP+G-CSF动员方案对非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者外周血造血干细胞动员采集及造血恢复的效果。回顾性分析我科收治的57例NHL患者。分组采用CEP+G-CSF与CVP+G-CSF动员方案进行外周血干细胞动员采集,并于预处理结束后回输外周血干细胞,分析动员效果、不良反应及自身移植后造血恢复情况。结果表明:动员期间所有患者外周血白细胞(WBC)计数均降至1.0×109/L以下,血小板(Plt)数降至40×109/L以下。57例患者均采集成功,CEP+G-CSF动员方案组采集单个核细胞(MNC)数和CD34+细胞数明显高于CVP+G-CSF动员方案组(p=0.002和p=0.019)。预处理后所有病例均达到骨髓抑制,CEP+G-CSF和CVP+G-CSF动员方案组WBC数恢复到≥1.0×109/L的平均时间分别为11.4和12.3天(p﹥0.05),Plt数恢复到≥50×109/L的平均时间分别为18.6和19.3天(p﹥0.05)。结论:自体外周血干细胞移植治疗NHL疗效显著,CEP或CVP联合G-CSF方案行外周血干细胞动员均安全有效,临床效果满意,CEP+G-CSF方案动员外周血干细胞效果更好。

急性淋巴细胞白血病合并高嗜酸细胞综合征(附1例报告及文献综述)

目的:报告1例急性淋巴细胞白血病合并高嗜酸细胞综合征(ALL/Eo)患者并结合文献进行讨论.方法:男性患者17岁,因胸闷、低热1mo入院.除具有浅表淋巴结和脾脏肿大、胸骨压痛及骨髓原始幼稚淋巴细胞比例增高的ALL临床特点外,还具红斑性皮疹、血栓形成(脾)和心肌内膜纤维化典型HES的临床表现.结果:入院诊断ALL/Eo,由于经济困难放弃治疗,出院3mo后死亡.结论:ALL/Eo是一种罕见病例,一种独特的临床病理学类型,目前全世界报告有50余例.患者外周血持续性嗜酸细胞增高同时找不到幼稚淋巴细胞且无全血细胞减少,诊断时应全面考虑.